發(fā)布時(shí)間：2017-07-02 12:13

  本文關(guān)鍵詞：Dynamin 1的磷酸化狀態(tài)與癲癇發(fā)作的相關(guān)性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:Dynamin 1是一種與癲癇有關(guān)的內(nèi)吞相關(guān)蛋白。當(dāng)神經(jīng)元活性增高發(fā)生高頻放電時(shí),它可以被去磷酸化并介導(dǎo)一種大容量的突觸囊泡內(nèi)吞模式,以適應(yīng)陡然增高的突觸傳遞壓力,調(diào)節(jié)突觸囊泡循環(huán)。本研究旨在探討不同濃度的抑制劑和激動(dòng)劑干預(yù)dynmain 1是否會(huì)影響鋰-匹魯卡品誘導(dǎo)的在體大鼠癲癇發(fā)作及4-氨基吡啶(4-AP)誘導(dǎo)的離體腦片動(dòng)作電位(AP)的連續(xù)爆發(fā),進(jìn)一步明確急性癲癇發(fā)作后各實(shí)驗(yàn)組大鼠海馬中dynamin 1及磷酸化dynamin 1蛋白表達(dá)水平,以探究不同磷酸化狀態(tài)的dynamin 1與癲癇發(fā)作的關(guān)系。方法:本項(xiàng)研究通過側(cè)腦室注射dynamin 1抑制劑dynasore(不同濃度)和激動(dòng)劑磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸(PIP2),觀察鋰-匹魯卡品誘導(dǎo)的大鼠癲癇發(fā)作模型的行為學(xué)變化。采用western blot檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)大鼠海馬組織中dynamin 1蛋白及磷酸化dynamin 1蛋白表達(dá)水平。采用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)研究dynasore(不同濃度)和PIP2對(duì)4-AP誘發(fā)的大鼠離體腦片持續(xù)爆發(fā)的動(dòng)作電位的影響。結(jié)果:研究發(fā)現(xiàn)在匹魯卡品誘導(dǎo)的大鼠癲癇發(fā)作模型中,100及160μM(中濃度)的dynasore能有效抑制大鼠的癲癇發(fā)作:發(fā)作率降低,發(fā)作潛伏期延長(zhǎng),發(fā)作的嚴(yán)重程度減輕;PIP2對(duì)大鼠癲癇發(fā)作率和潛伏期無影響,但能加重癲癇發(fā)作的嚴(yán)重程度。Dynasore能使癲癇發(fā)作后大鼠海馬中dynamin 1磷酸化水平升高,也以中濃度組升高最明顯;但PIP2組海馬中dynamin 1的磷酸化水平卻無明顯改變。研究還發(fā)現(xiàn)用4-AP誘導(dǎo)大鼠海馬腦片CA1區(qū)椎體神經(jīng)元出現(xiàn)持續(xù)爆發(fā)的動(dòng)作電位后,濃度為10及20μM(中濃度)的dynasore能明顯減少動(dòng)作電位頻率;但PIP2對(duì)動(dòng)作電位頻率無影響。結(jié)論:我們的研究發(fā)現(xiàn)中濃度dynamin 1抑制劑dynasore能抑制體內(nèi)匹魯卡品誘導(dǎo)的大鼠癲癇發(fā)作(100、160μM),和體外4-AP誘發(fā)的腦片動(dòng)作電位的持續(xù)爆發(fā)(10、20μM),激動(dòng)劑PIP2能加重大鼠癲癇發(fā)作嚴(yán)重程度。100、160μM(中濃度)的dynasore還可升高急性癲癇發(fā)作后大鼠腦組織內(nèi)磷酸化dynamin 1蛋白水平而不是總的dynamin 1蛋白水平。然而激動(dòng)劑PIP2的使用卻未能對(duì)dynamin 1的表達(dá)產(chǎn)生影響。這些結(jié)果表明dynamin 1的磷酸化狀態(tài)與癲癇發(fā)作密切相關(guān),一定范圍內(nèi)抑制dynamin 1的活性可能改變其磷酸化和去磷酸化蛋白的表達(dá)水平,進(jìn)而影響突觸囊泡內(nèi)吞,導(dǎo)致神經(jīng)元興奮性改變,最終調(diào)節(jié)癲癇發(fā)作的進(jìn)程。
【關(guān)鍵詞】：dynamin 1 dynasore 磷脂酰肌醇-4 5-二磷酸 去磷酸化 癲癇發(fā)作
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R742.1
【目錄】：

• 英漢縮略語(yǔ)名詞對(duì)照4-5
• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-10
• 前言10-12
• 1 材料與方法12
• 2 大鼠行為學(xué)實(shí)驗(yàn)12
• 3 主要儀器與試劑12
• 4 氯化鋰-匹魯卡品模型及分組12-13
• 5 標(biāo)本收集處理13
• 6 主要儀器與試劑13
• 7 處理方法13-14
• 8 western blot 實(shí)驗(yàn)14
• 9 主要儀器與試劑14-15
• 10 主要液體及其制備15
• 11 制備蛋白樣品15-16
• 12 電泳16
• 13 轉(zhuǎn)膜和封閉16-17
• 14 一抗孵育17
• 15 二抗孵育17
• 16 化學(xué)顯影17-18
• 17 圖片分析18
• 18 全細(xì)胞膜片鉗實(shí)驗(yàn)18
• 19 主要儀器與試劑18
• 20 液體配方18-19
• 21 制備腦片19
• 22 記錄動(dòng)作電位19-20
• 23 數(shù)據(jù)處理20
• 24 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析20
• 25 結(jié)果20
• 26 Dynamin 1 抑制劑（不同濃度）及激動(dòng)劑對(duì)大鼠在體癇樣發(fā)作的影響20-21
• 27 Dynamin 1 抑制劑（不同濃度）及激動(dòng)劑對(duì) dynamin 1 蛋白及其磷酸化水平的影響21
• 28 Dynamin 1 抑制劑（不同濃度）、激動(dòng)劑對(duì)離體腦片神經(jīng)元爆發(fā)性動(dòng)作電位的影響21-22
• 29 討論22-25
• 全文總結(jié)25-26
• 參考文獻(xiàn)26-29
• 附圖29-33
• 文獻(xiàn)綜述33-39
• 參考文獻(xiàn)36-39
• 致謝39-40
• 碩士期間發(fā)表的論文40

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本文編號(hào)：509850