目的：研究miR-200a在膠質(zhì)瘤細胞遷移侵襲中的作用及其機制。 方法：結(jié)合本課題組前期的研究結(jié)果，利用real-time PCR檢測miR-200a在膠質(zhì)瘤細胞系和組織中的表達；將miR-200a的模擬物及抑制劑轉(zhuǎn)染U87細胞后，進行細胞增殖實驗、細胞劃痕實驗、Transwell遷移和侵襲實驗，分別檢測miR-200a對膠質(zhì)瘤細胞的增殖、遷移及侵襲能力的影響。利用在線miRNA靶基因預(yù)測軟件預(yù)測miR-200a的靶基因，并用DAVID在線基因功能軟件進行歸類分析；利用Westernblot實驗和熒光素酶報告系統(tǒng)對所預(yù)測的潛在靶基因進行實驗驗證。 結(jié)果：Real-time PCR結(jié)果提示，相對于低級別膠質(zhì)瘤組織和細胞，miR-200a在高級別膠質(zhì)瘤組織和細胞中顯著高表達，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，這與本課題組前期的人膠質(zhì)瘤細胞miRNA芯片結(jié)果一致。過表達miR-200a可促進U87細胞的遷移侵襲能力(P<0.05)，而抑制miR-200a的表達則結(jié)果相反。過表達或抑制miR-200a對U87細胞增殖能力均無顯著影響，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。利用DA...

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學(xué)位級別】：碩士

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縮略詞表
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英文摘要
前言
第一部分 Real-time PCR 檢測 miR-200a 在不同級別膠質(zhì)瘤細胞和組織中的表達
    1 材料
        1.1 實驗材料
        1.2 主要儀器
        1.3 主要試劑及常用溶液配制
        1.4 主要試劑的配制
    2 實驗方法
        2.1 細胞培養(yǎng)
        2.2 膠質(zhì)瘤細胞和組織的 miRNA 提取、逆轉(zhuǎn)錄和 Real-time PCR
    3 結(jié)果
第二部分 miR-200a 對 U87 細胞遷移、侵襲及增值的影響
    1 材料
        1.1 實驗材料
        1.2 主要儀器
        1.3 主要試劑及常用溶液配制
        1.4 主要試劑的配制
    2 實驗方法
        2.1 細胞培養(yǎng)
        2.2 miR-200a 抑制劑和模擬物轉(zhuǎn)染 U87 細胞
        2.3 Transwell 細胞侵襲和遷移實驗
        2.4 劃痕實驗
        2.5 MTS 檢測 miR-200a 對 U87 細胞增值的影響
        2.6 MTS檢測miR-200a對U87細胞增值的影響
        2.7 統(tǒng)計學(xué)處理
    3 結(jié)果
第三部分 miR-200a 的靶基因預(yù)測、篩選和驗證
    1 材料
        1.1 實驗材料
        1.2 主要儀器
        1.3 主要試劑及常用溶液配制
        1.4 主要試劑的配制(其余同前)
    2 實驗方法
        2.1 miR-200a 的靶基因預(yù)測、歸類分析
        2.2 Western blot 檢測 miR-200a 是否調(diào)節(jié)目標(biāo)靶基因蛋白表達
        2.3 使用熒光素酶報告系統(tǒng)分析驗證 miR-200a 的潛在靶基因
    3 結(jié)果
        3.1 miR-200a的靶基因預(yù)測、歸類分析
        3.2 Western blot分析驗證miR-200a調(diào)控靶基因PTEN和NCAM1的蛋白表達
        3.3 使用熒光素酶報告系統(tǒng)分析驗證miR-200a的潛在靶基因
討論
結(jié)論
參考文獻
致謝
綜述
    參考文獻



本文編號：4004426