本文關(guān)鍵詞：脂多糖引起的炎癥反應(yīng)對血腦屏障的影響及其作用機制的探討，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:1.通過LPS引起的小鼠腦組織免疫炎癥反應(yīng)模型,觀察炎癥區(qū)域BBB滲漏的變化特征。2.研究LPS導(dǎo)致炎癥區(qū)域BBB滲漏過程中,星形膠質(zhì)細胞--VEGF-A通路的可能激活途徑。方法:1.體內(nèi)實驗部分:本實驗選用健康成年雄性C57B6小鼠,隨機分為4組,每組30只,分別為Sham組,LPS組,LRS(LPS抑制劑)+LPS組和Vandetanib(VEGFR2抑制劑)+LPS組。分組后,側(cè)腦室給予LPS、LRS和Vandetanib后測定EB滲透率、緊密連接蛋白表達水平和白蛋白的滲漏及腦水腫程度評價血腦屏障破壞情況。并檢測處理后星形膠質(zhì)細胞激活狀況,血管內(nèi)皮生長因子(VEGF-A)以及IL-1β的表達情況。2.體外實驗部分:本實驗培養(yǎng)原代星形膠質(zhì)細胞后分為4個組:分別為對照組(CON),LPS組,Sham組(正常BV2細胞上清液處理),LBS組(LPS刺激后BV2細胞的上清液處理)。分別在基因水平和蛋白水平上檢測VEGF-A的表達水平變化。結(jié)果:1.體內(nèi)實驗部分:側(cè)腦室注射LPS后,與正常對照組相比,小鼠腦組織含水增多,EB、白蛋白滲漏增加,緊密連接蛋白Claudin-5表達水平下降,星形膠質(zhì)標記物(GFAP)、細胞因子VEGF-A、IL-1β表達水平升高,以上差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。給予LRS預(yù)處理后,白蛋白、EB滲透,緊密連接蛋白Claudin-5和GFAP表達水平與sham組相比無明顯差異。給予Vandetanib預(yù)處理后,同LPS組相較,小鼠腦組織含水、EB滲透率、緊密連接蛋白Claudin-5表達水平、星形膠質(zhì)標記物(GFAP)表達水平、細胞因子VEGF-A、IL-1β表達水平均具有明顯變化,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。2.體外實驗部分:鑒定原代星形膠質(zhì)培養(yǎng)成功,LPS組與對照組相比,VEGF-A無論基因水平還是蛋白水平表達都無明顯改變(P0.05)。若直接給予正常培養(yǎng)的小膠質(zhì)細胞上清液,VEGF-A表達水平也未見明顯改變(P0.05)。但是給予LPS誘導(dǎo)激活的小膠質(zhì)細胞上清液刺激原代星形膠質(zhì)細胞,發(fā)現(xiàn)VEGF-A表達水平明顯上升,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1.腦室注射LPS能夠?qū)е翨BB的破壞、星形膠質(zhì)細胞活化及VEGF-A分泌增加,VEGF-A受體2阻斷劑Vandetanib能夠明顯減弱上述變化,提示LPS通過刺激星形膠質(zhì)細胞--VEGF-A通路導(dǎo)致BBB異常開放。2.LPS能夠直接作于星形膠質(zhì)細,引起星形膠質(zhì)細胞活化,但此時活化的星形膠質(zhì)細胞VEGF-A表達無明顯變化,說明LPS對星形膠質(zhì)細胞VEGF-A表達無直接影響;活化的小膠質(zhì)細胞上清液刺激,星形膠質(zhì)細胞VEGF-A表達則顯著增加。提示活化的小膠質(zhì)細胞在分泌少量VEGF-A的同時,還能夠分泌細胞因子(如IL-1β、TNF-α),從而激活星形膠質(zhì)細胞--VEGF-A通路,導(dǎo)致大量VEGF-A的釋放。
【關(guān)鍵詞】：脂多糖 血腦屏障 血管內(nèi)皮生長因子 星形膠質(zhì)細胞 炎癥反應(yīng)
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R741
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語10-11
• 前言11-13
• 研究現(xiàn)狀、成果11-12
• 研究目的、方法12-13
• 一、LPS對小鼠血腦屏障的影響及其作用機制的體內(nèi)研究13-31
• 1.1 材料和方法13-21
• 1.1.1 實驗動物13
• 1.1.2 主要實驗裝置及耗材13-14
• 1.1.3 實驗方法14-21
• 1.1.4 統(tǒng)計學(xué)處理21
• 1.2 結(jié)果21-28
• 1.2.1 干濕重法測得腦含水量情況21-22
• 1.2.2 側(cè)腦室注射后小鼠腦EB滲透率22-23
• 1.2.3 側(cè)腦室注射后小鼠腦免疫熒光23-25
• 1.2.4 WB測得相關(guān)蛋白表達情況25-28
• 1.3 討論28-30
• 1.3.1 血腦屏障與中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病28-29
• 1.3.2 血管內(nèi)皮生長因子對血腦屏障的影響29-30
• 1.4 小結(jié)30-31
• 二、LPS對星形膠質(zhì)細胞VEGF-A分泌的影響的體外研究31-46
• 2.1 材料和方法31-39
• 2.1.1 主要儀器31-32
• 2.1.2 主要試劑耗材32-33
• 2.1.3 實驗方法33-39
• 2.2 結(jié)果39-43
• 2.2.1 原代星形膠質(zhì)細胞培養(yǎng)結(jié)果39-40
• 2.2.2 各組星形膠質(zhì)細胞處理后VEGF-A mRNA表達情況40
• 2.2.3 ELISA測得VEGF-A蛋白表達情況40-41
• 2.2.4 測得相關(guān)蛋白表達情況41-43
• 2.3 討論43-45
• 2.4 小結(jié)45-46
• 結(jié)論46-47
• 參考文獻47-54
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明54-55
• 綜述 血腦屏障和神經(jīng)免疫55-66
• 綜述參考文獻59-66
• 致謝66-67
• 個人簡歷67

  本文關(guān)鍵詞：脂多糖引起的炎癥反應(yīng)對血腦屏障的影響及其作用機制的探討，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：495788