發(fā)布時間：2024-05-19 04:50

　　[目的]miR-29包括miR-29b和miR-29c三個亞型。近來的研究表明,這三種微小RNA (miRNA)均是抑瘤miRNA (TS-miRNA),其低表達是一些顱外惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展的重要因素。而膠質(zhì)瘤細胞有無miR-29a、 miR-29c表達異常減少,它們表達異常減少與膠質(zhì)瘤發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系怎樣,均尚不清楚。在哺乳動物細胞中,DNA甲基轉(zhuǎn)移酶3A/3B (DNMT3A、 DNMT3B)是重要的DNA甲基轉(zhuǎn)移酶,可通過催化DNA特定區(qū)段從頭甲基化參與表觀遺傳學(xué)調(diào)控,其過表達可引起重要抑瘤基因啟動子區(qū)甲基化,由此引起的抑瘤基因表達下調(diào)可導(dǎo)致腫瘤發(fā)生。有線索顯示,在顱外惡性腫瘤細胞中miR-29a、miR-29b、miR-29c均可特異性敲低DNMT3A和DNMT3B的表達：但二者在膠質(zhì)瘤細胞中的調(diào)控關(guān)系如何,以及miR-29a、miR-29b、miR-29c低表達或缺失對膠質(zhì)瘤細胞DNMT3A和DNMT3B表達有無影響,尚有待進一步探討。我們以人膠質(zhì)瘤組織標本和人非腫瘤對照腦組織標本及U87MG和U251膠質(zhì)母細胞瘤細胞系為研究對象,通過檢測分析miR-29各亞型在不同級別膠質(zhì)...

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
縮略語府號說明
前言
    研究現(xiàn)狀、成果
    研究目的、方法
材料與方法
    1. 主要實驗儀器
    2. 實驗材料
        2.1 組織標本
        2.2 人膠質(zhì)瘤細胞系和培養(yǎng)基
        2.3 原位雜交探針、Mimics及PCR引物序列(見表2-5)
        2.4 主要試劑
    3. 實驗方法
        3.1 組織微陣列原位雜交技術(shù)
        3.2 三種miR-29 Mimics轉(zhuǎn)染效率的鑒定
        3.3 三種miR-29靶mRNA的生物信息學(xué)預(yù)測
        3.4 膠質(zhì)瘤細胞中三種miR-29靶mRNA的鑒定
        3.5 DNMT3A及DNMT3B mRNA的qRT-PCR檢測
        3.6 DNMT3A和DNMT3B蛋白表達的Westernblot檢測
        3.7 統(tǒng)計學(xué)方法
結(jié)果
    1. 對照組及各膠質(zhì)瘤組三種miR-29表達水平的比較
    2. 轉(zhuǎn)染Mimics可有效提高膠質(zhì)瘤細胞三種miR-29的總含量
    3. 三種miR-29靶mRNA的生物信息學(xué)預(yù)測結(jié)果
    4. 膠質(zhì)瘤細胞中三種miR-29靶mRNA的鑒定
        4.1 重組熒光素酶表達質(zhì)粒的提取與鑒定
        4.2 各組U87MG及U251細胞熒光素酶活性檢測結(jié)果
    5. miR-29家族調(diào)控膠質(zhì)瘤細胞DNMT3A及DNMT3B表達
        5.1 miR-29家族誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤細胞DNMT3A和DNMT3B mRNA降解
        5.2 miR-29家族下調(diào)膠質(zhì)瘤細胞DNMT3A和DNMT3B蛋白表達
    6. miR-29抑制劑上調(diào)膠質(zhì)瘤細胞DNMT3A和DNMT3B表達
        6.1 miR-29抑制劑上調(diào)DNMT3A和DNMT3B mRNA表達水平
        6.2 miR-29抑制劑上調(diào)DNMT3A和DNMT3B蛋白表達水平
討論
    1. miR-29家族成員在膠質(zhì)瘤細胞中表達異常降低
    2. 在膠質(zhì)瘤細胞DNMT3A和DNMT3B均是miR-29家族的靶基因
    3. 在膠質(zhì)瘤細胞miR-29家族可敲低DNMT3A或DNMT3B表達
    4. 抑制miR-29活性可上調(diào)膠質(zhì)瘤細胞DNMT3A和DNMT3B表達
    5. 總結(jié)與展望
結(jié)論
參考文獻
發(fā)表論文和參加科研情況說明
綜述
    綜述參考文獻
致謝



本文編號：3977619