目的：本實(shí)驗(yàn)研究環(huán)狀啞鈴形圈套寡核苷酸（Circular dumbbelloligodeoxynucleotides，CD-ODN）轉(zhuǎn)染對(duì)核因子-κB （Nuclear factor kappa B，NF-κB）活性和神經(jīng)母細(xì)胞瘤SK-N-SH細(xì)胞增殖及細(xì)胞凋亡的影響，進(jìn)一步檢測(cè)凋亡抑制蛋白Survivin的表達(dá)情況，探索神經(jīng)母細(xì)胞瘤基因治療的新靶點(diǎn)。 方法： 電穿孔法將CD-ODN轉(zhuǎn)染神經(jīng)母細(xì)胞瘤SK-N-SH細(xì)胞系，以未轉(zhuǎn)染基因的SK-N-SH細(xì)胞為空白對(duì)照。本實(shí)驗(yàn)大致分三個(gè)部分：1、轉(zhuǎn)染CD-ODN后NF-κB活性的變化：免疫激光共聚焦顯微鏡下觀察細(xì)胞內(nèi)NF-κB核轉(zhuǎn)位情況變化；酶聯(lián)免疫分析法（Enzyme-linked immunoassay，ELISA）檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)NF-κB p65表達(dá)的變化。2、轉(zhuǎn)染CD-ODN后SK-N-SH細(xì)胞生物活性的變化：四甲基偶氮唑藍(lán)比色法(methylthiazolyl tetrazolium，MTT)檢測(cè)轉(zhuǎn)染CD-ODN后SK-N-SH細(xì)胞體外增殖活性的變化；流式細(xì)胞儀技術(shù)（Flow cytometry，F(xiàn)CM）檢測(cè)轉(zhuǎn)染CD-ODN對(duì)SK...

【文章頁(yè)數(shù)】：49 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖1退火后CD-ODN環(huán)狀啞鈴形結(jié)構(gòu)示意圖

Tween-2020μl加去離子水至20ml)抗體稀釋液：10×TBS2ml脫脂奶粉1gTween-2020μl加去離子水至20ml實(shí)驗(yàn)步驟和方法）CD-ODN的合成人NF-κB設(shè)計(jì)的CD-ODN參考文獻(xiàn)[14]。-ODN序列：5’-CGGAAAGTC....

圖2NF-κBp65表達(dá)情況（*示p＜0.05）

圖2NF-κBp65表達(dá)情況（*示p＜0.05）此結(jié)果表明，轉(zhuǎn)染24h后，正常對(duì)照組與轉(zhuǎn)染CD-ODN組NF-κBp65的表達(dá)差異無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，隨著轉(zhuǎn)染時(shí)間的延長(zhǎng)，48h以及72h后兩組結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，轉(zhuǎn)染CD-ODN組NF-κBp6....

圖3激光共聚焦下CD-ODN-N和SK-N-SH中NF-κB核轉(zhuǎn)位情況（200×）

圖3激光共聚焦下CD-ODN-N和SK-N-SH中NF-κB核轉(zhuǎn)位情況（200×）紅色為PI染核，藍(lán)色熒光為DAPI標(biāo)記的抗NF-κB抗體，紫色熒光為進(jìn)入細(xì)胞核后NF-κB紅色熒光與藍(lán)色熒光重疊所致。結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組CD-ODN細(xì)胞無(wú)NF-κB....

圖4兩組細(xì)胞體外增殖生長(zhǎng)曲線

圖4兩組細(xì)胞體外增殖生長(zhǎng)曲線結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組SK-N-SH細(xì)胞的吸光度值A(chǔ)與空白對(duì)照組SK-N-SH細(xì)胞之間存在顯著性差異（p＜0.05）。以正常SK-N-SH細(xì)胞為對(duì)照，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞在第2448和72小時(shí)的細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率分別為12%、29%和42%....

本文編號(hào)：4030034