發(fā)布時間：2025-02-05 15:10

　　目的：本實驗研究環(huán)狀啞鈴形圈套寡核苷酸（Circular dumbbelloligodeoxynucleotides，CD-ODN）轉(zhuǎn)染對核因子-κB （Nuclear factor kappa B，NF-κB）活性和神經(jīng)母細胞瘤SK-N-SH細胞增殖及細胞凋亡的影響，進一步檢測凋亡抑制蛋白Survivin的表達情況，探索神經(jīng)母細胞瘤基因治療的新靶點。 方法： 電穿孔法將CD-ODN轉(zhuǎn)染神經(jīng)母細胞瘤SK-N-SH細胞系，以未轉(zhuǎn)染基因的SK-N-SH細胞為空白對照。本實驗大致分三個部分：1、轉(zhuǎn)染CD-ODN后NF-κB活性的變化：免疫激光共聚焦顯微鏡下觀察細胞內(nèi)NF-κB核轉(zhuǎn)位情況變化；酶聯(lián)免疫分析法（Enzyme-linked immunoassay，ELISA）檢測細胞內(nèi)NF-κB p65表達的變化。2、轉(zhuǎn)染CD-ODN后SK-N-SH細胞生物活性的變化：四甲基偶氮唑藍比色法(methylthiazolyl tetrazolium，MTT)檢測轉(zhuǎn)染CD-ODN后SK-N-SH細胞體外增殖活性的變化；流式細胞儀技術(shù)（Flow cytometry，F(xiàn)CM）檢測轉(zhuǎn)染CD-ODN對SK...

【文章頁數(shù)】：49 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1退火后CD-ODN環(huán)狀啞鈴形結(jié)構(gòu)示意圖

Tween-2020μl加去離子水至20ml)抗體稀釋液：10×TBS2ml脫脂奶粉1gTween-2020μl加去離子水至20ml實驗步驟和方法）CD-ODN的合成人NF-κB設(shè)計的CD-ODN參考文獻[14]。-ODN序列：5’-CGGAAAGTC....

圖2NF-κBp65表達情況（*示p＜0.05）

圖2NF-κBp65表達情況（*示p＜0.05）此結(jié)果表明，轉(zhuǎn)染24h后，正常對照組與轉(zhuǎn)染CD-ODN組NF-κBp65的表達差異無明顯統(tǒng)計學意義，隨著轉(zhuǎn)染時間的延長，48h以及72h后兩組結(jié)果具有統(tǒng)計學意義，轉(zhuǎn)染CD-ODN組NF-κBp6....

圖3激光共聚焦下CD-ODN-N和SK-N-SH中NF-κB核轉(zhuǎn)位情況（200×）

圖3激光共聚焦下CD-ODN-N和SK-N-SH中NF-κB核轉(zhuǎn)位情況（200×）紅色為PI染核，藍色熒光為DAPI標記的抗NF-κB抗體，紫色熒光為進入細胞核后NF-κB紅色熒光與藍色熒光重疊所致。結(jié)果顯示實驗組CD-ODN細胞無NF-κB....

圖4兩組細胞體外增殖生長曲線

圖4兩組細胞體外增殖生長曲線結(jié)果顯示，實驗組SK-N-SH細胞的吸光度值A(chǔ)與空白對照組SK-N-SH細胞之間存在顯著性差異（p＜0.05）。以正常SK-N-SH細胞為對照，實驗組細胞在第2448和72小時的細胞生長抑制率分別為12%、29%和42%....

本文編號：4030034