本文關(guān)鍵詞：間歇性低氧對(duì)大鼠腦缺血后空間記憶及海馬區(qū)神經(jīng)細(xì)胞自噬的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的探討間歇性低氧對(duì)大鼠腦缺血后空間記憶及海馬區(qū)神經(jīng)細(xì)胞自噬的影響。方法本實(shí)驗(yàn)將健康雄性Wistar大鼠120只采用數(shù)字隨機(jī)法分成正常對(duì)照組(n=20)(UC組)、單純腦缺血組(n=20)(IR組)、間歇性低氧7天腦缺血組(IH7+IR組)(n=20)、間歇性低氧14天腦缺血組(IH14+IR組)(n=20)、間歇性低氧21天腦缺血組(IH21+IR組)(n=20)、間歇性低氧21天腦缺血+m TOR抑制劑組(抑制劑組)(n=20)。間歇性低氧動(dòng)物進(jìn)入低氧艙,低氧箱內(nèi)氧氣濃度維持在5%~21%,形成周期循環(huán),在低氧艙內(nèi)的暴露時(shí)間為7小時(shí)/天,分別持續(xù)7天、14天、21天。分別在低氧7天、14天、21天后將間歇性低氧動(dòng)物制備腦缺血再灌注模型。采用改良的Pulsinelli四血管阻斷法制備腦缺血再灌注模型,分別于缺血15min再灌注后6h、24h兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)處死大鼠。缺血再灌注后24h采用水迷宮法檢測(cè)各組大鼠視空間記憶能力。各組大鼠的標(biāo)本采用蘇木素-伊紅染色法(HE)檢測(cè)大鼠腦組織海馬區(qū)神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)的改變;采用免疫組織化學(xué)法和RT-PCR技術(shù)檢測(cè)大鼠腦組織海馬區(qū)PI3K、m TOR、Beclin-1蛋白表達(dá)情況。應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)分析軟件對(duì)所得實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行重復(fù)設(shè)計(jì)的單因素方差分析,以P0.05,表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果1水迷宮檢測(cè)結(jié)果:與UC組比較,IR組大鼠水迷宮檢測(cè)的逃避潛伏期時(shí)間延長(zhǎng)、穿臺(tái)次數(shù)減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與IR組比較,各組間歇性低氧+腦缺血大鼠的逃避潛伏期時(shí)間均延長(zhǎng)、穿臺(tái)次數(shù)均減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與IH7+IR組比較,IH14+IR組、IH21+IR組大鼠的逃避潛伏期時(shí)間均延長(zhǎng)、穿臺(tái)次數(shù)減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與IH14+IR組比較,IH21+IR組大鼠的逃避潛伏期時(shí)間均延長(zhǎng)、穿臺(tái)次數(shù)減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與IH21+IR組比較,抑制劑組大鼠的逃避潛伏期時(shí)間減少、穿臺(tái)次數(shù)增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2細(xì)胞形態(tài)改變結(jié)果(HE染色):UC組大鼠海馬區(qū)神經(jīng)細(xì)胞排列整齊,結(jié)構(gòu)正常,胞漿淡染,核仁明顯;與UC組比較,IR組大鼠6h海馬區(qū)神經(jīng)細(xì)胞結(jié)構(gòu)形態(tài)即出現(xiàn)改變,表現(xiàn)為細(xì)胞失去正常結(jié)構(gòu),部分細(xì)胞形態(tài)異常;24h海馬區(qū)可見(jiàn)腫脹的神經(jīng)元,間質(zhì)水腫,結(jié)構(gòu)疏松,神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞出現(xiàn)核固縮、深染,也有部分神經(jīng)元胞核完全消失,形成空泡狀結(jié)構(gòu);各組間歇性低氧+腦缺血大鼠腦組織神經(jīng)細(xì)胞破壞嚴(yán)重,均可見(jiàn)較多變性壞死的神經(jīng)細(xì)胞,海馬區(qū)可見(jiàn)腫脹的神經(jīng)元,間質(zhì)水腫,結(jié)構(gòu)疏松,神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞出現(xiàn)核固縮、深染,也有部分神經(jīng)元胞核完全消失,形成空泡狀結(jié)構(gòu)。與IR組比較,各組間歇性低氧+腦缺血組大鼠神經(jīng)元存活率均下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與IH7+IR組比較,IH14+IR組、IH21+IR組大鼠神經(jīng)元存活率均下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與IH14+IR組比較,IH21+IR組大鼠海馬區(qū)神經(jīng)元存活率降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與IH21+IR組比較,抑制劑組大鼠神經(jīng)元存活率升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3 