本文關(guān)鍵詞：葉酸聯(lián)合神經(jīng)干細(xì)胞治療小鼠局灶性腦缺血損傷，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：第一部分:新生小鼠脊髓神經(jīng)干細(xì)胞分離、培養(yǎng)及鑒定目的:分離培養(yǎng)新生小鼠脊髓神經(jīng)干細(xì)胞,并進(jìn)行增殖、分化的鑒定,為進(jìn)一步研究脊髓神經(jīng)干細(xì)胞的生物學(xué)特性奠定基礎(chǔ)。方法:取6只新生小鼠,無菌預(yù)冷條件下取脊髓組織,采用機(jī)械分離吹打成單個(gè)細(xì)胞后,利用無血清進(jìn)行原代細(xì)胞培養(yǎng),采用機(jī)械法聯(lián)合胰酶消化法對(duì)原代細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)和傳代。應(yīng)用免疫熒光法行巢蛋白,CD133染色,微管蛋白Ⅲ(β-tubulinⅢ),膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)染色,對(duì)脊髓神經(jīng)干細(xì)胞及分化產(chǎn)物進(jìn)行鑒定。結(jié)果:從小鼠脊髓中分離的神經(jīng)干細(xì)胞具有克隆的能力,克隆細(xì)胞呈巢蛋白、CD133免疫反應(yīng)陽性;加入胎牛血清可誘導(dǎo)分化為β-tubulinⅢ和GFAP陽性細(xì)胞。結(jié)論:機(jī)械法分離新生小鼠脊髓細(xì)胞。使用機(jī)械法復(fù)合酶消化法對(duì)原代細(xì)胞進(jìn)行傳代和培養(yǎng),能夠成功獲得脊髓神經(jīng)干細(xì)胞,能夠誘導(dǎo)其分化為神經(jīng)元和星型膠質(zhì)細(xì)胞。第二部分:葉酸聯(lián)合脊髓神經(jīng)干細(xì)胞治療小鼠局灶性腦梗目的:研究葉酸聯(lián)合脊髓神經(jīng)干細(xì)胞對(duì)缺血性腦卒中小鼠的治療作用,探討其可能的機(jī)制。方法:60只昆明雄鼠隨機(jī)分為3組,腦梗組(A組),腦梗+神經(jīng)干細(xì)胞移植組(B組),腦梗+神經(jīng)干細(xì)胞+葉酸注射組(C組)。在腦梗前28d和腦梗后23天C組給予葉酸懸液。每周測(cè)量各組血清葉酸濃度。用光栓法建立腦缺血小鼠動(dòng)物模型。在腦梗后第2天移植BrdU標(biāo)記的神經(jīng)干細(xì)胞。在小鼠腦梗后第21天,隨機(jī)從各組取5只小鼠,切片后行尼氏染色和Fluo-Jade染色,同時(shí)計(jì)數(shù)神經(jīng)元。用免疫雙標(biāo)法檢測(cè)雙陽性細(xì)胞數(shù);用疫印跡法檢測(cè)腦組織中凋亡基因Bax、Caspsse-3的表達(dá)。結(jié)果:與A組和B組相比,C組血清葉酸濃度明顯增高。與A組相比,C組頂葉皮質(zhì)神經(jīng)元數(shù)增多(P0.05);與A組和B組相比,C組免疫熒光雙標(biāo)陽性細(xì)胞數(shù)高(P0.05);與A組相比,C組凋亡蛋白Bax、Caspsse-3含量下降(P0.05)。結(jié)論:通過補(bǔ)充葉酸,能提高小鼠血清血清葉酸濃度,促進(jìn)移植神經(jīng)干細(xì)胞存活和分化,同時(shí)減輕中樞神經(jīng)中細(xì)胞的凋亡,從而達(dá)到治療作用。
【關(guān)鍵詞】：脊髓 神經(jīng)干細(xì)胞 培養(yǎng) 鑒定 葉酸 局灶性腦梗死
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R743.3
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-7
• 縮略詞表7-10
• 前言10-11
• 第一章 新生小鼠脊髓神經(jīng)干細(xì)胞分離、培養(yǎng)及鑒定11-20
• 引言11
• 1.1 材料與方法11-13
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、實(shí)驗(yàn)試劑及實(shí)驗(yàn)儀器11
• 1.1.2 取材及神經(jīng)干細(xì)胞原代培養(yǎng)11-12
• 1.1.3 脊髓神經(jīng)干細(xì)胞傳代培養(yǎng)12
• 1.1.4 脊髓神經(jīng)干細(xì)胞的鑒定(CD133免疫化學(xué)染色)12-13
• 1.1.5 Brd U摻入法脊髓神經(jīng)干細(xì)胞增殖能力鑒定13
• 1.1.6 脊髓神經(jīng)干細(xì)胞分化培養(yǎng)及鑒定13
• 1.2 結(jié)果13-18
• 1.2.1 原代培養(yǎng)結(jié)果13-14
• 1.2.2 傳代培養(yǎng)結(jié)果14-15
• 1.2.3 脊髓神經(jīng)干細(xì)胞的鑒定結(jié)果15-16
• 1.2.4 Brd U脊髓神經(jīng)干細(xì)胞的鑒定結(jié)果16-17
• 1.2.5 脊髓神經(jīng)干細(xì)胞分化培養(yǎng)及鑒定結(jié)果17-18
• 1.3 討論18-20
• 第二章 葉酸聯(lián)合神經(jīng)干細(xì)胞治療小鼠缺血性腦卒中20-33
• 引言20
• 2.1 材料和方法20-26
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、實(shí)驗(yàn)試劑及實(shí)驗(yàn)儀器20-21
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)分組及實(shí)驗(yàn)流程21-22
• 2.1.3 局灶性腦梗模型制備22-23
• 2.1.4 移植前神經(jīng)干細(xì)胞制備23
• 2.1.5 神經(jīng)干細(xì)胞腦內(nèi)移植23
• 2.1.6 灌流取材切片23-24
• 2.1.7 尼氏染色、Fluo-Jade染色及頂葉皮質(zhì)神經(jīng)數(shù)目24
• 2.1.8 免疫熒光雙標(biāo)法檢測(cè)雙陽性細(xì)胞24-25
• 2.1.9 免疫印跡法檢測(cè)腦組織凋亡基因的表達(dá)25
• 2.1.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析25-26
• 2.2 結(jié)果26-32
• 2.3 討論32-33
• 參考文獻(xiàn)33-39
• 綜述：神經(jīng)遞質(zhì)對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞增殖的調(diào)控39-45
• 參考文獻(xiàn)43-45
• 在學(xué)期間的研究成果45-46
• 致謝46

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本文編號(hào)：462744