目的:miR-136在多種腫瘤發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮類似抑癌基因的作用,參與腫瘤細胞的分化、生長、增殖、凋亡等一系列關鍵進程。本文通過研究miR-136的對下游靶基因的調控,從而探討miR-136抑制膠質瘤U251細胞增殖、侵襲及遷移等生物學活性的作用機制,展望miR-136、FZD4可作為臨床治療膠質瘤的潛在指標。方法:選取膠質瘤中的U251細胞系,采用含有10%胎牛血清和1%青霉素及鏈霉素的高糖DMEM培養(yǎng)基,置于恒溫37℃,5%CO₂細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。待細胞貼壁后,胰酶消化計數(shù),接種于6孔板中,分為2組,利用Lipofectamine2000轉染試劑分別將miR-136 mimic(模擬物組)和miR-136模擬物陰性對照(對照組)轉入U251細胞,采用實時定量PCR法檢測轉染效率,觀察2組細胞中mi R-136的表達差異。顯微鏡下觀察轉染24 h后細胞的增殖情況,并拍照記錄。CCK-8法檢測轉染后2組細胞增殖活性。Transwell和劃痕實驗分別檢測轉染后2組細胞的侵襲及遷移能力。根據(jù)檢索miRnada生物信息學數(shù)據(jù)庫,預測并分析mi R-136的下游靶基因。實時...

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
中英文對照表
第一章 緒論
    1.1 神經膠質瘤
    1.2 MicroRNA
    1.3 靶基因Frizzled4(FZD4)
    1.4 研究的內容、方法、目的、意義及技術路線
第二章 人膠質瘤細胞的體外培養(yǎng)及轉染
    2.1 實驗材料
        2.1.1 細胞株
        2.1.2 主要試劑和試劑盒
        2.1.3 主要實驗設備及耗材
        2.1.4 主要試劑的配制
    2.2 試驗方法
        2.2.1 細胞培養(yǎng)
        2.2.2 細胞轉染及檢測轉染后miR-136的表達水平
    2.3 實驗結果
    2.4 討論
第三章 miR-136對膠質瘤U251細胞增殖、侵襲及遷移等學活性的影響
    3.1 實驗材料
        3.1.1 細胞株
        3.1.2 主要試劑和試劑盒
        3.1.3 主要實驗設備及器材
        3.1.4 主要試劑的配制
    3.2 試驗方法
        3.2.1 膠質瘤U251細胞增殖能力檢測
        3.2.2 Transwell實驗法檢測膠質瘤U251細胞侵襲能力
        3.2.3 劃痕實驗法檢測膠質瘤U251細胞遷移能力
        3.2.4 統(tǒng)計學分析
    3.3 實驗結果
        3.3.1 膠質瘤U251細胞生長情況檢測結果
        3.3.2 CCK-8實驗法檢測膠質瘤U251細胞增殖能力結果
        3.3.3 Transwell實驗法檢測膠質瘤U251細胞侵襲能力結果
        3.3.4 劃痕實驗法檢測膠質瘤U251細胞遷移能力結果
    3.4 討論
第四章 MiR-136對神經膠質瘤U251細胞作用的機制
    4.1 實驗材料
        4.1.1 細胞株
        4.1.2 主要試劑和試劑盒
        4.1.3 主要實驗設備和耗材
        4.1.4 主要試劑的配制
    4.2 試驗方法
        4.2.1 miR-136下游靶基因
        4.2.2 檢測轉染后細胞中FZD4mRNA的表達水平
        4.2.3 蛋白印跡法檢測轉染后細胞中FZD4蛋白的表達水平
        4.2.4 統(tǒng)計學分析
    4.3 實驗結果
        4.3.1 miR-136下游靶基因
        4.3.2 轉染后U251細胞中FZD4mRNA的表達水平
        4.3.3 轉染后U251細胞中FZD4蛋白的表達水平
    4.4 討論
實驗總結及展望
    1.實驗總結
    2.展望
參考文獻
綜述
    參考文獻
攻讀碩士學位期間發(fā)表的論文及參加的課題
致謝



本文編號：3914897