腦膠質(zhì)瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中最常見的原發(fā)性腦腫瘤，具有高侵襲性和高致死率。盡管對腦膠質(zhì)瘤的研究取得了很大的進(jìn)展，但患上多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤（WHO IV級）的病人的平均存活時間僅僅為12-15個月。因此，腦膠質(zhì)瘤的治療仍然是神經(jīng)外科領(lǐng)域的一大挑戰(zhàn)。PKCε作為蛋白激酶C家族的一個成員，是細(xì)胞內(nèi)一個重要的信號分子，參與調(diào)節(jié)細(xì)胞的多種生理功能。多項研究顯示，在多種腫瘤細(xì)胞中都發(fā)現(xiàn)存在PKCε的過表達(dá)，并且它已被認(rèn)為是一個癌基因。Stat3作為信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄活化因子家族的一個成員，是多種細(xì)胞信號途徑的匯聚點(diǎn)，對細(xì)胞的生長，存活和分化起到重要的調(diào)控作用。先前的研究顯示，Stat3在多種腫瘤細(xì)胞中都存在異�；罨�，并且在多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中起到關(guān)鍵作用。 本文采用RNA干擾、免疫化學(xué)染色、免疫共沉淀、Western blot和裸鼠成瘤等多種方法，研究了PKCε在腦膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展過程中的作用以及PKCε與Stat3在腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞中可能的分子互動機(jī)制。 采用組織免疫化學(xué)染色的方法檢測到PKCε蛋白在人惡性腦膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)量顯著高于其在人正常腦組織中的表達(dá)量，這暗示了PKCε在人腦膠質(zhì)瘤的發(fā)生發(fā)展過程...

【文章頁數(shù)】：93 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 緒論
    1.1 腦膠質(zhì)瘤
        1.1.1 腦膠質(zhì)瘤的分類
        1.1.2 腦膠質(zhì)瘤的治療
    1.2 PKCε研究進(jìn)展
        1.2.1 PKC家族的分類
        1.2.2 PKCε蛋白的結(jié)構(gòu)
        1.2.3 PKCε與致癌相關(guān)蛋白的關(guān)系
        1.2.4 PKCε與腫瘤
    1.3 Stat3 研究進(jìn)展
        1.3.1 Stat3 蛋白的結(jié)構(gòu)
        1.3.2 Stat3 信號通路調(diào)控機(jī)制
        1.3.3 Stat3 在腫瘤中的作用
    1.4 RNA干擾
        1.4.1 RNAi的分子機(jī)制
        1.4.2 RNAi的特點(diǎn)
        1.4.3 RNAi技術(shù)的應(yīng)用
第二章 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞、動物與樣本
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑與耗材
    2.2 儀器
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 組織免疫染色
        2.3.2 PKCεRNA干擾質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.3.3 質(zhì)粒的提取、純化與鑒定
        2.3.4 腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U251 和U87 的體外培養(yǎng)與轉(zhuǎn)染
        2.3.5 細(xì)胞免疫熒光染色
        2.3.6 細(xì)胞增殖檢測
        2.3.7 線粒體膜電位檢測
        2.3.8 Hoechst 33258 細(xì)胞染色
        2.3.9 Annexin V- Cy3 檢測
        2.3.10 細(xì)胞侵襲檢測
        2.3.11 Western blot
        2.3.12 免疫共沉淀
        2.3.13 腦膠質(zhì)瘤動物模型的構(gòu)建
        2.3.14 裸鼠體內(nèi)移植瘤生長體積與重量的測量
        2.3.15 溶液的配制
    2.4 數(shù)據(jù)分析與統(tǒng)計
第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 PKCε在人正常腦組織和人惡性腦膠質(zhì)瘤組織中的差異表達(dá)
    3.2 PKCε在腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞中的表達(dá)與分布
    3.3 PKCε RNA干擾質(zhì)粒的鑒定
    3.4 共轉(zhuǎn)染RNA干擾質(zhì)粒及pEGFP-C1 熒光質(zhì)粒
    3.5 Western blot分析體外PKCεRNA干擾效率
    3.6 下調(diào)PKCε的表達(dá)能夠抑制腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖
    3.7 下調(diào)PKCε的表達(dá)能夠?qū)е履X膠質(zhì)瘤細(xì)胞線粒體膜電位下降
    3.8 下調(diào)PKCε的表達(dá)能夠誘導(dǎo)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡
    3.9 下調(diào)PKCε的表達(dá)能夠降低腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的侵襲能力
    3.10 裸鼠體內(nèi)移植瘤的形成
    3.11 PKCεRNA干擾質(zhì)粒對裸鼠體內(nèi)移植瘤生長的影響
    3.12 人惡性腦膠質(zhì)瘤組織中內(nèi)源性PKCε與Stat3 的共定位
    3.13 腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞中內(nèi)源性PKCε與Stat3 的共定位
    3.14 腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞中內(nèi)源性PKCε與Stat3 的相互作用
    3.15 下調(diào)PKCε的表達(dá)對Stat3 表達(dá)及其磷酸化水平的影響
    3.16 下調(diào)PKCε的表達(dá)對Stat3 下游靶基因Bcl-xL與Bcl-2 表達(dá)的影響
第四章 討論
第五章 結(jié)論
附錄
    附圖Ⅰ
    附圖Ⅱ
    附圖Ⅲ
參考文獻(xiàn)
作者在攻讀博士學(xué)位期間公開發(fā)表的論文和專利申請
作者在攻讀博士學(xué)位期間所參與的項目
致謝



本文編號：3964361