本文關鍵詞：間歇性低氧對大鼠腦缺血后空間記憶及海馬區(qū)神經細胞自噬的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的探討間歇性低氧對大鼠腦缺血后空間記憶及海馬區(qū)神經細胞自噬的影響。方法本實驗將健康雄性Wistar大鼠120只采用數字隨機法分成正常對照組(n=20)(UC組)、單純腦缺血組(n=20)(IR組)、間歇性低氧7天腦缺血組(IH7+IR組)(n=20)、間歇性低氧14天腦缺血組(IH14+IR組)(n=20)、間歇性低氧21天腦缺血組(IH21+IR組)(n=20)、間歇性低氧21天腦缺血+m TOR抑制劑組(抑制劑組)(n=20)。間歇性低氧動物進入低氧艙,低氧箱內氧氣濃度維持在5%~21%,形成周期循環(huán),在低氧艙內的暴露時間為7小時/天,分別持續(xù)7天、14天、21天。分別在低氧7天、14天、21天后將間歇性低氧動物制備腦缺血再灌注模型。采用改良的Pulsinelli四血管阻斷法制備腦缺血再灌注模型,分別于缺血15min再灌注后6h、24h兩個時間點處死大鼠。缺血再灌注后24h采用水迷宮法檢測各組大鼠視空間記憶能力。各組大鼠的標本采用蘇木素-伊紅染色法(HE)檢測大鼠腦組織海馬區(qū)神經細胞形態(tài)的改變;采用免疫組織化學法和RT-PCR技術檢測大鼠腦組織海馬區(qū)PI3K、m TOR、Beclin-1蛋白表達情況。應用SPSS17.0統(tǒng)計分析軟件對所得實驗數據進行重復設計的單因素方差分析,以P0.05,表示差異具有統(tǒng)計學意義。結果1水迷宮檢測結果:與UC組比較,IR組大鼠水迷宮檢測的逃避潛伏期時間延長、穿臺次數減少,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);與IR組比較,各組間歇性低氧+腦缺血大鼠的逃避潛伏期時間均延長、穿臺次數均減少,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);與IH7+IR組比較,IH14+IR組、IH21+IR組大鼠的逃避潛伏期時間均延長、穿臺次數減少,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);與IH14+IR組比較,IH21+IR組大鼠的逃避潛伏期時間均延長、穿臺次數減少,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);與IH21+IR組比較,抑制劑組大鼠的逃避潛伏期時間減少、穿臺次數增加,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。2細胞形態(tài)改變結果(HE染色):UC組大鼠海馬區(qū)神經細胞排列整齊,結構正常,胞漿淡染,核仁明顯;與UC組比較,IR組大鼠6h海馬區(qū)神經細胞結構形態(tài)即出現(xiàn)改變,表現(xiàn)為細胞失去正常結構,部分細胞形態(tài)異常;24h海馬區(qū)可見腫脹的神經元,間質水腫,結構疏松,神經元和膠質細胞出現(xiàn)核固縮、深染,也有部分神經元胞核完全消失,形成空泡狀結構;各組間歇性低氧+腦缺血大鼠腦組織神經細胞破壞嚴重,均可見較多變性壞死的神經細胞,海馬區(qū)可見腫脹的神經元,間質水腫,結構疏松,神經元和膠質細胞出現(xiàn)核固縮、深染,也有部分神經元胞核完全消失,形成空泡狀結構。與IR組比較,各組間歇性低氧+腦缺血組大鼠神經元存活率均下降,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);與IH7+IR組比較,IH14+IR組、IH21+IR組大鼠神經元存活率均下降,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);與IH14+IR組比較,IH21+IR組大鼠海馬區(qū)神經元存活率降低,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);與IH21+IR組比較,抑制劑組大鼠神經元存活率升高,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。3 PI3K免疫組化和RT-PCR分析結果:免疫組化結果:PI3K免疫組化染色呈棕黃色,定位于細胞胞漿中,主要表達在神經元細胞中;UC組偶見免疫陽性細胞,淡染,神經細胞排列整齊,結構正常,核仁明顯;與UC組比較,IR組大鼠在各時間點(6h、24h)染色增強,免疫陽性細胞數均增加,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);與IR組比較,各組間歇性低氧+腦缺血組大鼠在各時間點(6h、24h)染色增強,免疫陽性細胞數均增加,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);與IH7+IR組比較,IH14+IR組、IH21+IR組大鼠在各時間點(6h、24h)染色增強,免疫陽性細胞數增加,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);與IH14+IR組比較,IH21+IR組大鼠在各時間點(6h、24h)染色減弱,免疫陽性細胞數減少,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);與IH21+IR組比較,抑制劑組大鼠染色增強,免疫陽性細胞數增加,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。RT-PCR分析結果:與UC組比較,IR組大鼠在各時間點(6h、24h)PI3K蛋白的表達明顯增加,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。與IR組比較,各組間歇性低氧+腦缺血組大鼠在各時間點(6h、24h)PI3K蛋白表達明顯升高,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);與IH7+IR組比較,IH14+IR組、IH21+IR組大鼠在各時間點(6h、24h)PI3K蛋白的表達增多,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);與IH14+IR組比較,IH21+IR組大鼠在各時間點(6h、24h)PI3K蛋白的表達減少,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);與IH21+IR組比較,抑制劑組大鼠PI3K蛋白的表達增多,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。4 m TOR免疫組化和RT-PCR分析結果:免疫組化結果:m TOR免疫組化染色呈棕黃色,定位于細胞胞漿中,主要表達在神經元細胞中;UC組偶見免疫陽性細胞,淡染,神經細胞排列整齊,結構正常,核仁明顯;與UC組比較,IR組大鼠6h、24h染色均增強,免疫陽性細胞數均增加,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);與IR組比較,各組間歇性低氧+腦缺血組大鼠在各時間點(6h、24h)染色增強,免疫陽性細胞數均增加,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);與IH7+IR組比較,IH14+IR組、IH21+IR組大鼠在各時間點(6h、24h)染色增強,免疫陽性細胞數增加,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);與IH14+IR組比較,IH21+IR組大鼠在各時間點(6h、24h)染色增強,免疫陽性細胞數增加,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);與IH21+IR組比較,抑制劑組大鼠染色減弱,免疫陽性細胞數減少,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。RT-PCR分析結果:與UC組比較,IR組大鼠在在各時間點(6h、24h)m TOR蛋白的表達明顯增加,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。與IR組比較,各組間歇性低氧+腦缺血組大鼠在各時間點(6h、24h)m TOR蛋白表達明顯升高,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);與IH7+IR組比較,IH14+IR組、IH21+IR組大鼠在各時間點(6h、24h)m TOR蛋白的表達增多,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);與IH14+IR組比較,IH21+IR組大鼠在各時間點(6h、24h)m TOR蛋白的表達增多,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);與IH21+IR組比較,抑制劑組大鼠m TOR蛋白的表達減少,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。5 beclin1免疫組化和RT-PCR分析結果:免疫組化結果:beclin1免疫組化染色呈棕黃色,定位于細胞胞漿中,主要表達在神經元細胞中;UC組偶見免疫陽性細胞,淡染,神經細胞排列整齊,結構正常,核仁明顯;與UC組比較,IR組大鼠6h、24h染色均增強,免疫陽性細胞數均增加,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);與IR組比較,各組間歇性低氧+腦缺血組大鼠在各時間點(6h、24h)染色增強,免疫陽性細胞數均增加,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);與IH7+IR組比較,IH14+IR組、IH21+IR組大鼠在各時間點(6h、24h)染色增強,免疫陽性細胞數增加,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);與IH14+IR組比較,IH21+IR組大鼠在各時間點(6h、24h)染色減弱,免疫陽性細胞數減少,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);與IH21+IR組比較,抑制劑組大鼠染色增強,免疫陽性細胞數增加,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。RT-PCR分析結果:與UC組比較,IR組大鼠在在各時間點(6h、24h)beclin1蛋白的表達明顯增加,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。與IR組比較,各組間歇性低氧+腦缺血組大鼠在各時間點(6h、24h)beclin1蛋白表達明顯升高,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);與IH7+IR組比較,IH14+IR組、IH21+IR組大鼠在各時間點(6h、24h)beclin1蛋白的表達增多,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);與IH14+IR組比較,IH21+IR組大鼠在各時間點(6h、24h)beclin1蛋白的表達減少,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);與IH21+IR組比較,抑制劑組大鼠beclin1蛋白的表達增多,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結論1間歇性低氧可加重腦缺血再灌大鼠的空間記憶損傷。2間歇性低氧可影響腦缺血后海馬區(qū)神經細胞自噬程度,加重腦缺血后的神經損傷,與PI3K/m TOR通路活化有關。
【關鍵詞】：間歇性低氧 自噬 mTOR PI3K 腦缺血再灌注
【學位授予單位】：華北理工大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R743
【目錄】：

