目的探討自噬與腦缺血之間的關(guān)系,以及miR-155在缺血腦組織中對(duì)自噬的影響。方法線栓法制備大腦中動(dòng)脈閉塞(MCAO)模型,行為學(xué)測試包括神經(jīng)功能缺損評(píng)分和轉(zhuǎn)角試驗(yàn)測評(píng),Western blotting測定LC3B和p62蛋白表達(dá),RT-PCR測定ULK1和Beclin基因水平。結(jié)果與MCAO組相比,過表達(dá)miR-155組自噬相關(guān)蛋白LC3 II和ULK1、Beclin 1基因顯著增高,神經(jīng)功能缺損評(píng)分升高;miR-155敲除小鼠中自噬蛋白LC3 II和ULK1、Beclin 1基因降低;而添加自噬抑制劑抑制miR-155誘導(dǎo)缺血自噬后,神經(jīng)功能缺損評(píng)分降低,自噬相關(guān)蛋白LC3 II和ULK1、Beclin 1基因均下降。結(jié)論證實(shí)miR-155激活了缺血誘導(dǎo)的自噬,而應(yīng)用自噬抑制劑可以阻滯miR-155的有害作用。在缺血性腦組織中沉默miR-155不僅可以抑制自噬,還可以減輕神經(jīng)功能缺損評(píng)分,改善自噬導(dǎo)致的腦缺血損傷。

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【部分圖文】：

圖1腦缺血損傷后LC3B、p62與ULK1、Beclin1的表達(dá)

1.腦缺血性損傷可以誘導(dǎo)自噬（圖1)與野生型（WT）組相比，MCAO組小鼠腦組織中LC3II明顯升高，并且p62蛋白（一種調(diào)節(jié)自噬清除的蛋白）顯著減少。為了進(jìn)一步確證，本文檢測了自噬相關(guān)基因的mRNA水平，qPCR結(jié)果顯示，MCAO組小鼠的ULK1和Beclin1水平高于....

圖2miR-155敲除與過表達(dá)后各組LC3B、p62與ULK1、Beclin1的表達(dá)

2.缺血誘導(dǎo)的miR-155激活缺血腦組織中的自噬（圖2)為了檢測miR-155在缺血腦組織中對(duì)自噬的作用，本文采取了miR-155KO小鼠和注射了pAdmiR-155的過表達(dá)小鼠。與MCAO組小鼠相比，miR-155KO組小鼠腦組織中LC3II水平顯著降低，而....

圖3各組神經(jīng)功能缺失評(píng)分與轉(zhuǎn)角試驗(yàn)

3.自噬在缺血性腦損傷中的作用（圖3)為了揭示自噬在本研究中究竟對(duì)缺血性腦損傷是有害還是保護(hù)作用，本文采用了添加自噬抑制劑LY294002，通過神經(jīng)功能缺損評(píng)分和轉(zhuǎn)角試驗(yàn)進(jìn)行了小鼠的行為測試。與WT組小鼠相比，MCAO組小鼠表現(xiàn)出更高的神經(jīng)功能缺損分值。而MCAO+LY29400....

圖4應(yīng)用自噬抑制劑后各組LC3B、p62與ULK1、Beclin1的表達(dá)

4.miR-155誘導(dǎo)的自噬參與了神經(jīng)系統(tǒng)的缺血損傷（圖4)上一部分實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示抑制miR-155介導(dǎo)的自噬，可以減輕神經(jīng)功能損傷，進(jìn)一步觀察了小鼠腦組織中自噬相關(guān)蛋白及基因的表達(dá)變化。與MCAO組小鼠相比，添加LY294002的MCAO小鼠腦組織中，LC3II水平顯著降低....

本文編號(hào)：3908293