目的:研究線粒體移植對(duì)人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞U87輻射敏感性的影響及其機(jī)理。方法:提取人星形膠質(zhì)細(xì)胞(Human Astrocytes,HA)的線粒體與U87細(xì)胞共培養(yǎng),并給予X射線輻照。然后通過Western Blot檢測(cè)U87細(xì)胞中的線粒體凋亡通路關(guān)鍵蛋白質(zhì)Cyto-C、Bax和Bcl-2的表達(dá)量;使用Annexin V/PI雙染法檢測(cè)U87細(xì)胞的凋亡情況;采用RT-CES系統(tǒng)對(duì)U87細(xì)胞的活力進(jìn)行評(píng)價(jià);通過細(xì)胞克隆實(shí)驗(yàn)比較各組細(xì)胞的增殖狀況;采用鬼筆環(huán)肽染色法觀察絲狀偽足在細(xì)胞表面的分布量;通過Western Blot檢測(cè)U87細(xì)胞中Fascin、MMP-2的表達(dá)量,通過劃痕實(shí)驗(yàn)和體外侵襲實(shí)驗(yàn)檢驗(yàn)U87細(xì)胞的體外轉(zhuǎn)移能力。結(jié)果:第一,線粒體被提取出HA細(xì)胞后仍具有活力,Mito-Tracker Red標(biāo)記的游離線粒體可以通過共培養(yǎng)的方式進(jìn)入U(xiǎn)87細(xì)胞,mtDNA全基因組測(cè)序進(jìn)一步驗(yàn)證了線粒體移植結(jié)果;通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)擴(kuò)增ND1基因,并通過Western Blot檢測(cè)Fis1和Drp1蛋白的結(jié)果表明游離線粒體能夠在U87細(xì)胞內(nèi)存活并大量復(fù)制mtDNA。第二,對(duì)進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)熒光強(qiáng)...

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖1-1線粒體移植恢復(fù)損傷細(xì)胞功能原理

蘭州大學(xué)碩士學(xué)位論文線粒體移植增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞輻射敏感性作用及機(jī)理研究導(dǎo)致鈣離子異常流入細(xì)胞內(nèi)(圖1B-c,d)[69]。高濃度的鈣離子導(dǎo)致線粒體內(nèi)膜的膜電位降低[70]、ATP產(chǎn)生減少并在線粒體膜上形成線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔(mitochondrialpermeability....

圖2-1線粒體活性檢測(cè)A.倒置相差顯微鏡下拍攝的HA細(xì)胞B.透射電鏡下拍攝的游離線粒體C.200×熒光顯微鏡下

圖2-1線粒體活性檢測(cè)差顯微鏡下拍攝的HA細(xì)胞B.透射電鏡下拍攝的游離線粒體C.200×熒光顯微Mito-TrackerRed標(biāo)記的游離線粒體D.400×熒光顯微鏡下拍攝的用Mito-TraRed標(biāo)記的游離線粒體.2線粒體移植追蹤觀察結(jié)果明游離線粒體能夠....

圖2-3線粒體基因表型

以上結(jié)果表明線粒體移植組既表現(xiàn)出了供體HA細(xì)胞的線粒體基因表型，又表現(xiàn)出了受體U87細(xì)胞的線粒體基因表型，結(jié)合之前數(shù)據(jù)，充分證明了來源于HA細(xì)胞的游離線粒體通過共培養(yǎng)的方式成功進(jìn)入U(xiǎn)87細(xì)胞。圖2-3線粒體基因表型(A)(B)

圖2-3游離線粒體進(jìn)入U(xiǎn)87細(xì)胞后DN1基因的擴(kuò)增和Fis1、Drp1蛋白的表達(dá)(A)通過PCR實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證線粒體mtDNA拷貝關(guān)鍵蛋白ND1的擴(kuò)增程程度

以上結(jié)果表明線粒體移植組既表現(xiàn)出了供體HA細(xì)胞的線粒體基因表型，又表現(xiàn)出了受體U87細(xì)胞的線粒體基因表型，結(jié)合之前數(shù)據(jù)，充分證明了來源于HA細(xì)胞的游離線粒體通過共培養(yǎng)的方式成功進(jìn)入U(xiǎn)87細(xì)胞。圖2-3線粒體基因表型(A)(B)

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