PI3K免疫組化和RT-PCR分析結(jié)果:免疫組化結(jié)果:PI3K免疫組化染色呈棕黃色,定位于細(xì)胞胞漿中,主要表達(dá)在神經(jīng)元細(xì)胞中;UC組偶見(jiàn)免疫陽(yáng)性細(xì)胞,淡染,神經(jīng)細(xì)胞排列整齊,結(jié)構(gòu)正常,核仁明顯;與UC組比較,IR組大鼠在各時(shí)間點(diǎn)(6h、24h)染色增強(qiáng),免疫陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)均增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與IR組比較,各組間歇性低氧+腦缺血組大鼠在各時(shí)間點(diǎn)(6h、24h)染色增強(qiáng),免疫陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)均增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與IH7+IR組比較,IH14+IR組、IH21+IR組大鼠在各時(shí)間點(diǎn)(6h、24h)染色增強(qiáng),免疫陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與IH14+IR組比較,IH21+IR組大鼠在各時(shí)間點(diǎn)(6h、24h)染色減弱,免疫陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與IH21+IR組比較,抑制劑組大鼠染色增強(qiáng),免疫陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。RT-PCR分析結(jié)果:與UC組比較,IR組大鼠在各時(shí)間點(diǎn)(6h、24h)PI3K蛋白的表達(dá)明顯增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。與IR組比較,各組間歇性低氧+腦缺血組大鼠在各時(shí)間點(diǎn)(6h、24h)PI3K蛋白表達(dá)明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與IH7+IR組比較,IH14+IR組、IH21+IR組大鼠在各時(shí)間點(diǎn)(6h、24h)PI3K蛋白的表達(dá)增多,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與IH14+IR組比較,IH21+IR組大鼠在各時(shí)間點(diǎn)(6h、24h)PI3K蛋白的表達(dá)減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與IH21+IR組比較,抑制劑組大鼠PI3K蛋白的表達(dá)增多,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4 m TOR免疫組化和RT-PCR分析結(jié)果:免疫組化結(jié)果:m TOR免疫組化染色呈棕黃色,定位于細(xì)胞胞漿中,主要表達(dá)在神經(jīng)元細(xì)胞中;UC組偶見(jiàn)免疫陽(yáng)性細(xì)胞,淡染,神經(jīng)細(xì)胞排列整齊,結(jié)構(gòu)正常,核仁明顯;與UC組比較,IR組大鼠6h、24h染色均增強(qiáng),免疫陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)均增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與IR組比較,各組間歇性低氧+腦缺血組大鼠在各時(shí)間點(diǎn)(6h、24h)染色增強(qiáng),免疫陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)均增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與IH7+IR組比較,IH14+IR組、IH21+IR組大鼠在各時(shí)間點(diǎn)(6h、24h)染色增強(qiáng),免疫陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與IH14+IR組比較,IH21+IR組大鼠在各時(shí)間點(diǎn)(6h、24h)染色增強(qiáng),免疫陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與IH21+IR組比較,抑制劑組大鼠染色減弱,免疫陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。RT-PCR分析結(jié)果:與UC組比較,IR組大鼠在在各時(shí)間點(diǎn)(6h、24h)m TOR蛋白的表達(dá)明顯增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。與IR組比較,各組間歇性低氧+腦缺血組大鼠在各時(shí)間點(diǎn)(6h、24h)m TOR蛋白表達(dá)明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與IH7+IR組比較,IH14+IR組、IH21+IR組大鼠在各時(shí)間點(diǎn)(6h、24h)m TOR蛋白的表達(dá)增多,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與IH14+IR組比較,IH21+IR組大鼠在各時(shí)間點(diǎn)(6h、24h)m TOR蛋白的表達(dá)增多,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與IH21+IR組比較,抑制劑組大鼠m TOR蛋白的表達(dá)減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。