本文關鍵詞：牛磺酸對抗鋁致大鼠神經系統(tǒng)細胞凋亡及過氧化損傷的保護作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：[目的]鋁在自然環(huán)境中廣泛存在,其含量十分豐富且在空氣、土壤、水以及人類食物中均有分布。隨著我國工業(yè)化的快速發(fā)展,人們接觸和攝入鋁的機會也在增多,鋁累積到一定程度就會對人體造成慢性毒作用。近年來,鋁對神經系統(tǒng)造成的慢性毒性作用正受到人們的廣泛關注。鋁可加強腦組織脂質過氧化反應,從而對神經細胞產生毒性作用,甚至引發(fā)神經細胞凋亡。牛磺酸(化學名為2-氨基乙磺酸)是一種廣泛存在于細胞中的氨基酸,在人體的中樞神經系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)及肝膽系統(tǒng)中發(fā)揮著重要的生理功能,而關于�；撬徂卓逛X致大鼠腦組織過氧化損傷及細胞凋亡的研究未見報道。本實驗通過灌胃給予Wistar大鼠六水氯化鋁以建立鋁中毒模型并從治療和預防兩方面給予�；撬徇M行解毒。通過測定相關元素、過氧化指標、三磷酸腺苷酶(ATP酶)活力和細胞凋亡相關基因的表達,研究和探討�；撬釋逛X致大鼠神經系統(tǒng)細胞凋亡及過氧化損傷的保護作用。[方法]1.動物實驗將60只健康雄性SPF級Wistar大鼠按體重(185-225g)隨機分為6個實驗組,分別為陰性對照組、鋁染毒組、牛磺酸預防組以及�；撬岬�、中、高劑量組,每組10只。適應性飼養(yǎng)一周后,采用灌胃的方式進行給藥,每天灌胃1次,每周連續(xù)給藥5 d。給予陰性對照組大鼠生理鹽水1mL/d,共8周；鋁染毒組、�；撬岬�、中、高劑量組及�；撬犷A防組前4周給予六水氯化鋁281.40mg/(kg·d),其中預防組在給予六水氯化鋁4h后給予�；撬�4OOmg/(kg·d);后四周,給予鋁染毒組生理鹽水1mL/d,牛磺酸低、中、高劑量組每日分別給予牛磺酸200、400、800 mg/kg,�；撬犷A防組每日灌胃劑量為400 mg/kg.每組隨機抽取3只大鼠,采用4%多聚甲醛灌注,用于制作石蠟切片和免疫組化測定。剩余大鼠在染毒結束后禁食24h,斷頭取血,并迅速剖離出腦組織,于-20℃保存?zhèn)溆谩?.�；撬釋︿X染毒大鼠一般生長發(fā)育狀況的影響在動物實驗過程中,每日對各組大鼠的進食情況和行為變化進行觀察與記錄,每隔3日準確稱量各組大鼠體重并記錄,計算各階段體重增長變化值。各組大鼠在灌胃結束后禁食24h,斷頭處死,于冰上迅速解剖分離出腦組織,準確稱重,并計算腦系數。研究�；撬嵩诟纳迫句X大鼠一般生長發(fā)育狀況方面的作用。3.�；撬釋︿X染毒大鼠腦組織抗氧化系統(tǒng)的影響在解離出大鼠腦組織后,準確稱重,按比例加入預冷的生理鹽水制成大鼠腦組織勻漿。各組大鼠腦組織丙二醛(MDA)含量的測定采用硫代巴比妥酸(TBA)法進行。二硫代二硝基苯甲酸(DTN B)法用于谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活力值的相關測定,而超氧化物歧化酶(SOD)的活力值測定則采用黃嘌呤氧化酶法進行,從而研究�；撬徂卓逛X致大鼠腦組織抗氧化損傷的作用。4.�；撬釋︿X染毒大鼠血清抗氧化系統(tǒng)的影響各組大鼠斷頭取血后,收集血清。大鼠血清中的GSH-Px活力的測定采用DTNB法,黃嘌呤氧化酶法則用于測定血清中的SOD活力。大鼠血清中MDA含量則采用TBA法,從而研究�；撬釋︿X染毒大鼠血清抗氧化指標的改善作用。5.�；撬釋︿X染毒大鼠腦組織中三種主要ATP酶活力的影響準確剖離并稱取各組大鼠腦組織,按比例加入預冷的生理鹽水制備成組織勻漿。各組大鼠腦組織中Mg2+-ATP酶活力、Na+K+-ATP酶活力和Ca2+-ATP酶活力均采用無機磷法分別進行測定,研究�；撬釋︿X致大鼠腦組織ATP酶活力下降的拮抗作用。