目的:MPTP急性造模的帕金森病(Parkinson’s disease,PD)小鼠,其PD樣癥狀會在急性期內(nèi)出現(xiàn),之后得到一定程度的緩慢恢復(fù)。此外PD病人常伴有視網(wǎng)膜的受累,但其分子機(jī)制并不明確。為研究其機(jī)制,本文通過全轉(zhuǎn)錄測序研究MPTP急性造模的PD小鼠紋狀體內(nèi)轉(zhuǎn)錄組動態(tài)變化,并比較正常小鼠紋狀體和視網(wǎng)膜轉(zhuǎn)錄組差異。方法:取8周齡小鼠30只,隨機(jī)分為三組,設(shè)為假手術(shù)組、PD急性期組(D3)及PD模型恢復(fù)期組(D28)。急性期組及恢復(fù)期組用MPTP急性模型造模,假手術(shù)組用生理鹽水代替MPTP注射。采用爬桿和爬梁兩種方法進(jìn)行行為學(xué)測試。取紋狀體、視網(wǎng)膜。高效液相色譜(HPLC)檢測紋狀體的多巴胺。提取紋狀體及視網(wǎng)膜的總RNA,進(jìn)行rRNA減除法和小RNA建庫,利用Illumina平臺的Hiseq X-10平臺分別進(jìn)行雙端150bp和單端75bp讀長測序。長鏈RNA數(shù)據(jù)利用RNA STAR軟件映射到小鼠基因組序列(mm10版本),用FeatureCount和edgeR進(jìn)行差異表達(dá)基因(DEG)分析。使用DAVID和CytoScape的ClueGO插件進(jìn)行DEG富集的基因功能和KEGG通...

【文章頁數(shù)】：59 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖2-1小鼠造模及行為學(xué)測試示意圖

鼠轉(zhuǎn)移至飼養(yǎng)間，此時小鼠將滿8周齡并進(jìn)入成年期，待小鼠轉(zhuǎn)移至飼養(yǎng)間隨機(jī)開展驗。檢疫和飼養(yǎng)過程中，環(huán)境溫度保持在25℃左右，相對濕度保持在50%左右，每天以光照12小時和黑暗12小時的周期交替以保證動物福利。實驗人員將每天檢查小鼠的食物和飲用水并及時補(bǔ)充，每隔三天更....

圖2-2小鼠爬桿實驗圖

爬桿和爬梁兩種方法進(jìn)行行為學(xué)測試，，至造模當(dāng)天所有小鼠應(yīng)均可較為熟每天針對每組小鼠進(jìn)行行為學(xué)測試，每保證小鼠體力得以恢復(fù)，計算平均值，。人[47]的行為學(xué)實驗方法，搭建簡易的頂爬至桿底所用時間反應(yīng)小鼠的抓握50cm，直徑1cm的金屬桿垂直固定于頂部裹出一個2cm左右的小....

圖2-3小鼠爬桿實驗圖

第二章實驗材料與方法驗裝置如圖，該方法通過測量小鼠通過光滑金屬桿的時間反應(yīng)小鼠四肢抓握能力。具體操作方法如下：將一根長25cm，直徑2cm的光滑金屬桿懸空水平固定于兩個平平臺離地約10cm，平臺間距20cm，在金屬桿下鋪上墊料，防止小損傷；提起小鼠尾部，將其頭朝前放置....

圖2-4rRNA清除建庫方法流程圖

第二章實驗材料與方法推薦的不同指數(shù)標(biāo)記產(chǎn)生測序文庫：首先，通過試劑盒除去核糖體應(yīng)緩沖液在升高的溫度下進(jìn)行RNA體引物和RNA片段作為模板合成DNA聚合酶I和RNA酶H進(jìn)行第純化文庫片段，用EB緩沖液洗脫接子。為了選擇優(yōu)選長度為200bp片段，用UN....

本文編號：3916675