• 摘要4-8
• Abstract8-14
• 英文縮略表14-15
• 引言15-17
• 第1章 實驗研究17-50
• 1.1 材料與方法17-25
• 1.1.1 材料17-19
• 1.1.2 實驗方法與步驟19-25
• 1.1.3 統(tǒng)計學方法25
• 1.2 結果25-36
• 1.2.1 間歇性低氧對腦缺血再灌注大鼠空間記憶的影響25-27
• 1.2.2 HE染色結果27-29
• 1.2.3 間歇性低氧對各組大鼠PI3K蛋白的影響29-31
• 1.2.4 間歇性低氧對各組大鼠m-TOR蛋白的影響31-34
• 1.2.5 間歇性低氧對各組大鼠beclin1蛋白的影響34-36
• 1.3 討論36-43
• 1.3.1 間歇性低氧對大鼠腦缺血再灌注后空間記憶的影響36-39
• 1.3.2 間歇性低氧對大鼠腦缺血再灌注后自噬的影響39-42
• 1.3.3 PI3K/mTOR通路在間歇性低氧大鼠腦缺血后自噬中的作用42-43
• 1.4 小結43-44
• 參考文獻44-50
• 第2章 綜述50-55
• 2.1 腦缺血再灌注損傷50-51
• 2.2 自噬51
• 2.3 自噬在腦缺血再灌注損傷中的作用51-53
• 2.3.1 自噬可減輕腦缺血再灌注造成的損傷51-52
• 2.3.2 自噬可加重缺血再灌注造成的腦損傷52-53
• 參考文獻53-55
• 結論55-56
• 致謝56-57
• 導師簡介57-58
• 作者簡介58-59
• 學位論文數據集59

【參考文獻】

中國期刊全文數據庫 前2條

1 王萬山,樸仲賢,王啟偉,Han Ming-Hu,樸英杰;大鼠坐骨神經再生過程中許旺氏細胞的自噬作用(英文)[J];中國臨床康復;2004年02期

2 ;阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征診斷依據和療效評定標準暨懸雍垂腭咽成形術適應證(杭州)[J];中華耳鼻咽喉科雜志;2002年06期

  本文關鍵詞：間歇性低氧對大鼠腦缺血后空間記憶及海馬區(qū)神經細胞自噬的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：403192