6.牛磺酸對鋁染毒大鼠全血中三種主要ATP酶活力的影響取各組大鼠的部分抗凝全血制成溶血液。全血中Mg2+-ATP酶活力、Na+ K+-ATP酶活力和Ca2+-ATP酶活力均采用無機磷法分別進行測定,研究�；撬釋︿X染毒大鼠全血ATP酶的保護作用。7.�；撬釋︿X染毒大鼠血清中鋁及必需元素含量的影響各組大鼠斷頭取血后,收集血清。采用火焰原子吸收光譜法對大鼠血清中鈣、鎂、銅、鐵、鋅元素的含量依次進行了測定。而血清中鋁元素含量的測定則采用電感耦合等離子體質譜法。研究�；撬釋θ句X大鼠血清中必需元素的影響及其排鋁效果。8.�；撬釋︿X染毒大鼠腦組織Bcl-2和Bax蛋白表達的影響染毒結束后,用4%多聚甲醛進行心臟灌注以固定大鼠腦組織,并制作石蠟切片。采用SABC免疫組化染色法測定各組大鼠腦組織Bcl-2和Bax蛋白的表達,研究�；撬釋θ句X致大鼠腦組織細胞凋亡的拮抗作用。[結果]1.牛磺酸對鋁染毒大鼠一般生長發(fā)育狀況的影響染鋁組大鼠的生長發(fā)育較遲緩且出現(xiàn)萎靡現(xiàn)象,其他各組大鼠的發(fā)育狀況良好。從染毒第6周開始,鋁染毒組大鼠的體重增長值與陰性對照組比較已出現(xiàn)顯著下降趨勢,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)；染毒第8周時,牛磺酸預防組大鼠的體重增長較為明顯且已顯著高于鋁染毒組(P0.05)。陰性對照組和預防組大鼠的腦系數值與鋁染毒組相比顯著下降,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。2.牛磺酸對鋁染毒大鼠腦組織抗氧化系統(tǒng)的影響鋁染毒組大鼠腦組織GSH-Px活力和SOD活力與陰性對照組相比均呈現(xiàn)下降趨勢,而測定所得的MDA含量則顯著高于陰性對照,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。�；撬岣邉┝拷M及預防組大鼠腦組織中的SOD活力顯著高于鋁染毒組(P0.05),而MDA含量則顯著降低(P0.05)；牛磺酸中劑量組、高劑量組及預防組大鼠腦組織中的GSH-Px活力值均呈現(xiàn)顯著升高趨勢(P0.05)。牛磺酸各組大鼠腦組織中的SOD活力、MDA含量和GSH-Px活力與陰性對照比較,差異均無統(tǒng)計學意義(P0.05)。3.牛磺酸對鋁染毒大鼠血清抗氧化系統(tǒng)的影響鋁染毒組大鼠血清中的MDA含量與陰性對照組進行比較,可觀察到顯著升高趨勢(P0.05),而GSH-Px活力則顯著低于陰性對照(P0.05)。與鋁染毒組相比較,中、高劑量�；撬峤M和預防組大鼠血清中MDA的含量均呈現(xiàn)明顯降低趨勢,且中、高劑量組與之相比具有統(tǒng)計學差異(P0.05)。中、高劑量�；撬峤M和預防組大鼠血清中的GSH-Px活力均明顯高于鋁染毒組,且中劑量組呈現(xiàn)統(tǒng)計學差異(P0.05)。各實驗組大鼠血清中的SOD活力測定值之間進行比較,差異均無統(tǒng)計學意義(P0.05)。4.�；撬釋︿X染毒大鼠腦組織中三種主要ATP酶活力的影響鋁染毒組大鼠腦組織中Mg2+-ATP酶活力和Na+K+-ATP酶活力值均顯著低于陰性對照組,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。中、高劑量�；撬峤M和預防組大鼠腦組織中Na+K+-ATP酶活力值明顯高于鋁染毒組,中、高劑量組與之相比呈現(xiàn)統(tǒng)計學差異(P0.05)；與鋁染毒組相比較,中、高劑量�；撬峤M和預防組大鼠腦組織中Mg2+-ATP酶活力值均有明顯升高趨勢,且高劑量組呈現(xiàn)統(tǒng)計學差異(P0.05)。而各組Ca2+-ATP酶活力值之間進行比較,差異均無統(tǒng)計學意義(P0.05)。5.