[目的]miR-29包括miR-29b和miR-29c三個(gè)亞型。近來(lái)的研究表明,這三種微小RNA (miRNA)均是抑瘤miRNA (TS-miRNA),其低表達(dá)是一些顱外惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展的重要因素。而膠質(zhì)瘤細(xì)胞有無(wú)miR-29a、 miR-29c表達(dá)異常減少,它們表達(dá)異常減少與膠質(zhì)瘤發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系怎樣,均尚不清楚。在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中,DNA甲基轉(zhuǎn)移酶3A/3B (DNMT3A、 DNMT3B)是重要的DNA甲基轉(zhuǎn)移酶,可通過(guò)催化DNA特定區(qū)段從頭甲基化參與表觀遺傳學(xué)調(diào)控,其過(guò)表達(dá)可引起重要抑瘤基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化,由此引起的抑瘤基因表達(dá)下調(diào)可導(dǎo)致腫瘤發(fā)生。有線索顯示,在顱外惡性腫瘤細(xì)胞中miR-29a、miR-29b、miR-29c均可特異性敲低DNMT3A和DNMT3B的表達(dá)：但二者在膠質(zhì)瘤細(xì)胞中的調(diào)控關(guān)系如何,以及miR-29a、miR-29b、miR-29c低表達(dá)或缺失對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞DNMT3A和DNMT3B表達(dá)有無(wú)影響,尚有待進(jìn)一步探討。我們以人膠質(zhì)瘤組織標(biāo)本和人非腫瘤對(duì)照腦組織標(biāo)本及U87MG和U251膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系為研究對(duì)象,通過(guò)檢測(cè)分析miR-29各亞型在不同級(jí)別膠質(zhì)...

【文章頁(yè)數(shù)】：66 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
縮略語(yǔ)府號(hào)說(shuō)明
前言
    研究現(xiàn)狀、成果
    研究目的、方法
材料與方法
    1. 主要實(shí)驗(yàn)儀器
    2. 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1 組織標(biāo)本
        2.2 人膠質(zhì)瘤細(xì)胞系和培養(yǎng)基
        2.3 原位雜交探針、Mimics及PCR引物序列(見(jiàn)表2-5)
        2.4 主要試劑
    3. 實(shí)驗(yàn)方法
        3.1 組織微陣列原位雜交技術(shù)
        3.2 三種miR-29 Mimics轉(zhuǎn)染效率的鑒定
        3.3 三種miR-29靶mRNA的生物信息學(xué)預(yù)測(cè)
        3.4 膠質(zhì)瘤細(xì)胞中三種miR-29靶mRNA的鑒定
        3.5 DNMT3A及DNMT3B mRNA的qRT-PCR檢測(cè)
        3.6 DNMT3A和DNMT3B蛋白表達(dá)的Westernblot檢測(cè)
        3.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
結(jié)果
    1. 對(duì)照組及各膠質(zhì)瘤組三種miR-29表達(dá)水平的比較
    2. 轉(zhuǎn)染Mimics可有效提高膠質(zhì)瘤細(xì)胞三種miR-29的總含量
    3. 三種miR-29靶mRNA的生物信息學(xué)預(yù)測(cè)結(jié)果
    4. 膠質(zhì)瘤細(xì)胞中三種miR-29靶mRNA的鑒定
        4.1 重組熒光素酶表達(dá)質(zhì)粒的提取與鑒定
        4.2 各組U87MG及U251細(xì)胞熒光素酶活性檢測(cè)結(jié)果
    5. miR-29家族調(diào)控膠質(zhì)瘤細(xì)胞DNMT3A及DNMT3B表達(dá)
        5.1 miR-29家族誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤細(xì)胞DNMT3A和DNMT3B mRNA降解
        5.2 miR-29家族下調(diào)膠質(zhì)瘤細(xì)胞DNMT3A和DNMT3B蛋白表達(dá)
    6. miR-29抑制劑上調(diào)膠質(zhì)瘤細(xì)胞DNMT3A和DNMT3B表達(dá)
        6.1 miR-29抑制劑上調(diào)DNMT3A和DNMT3B mRNA表達(dá)水平
        6.2 miR-29抑制劑上調(diào)DNMT3A和DNMT3B蛋白表達(dá)水平
討論
    1. miR-29家族成員在膠質(zhì)瘤細(xì)胞中表達(dá)異常降低
    2. 在膠質(zhì)瘤細(xì)胞DNMT3A和DNMT3B均是miR-29家族的靶基因
    3. 在膠質(zhì)瘤細(xì)胞miR-29家族可敲低DNMT3A或DNMT3B表達(dá)
    4. 抑制miR-29活性可上調(diào)膠質(zhì)瘤細(xì)胞DNMT3A和DNMT3B表達(dá)
    5. 總結(jié)與展望
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
發(fā)表論文和參加科研情況說(shuō)明
綜述
    綜述參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號(hào)：3977619