目的:miR-136在多種腫瘤發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮類似抑癌基因的作用,參與腫瘤細(xì)胞的分化、生長、增殖、凋亡等一系列關(guān)鍵進(jìn)程。本文通過研究miR-136的對下游靶基因的調(diào)控,從而探討miR-136抑制膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞增殖、侵襲及遷移等生物學(xué)活性的作用機制,展望miR-136、FZD4可作為臨床治療膠質(zhì)瘤的潛在指標(biāo)。方法:選取膠質(zhì)瘤中的U251細(xì)胞系,采用含有10%胎牛血清和1%青霉素及鏈霉素的高糖DMEM培養(yǎng)基,置于恒溫37℃,5%CO₂細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。待細(xì)胞貼壁后,胰酶消化計數(shù),接種于6孔板中,分為2組,利用Lipofectamine2000轉(zhuǎn)染試劑分別將miR-136 mimic(模擬物組)和miR-136模擬物陰性對照(對照組)轉(zhuǎn)入U251細(xì)胞,采用實時定量PCR法檢測轉(zhuǎn)染效率,觀察2組細(xì)胞中mi R-136的表達(dá)差異。顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)染24 h后細(xì)胞的增殖情況,并拍照記錄。CCK-8法檢測轉(zhuǎn)染后2組細(xì)胞增殖活性。Transwell和劃痕實驗分別檢測轉(zhuǎn)染后2組細(xì)胞的侵襲及遷移能力。根據(jù)檢索miRnada生物信息學(xué)數(shù)據(jù)庫,預(yù)測并分析mi R-136的下游靶基因。實時...

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
中英文對照表
第一章 緒論
    1.1 神經(jīng)膠質(zhì)瘤
    1.2 MicroRNA
    1.3 靶基因Frizzled4(FZD4)
    1.4 研究的內(nèi)容、方法、目的、意義及技術(shù)路線
第二章 人膠質(zhì)瘤細(xì)胞的體外培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染
    2.1 實驗材料
        2.1.1 細(xì)胞株
        2.1.2 主要試劑和試劑盒
        2.1.3 主要實驗設(shè)備及耗材
        2.1.4 主要試劑的配制
    2.2 試驗方法
        2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染及檢測轉(zhuǎn)染后miR-136的表達(dá)水平
    2.3 實驗結(jié)果
    2.4 討論
第三章 miR-136對膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞增殖、侵襲及遷移等學(xué)活性的影響
    3.1 實驗材料
        3.1.1 細(xì)胞株
        3.1.2 主要試劑和試劑盒
        3.1.3 主要實驗設(shè)備及器材
        3.1.4 主要試劑的配制
    3.2 試驗方法
        3.2.1 膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞增殖能力檢測
        3.2.2 Transwell實驗法檢測膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞侵襲能力
        3.2.3 劃痕實驗法檢測膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞遷移能力
        3.2.4 統(tǒng)計學(xué)分析
    3.3 實驗結(jié)果
        3.3.1 膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞生長情況檢測結(jié)果
        3.3.2 CCK-8實驗法檢測膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞增殖能力結(jié)果
        3.3.3 Transwell實驗法檢測膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞侵襲能力結(jié)果
        3.3.4 劃痕實驗法檢測膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞遷移能力結(jié)果
    3.4 討論
第四章 MiR-136對神經(jīng)膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞作用的機制
    4.1 實驗材料
        4.1.1 細(xì)胞株
        4.1.2 主要試劑和試劑盒
        4.1.3 主要實驗設(shè)備和耗材
        4.1.4 主要試劑的配制
    4.2 試驗方法
        4.2.1 miR-136下游靶基因
        4.2.2 檢測轉(zhuǎn)染后細(xì)胞中FZD4mRNA的表達(dá)水平
        4.2.3 蛋白印跡法檢測轉(zhuǎn)染后細(xì)胞中FZD4蛋白的表達(dá)水平
        4.2.4 統(tǒng)計學(xué)分析
    4.3 實驗結(jié)果
        4.3.1 miR-136下游靶基因
        4.3.2 轉(zhuǎn)染后U251細(xì)胞中FZD4mRNA的表達(dá)水平
        4.3.3 轉(zhuǎn)染后U251細(xì)胞中FZD4蛋白的表達(dá)水平
    4.4 討論
實驗總結(jié)及展望
    1.實驗總結(jié)
    2.展望
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文及參加的課題
致謝



本文編號：3914897