目的:MPTP急性造模的帕金森病(Parkinson’s disease,PD)小鼠,其PD樣癥狀會(huì)在急性期內(nèi)出現(xiàn),之后得到一定程度的緩慢恢復(fù)。此外PD病人常伴有視網(wǎng)膜的受累,但其分子機(jī)制并不明確。為研究其機(jī)制,本文通過(guò)全轉(zhuǎn)錄測(cè)序研究MPTP急性造模的PD小鼠紋狀體內(nèi)轉(zhuǎn)錄組動(dòng)態(tài)變化,并比較正常小鼠紋狀體和視網(wǎng)膜轉(zhuǎn)錄組差異。方法:取8周齡小鼠30只,隨機(jī)分為三組,設(shè)為假手術(shù)組、PD急性期組(D3)及PD模型恢復(fù)期組(D28)。急性期組及恢復(fù)期組用MPTP急性模型造模,假手術(shù)組用生理鹽水代替MPTP注射。采用爬桿和爬梁兩種方法進(jìn)行行為學(xué)測(cè)試。取紋狀體、視網(wǎng)膜。高效液相色譜(HPLC)檢測(cè)紋狀體的多巴胺。提取紋狀體及視網(wǎng)膜的總RNA,進(jìn)行rRNA減除法和小RNA建庫(kù),利用Illumina平臺(tái)的Hiseq X-10平臺(tái)分別進(jìn)行雙端150bp和單端75bp讀長(zhǎng)測(cè)序。長(zhǎng)鏈RNA數(shù)據(jù)利用RNA STAR軟件映射到小鼠基因組序列(mm10版本),用FeatureCount和edgeR進(jìn)行差異表達(dá)基因(DEG)分析。使用DAVID和CytoScape的ClueGO插件進(jìn)行DEG富集的基因功能和KEGG通...

【文章頁(yè)數(shù)】：59 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖2-1小鼠造模及行為學(xué)測(cè)試示意圖

鼠轉(zhuǎn)移至飼養(yǎng)間，此時(shí)小鼠將滿8周齡并進(jìn)入成年期，待小鼠轉(zhuǎn)移至飼養(yǎng)間隨機(jī)開(kāi)展驗(yàn)。檢疫和飼養(yǎng)過(guò)程中，環(huán)境溫度保持在25℃左右，相對(duì)濕度保持在50%左右，每天以光照12小時(shí)和黑暗12小時(shí)的周期交替以保證動(dòng)物福利。實(shí)驗(yàn)人員將每天檢查小鼠的食物和飲用水并及時(shí)補(bǔ)充，每隔三天更....

圖2-2小鼠爬桿實(shí)驗(yàn)圖

爬桿和爬梁兩種方法進(jìn)行行為學(xué)測(cè)試，，至造模當(dāng)天所有小鼠應(yīng)均可較為熟每天針對(duì)每組小鼠進(jìn)行行為學(xué)測(cè)試，每保證小鼠體力得以恢復(fù)，計(jì)算平均值，。人[47]的行為學(xué)實(shí)驗(yàn)方法，搭建簡(jiǎn)易的頂爬至桿底所用時(shí)間反應(yīng)小鼠的抓握50cm，直徑1cm的金屬桿垂直固定于頂部裹出一個(gè)2cm左右的小....

圖2-3小鼠爬桿實(shí)驗(yàn)圖

第二章實(shí)驗(yàn)材料與方法驗(yàn)裝置如圖，該方法通過(guò)測(cè)量小鼠通過(guò)光滑金屬桿的時(shí)間反應(yīng)小鼠四肢抓握能力。具體操作方法如下：將一根長(zhǎng)25cm，直徑2cm的光滑金屬桿懸空水平固定于兩個(gè)平平臺(tái)離地約10cm，平臺(tái)間距20cm，在金屬桿下鋪上墊料，防止小損傷；提起小鼠尾部，將其頭朝前放置....

圖2-4rRNA清除建庫(kù)方法流程圖

第二章實(shí)驗(yàn)材料與方法推薦的不同指數(shù)標(biāo)記產(chǎn)生測(cè)序文庫(kù)：首先，通過(guò)試劑盒除去核糖體應(yīng)緩沖液在升高的溫度下進(jìn)行RNA體引物和RNA片段作為模板合成DNA聚合酶I和RNA酶H進(jìn)行第純化文庫(kù)片段，用EB緩沖液洗脫接子。為了選擇優(yōu)選長(zhǎng)度為200bp片段，用UN....

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