�；撬釋︿X染毒大鼠全血中三種主要ATP酶活力的影響與陰性對照組相比,鋁暴露組大鼠全血中Ca2+-ATP酶和Mg2+-ATP酶活力值顯著下降(P0.05)。牛磺酸高劑量組和預防組大鼠全血中Ca2+-ATP酶活力值顯著高于鋁暴露組(P0.05);所有�；撬釋嶒灲M大鼠全血Mg2+-ATP酶活力均高于鋁染毒組,但差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。大鼠全血Na+K+-ATP酶活力值各組間進行比較,均無統(tǒng)計學差異(P0.05)。6.�；撬釋︿X染毒大鼠血清中鋁及必需元素含量的影響將測得的鋁暴露組大鼠血清中鋁元素含量與陰性對照組進行比較,結果呈現(xiàn)顯著升高趨勢(P0.05)。中劑量和高劑量牛磺酸組血清鋁含量則顯著降低(P0.05)。與陰性對照組相比,鋁染毒組大鼠血清中Fe含量顯著升高,而Mg、Zn含量則降低,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。測得�；撬岣邉┝拷M大鼠血清Fe含量顯著低于鋁染毒組(P0.05),而Zn含量則明顯升高,具有統(tǒng)計學差異(P0.05)。中劑量牛磺酸組與�；撬犷A防組大鼠血清Mg含量與鋁染毒組相比呈現(xiàn)上升趨勢,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。各組大鼠血清中Cu、Ca含量測定值分別進行組間比較,均無統(tǒng)計學差異(P0.05)。7.�；撬釋︿X染毒大鼠腦組織Bcl-2和Bax蛋白表達的影響由大鼠腦組織中Bcl-2蛋白表達的免疫組化染色結果可見,陰性對照組大多數細胞的胞體較大,細胞形狀并不規(guī)則,有的可觀察到細胞表面突起,陽性細胞的胞質被染為棕黃色,且染色顏色較深,可明顯區(qū)別于未染色細胞。與陰性對照組相比,鋁染毒組陽性細胞數呈現(xiàn)一定程度的下降。而與鋁染毒組相比,�；撬岣鹘M陽性細胞數明顯增多,胞質染色較深。而大鼠腦組織Bax蛋白表達免疫組化染色結果顯示,陰性對照組大多數細胞形狀規(guī)則,均勻分布,幾乎無陽性表達細胞。鋁染毒組多數細胞胞質呈現(xiàn)棕黃色,顏色較深,且可觀察到不規(guī)則突起,即陽性表達細胞數出現(xiàn)明顯增多。而�；撬岣鹘M染色細胞數均有減少,且中劑量和高劑量牛磺酸組陽性細胞數出現(xiàn)明顯降低趨勢,且著色較淺。[結論]1.�；撬釋Υ笫蟮纳L發(fā)育有促進作用,一定程度上能夠改善鋁致大鼠發(fā)育遲緩現(xiàn)象。2.�；撬釋θ句X大鼠腦組織和血清抗氧化系統(tǒng)有一定的保護作用。3.牛磺酸能夠拮抗鋁致大鼠腦組織和全血ATP酶活力的降低。4.�；撬峋哂幸欢ǖ呐配X作用,并且對鋁引起的其他必需元素穩(wěn)態(tài)失衡起著調節(jié)作用。5.�；撬崮軌蛘{節(jié)神經細胞凋亡相關蛋白的表達,從而拮抗鋁對神經系統(tǒng)的毒性作用。綜上所述,牛磺酸能夠有效拮抗鋁染毒所致大鼠神經系統(tǒng)過氧化損傷及細胞凋亡,對大鼠神經系統(tǒng)具有一定的保護作用。
【關鍵詞】：鋁 �；撬� 抗氧化系統(tǒng) 細胞凋亡 保護作用
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R741
【目錄】：

• 中文摘要6-11
• 英文摘要11-17
• 符號說明17-18
• 前言18-26
• 材料與方法26-38
• 結果38-46
• 討論46-55
• 結論55-56
• 附錄56-58
• 參考文獻58-67
• 致謝67-68
• 攻讀學位期間發(fā)表的論文68-69
• 學位論文評閱及答辯倩況表69

【參考文獻】

中國期刊全文數據庫 前8條

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