5 beclin1免疫組化和RT-PCR分析結(jié)果:免疫組化結(jié)果:beclin1免疫組化染色呈棕黃色,定位于細(xì)胞胞漿中,主要表達(dá)在神經(jīng)元細(xì)胞中;UC組偶見(jiàn)免疫陽(yáng)性細(xì)胞,淡染,神經(jīng)細(xì)胞排列整齊,結(jié)構(gòu)正常,核仁明顯;與UC組比較,IR組大鼠6h、24h染色均增強(qiáng),免疫陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)均增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與IR組比較,各組間歇性低氧+腦缺血組大鼠在各時(shí)間點(diǎn)(6h、24h)染色增強(qiáng),免疫陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)均增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與IH7+IR組比較,IH14+IR組、IH21+IR組大鼠在各時(shí)間點(diǎn)(6h、24h)染色增強(qiáng),免疫陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與IH14+IR組比較,IH21+IR組大鼠在各時(shí)間點(diǎn)(6h、24h)染色減弱,免疫陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與IH21+IR組比較,抑制劑組大鼠染色增強(qiáng),免疫陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。RT-PCR分析結(jié)果:與UC組比較,IR組大鼠在在各時(shí)間點(diǎn)(6h、24h)beclin1蛋白的表達(dá)明顯增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。與IR組比較,各組間歇性低氧+腦缺血組大鼠在各時(shí)間點(diǎn)(6h、24h)beclin1蛋白表達(dá)明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與IH7+IR組比較,IH14+IR組、IH21+IR組大鼠在各時(shí)間點(diǎn)(6h、24h)beclin1蛋白的表達(dá)增多,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與IH14+IR組比較,IH21+IR組大鼠在各時(shí)間點(diǎn)(6h、24h)beclin1蛋白的表達(dá)減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與IH21+IR組比較,抑制劑組大鼠beclin1蛋白的表達(dá)增多,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論1間歇性低氧可加重腦缺血再灌大鼠的空間記憶損傷。2間歇性低氧可影響腦缺血后海馬區(qū)神經(jīng)細(xì)胞自噬程度,加重腦缺血后的神經(jīng)損傷,與PI3K/m TOR通路活化有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：間歇性低氧 自噬 mTOR PI3K 腦缺血再灌注
【學(xué)位授予單位】：華北理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R743
【目錄】：

• 摘要4-8
• Abstract8-14
• 英文縮略表14-15
• 引言15-17
• 第1章 實(shí)驗(yàn)研究17-50
• 1.1 材料與方法17-25
• 1.1.1 材料17-19
• 1.1.2 實(shí)驗(yàn)方法與步驟19-25
• 1.1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法25
• 1.2 結(jié)果25-36
• 1.2.1 間歇性低氧對(duì)腦缺血再灌注大鼠空間記憶的影響25-27
• 1.2.2 HE染色結(jié)果27-29
• 1.2.3 間歇性低氧對(duì)各組大鼠PI3K蛋白的影響29-31
• 1.2.4 間歇性低氧對(duì)各組大鼠m-TOR蛋白的影響31-34
• 1.2.5 間歇性低氧對(duì)各組大鼠beclin1蛋白的影響34-36
• 1.3 討論36-43
• 1.3.1 間歇性低氧對(duì)大鼠腦缺血再灌注后空間記憶的影響36-39
• 1.3.2 間歇性低氧對(duì)大鼠腦缺血再灌注后自噬的影響39-42
• 1.3.3 PI3K/mTOR通路在間歇性低氧大鼠腦缺血后自噬中的作用42-43
• 1.4 小結(jié)43-44
• 參考文獻(xiàn)44-50
• 第2章 綜述50-55
• 2.1 腦缺血再灌注損傷50-51
• 2.2 自噬51
• 2.3 自噬在腦缺血再灌注損傷中的作用51-53
• 2.3.1 自噬可減輕腦缺血再灌注造成的損傷51-52
• 2.3.2 自噬可加重缺血再灌注造成的腦損傷52-53
• 參考文獻(xiàn)53-55
• 結(jié)論55-56
• 致謝56-57
• 導(dǎo)師簡(jiǎn)介57-58
• 作者簡(jiǎn)介58-59
• 學(xué)位論文數(shù)據(jù)集59

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 王萬(wàn)山,樸仲賢,王啟偉,Han Ming-Hu,樸英杰;大鼠坐骨神經(jīng)再生過(guò)程中許旺氏細(xì)胞的自噬作用(英文)[J];中國(guó)臨床康復(fù);2004年02期

2 ;阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征診斷依據(jù)和療效評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)暨懸雍垂腭咽成形術(shù)適應(yīng)證(杭州)[J];中華耳鼻咽喉科雜志;2002年06期

  本文關(guān)鍵詞：間歇性低氧對(duì)大鼠腦缺血后空間記憶及海馬區(qū)神經(jīng)細(xì)胞自噬的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：403192