目的：研究6-羥基多巴胺(6-OHDA)所致帕金森病(PD)模型大鼠黑質(zhì)膜鐵轉(zhuǎn)運蛋白1(FPl)基因表達及其啟動子甲基化狀態(tài)的變化。 方法：6-OHDA單側(cè)注入大鼠內(nèi)側(cè)前腦束(MFB),免疫組化方法觀察腦黑質(zhì)區(qū)酪氨酸羥化酶(TH)陽性神經(jīng)元細胞存活情況,半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)技術(shù)檢測黑質(zhì)區(qū)FP1mRNA表達的變化,甲基化特異性PCR(MSP)檢測FP1基因啟動子區(qū)甲基化狀態(tài)的變化。 結(jié)果：6-OHDA單側(cè)損毀大鼠MFB后,與未損毀側(cè)及對照組相比,損毀側(cè)中腦黑質(zhì)區(qū)TH陽性細胞顯著減少(t組內(nèi)=20.619,P<0.01；t組間=18.404,P<0.01),FP1表達下調(diào)(t組內(nèi)=8.123,P<0.01；t組間=7.609,P<0.01)；與對照組相比,實驗組注射側(cè)FP1基因啟動子區(qū)甲基化陽性率增高,差異有顯著性(X2=20,P<0.01)。 結(jié)論：6-OHDA所致PD大鼠模型中黑質(zhì)FP1基因表達降低,6-OHDA所致PD大鼠模型黑質(zhì)FP1基因啟動子區(qū)甲基化陽性率增高。FP1基因mRNA表達降低可能與FP1基因啟動子區(qū)發(fā)生甲基化有關(guān)。

【文章頁數(shù)】：45 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
引言
第一章 實驗材料
    1.1 實驗動物
    1.2 藥品與試劑
    1.3 儀器與器材
第二章 實驗方法
    2.1 動物模型制作
        2.1.1 立體定向注射
        2.1.2 成功模型的篩選
    2.2 免疫組化法TH染色
        2.2.1 冰凍切片的制備
        2.2.2 TH染色
    2.3 大鼠黑質(zhì)FPl基因表達水平檢測
        2.3.1 RNA的提取
        2.3.2 逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)
        2.3.3 PCR反應(yīng)
        2.3.4 PCR產(chǎn)物的定量
    2.4 FP1基因啟動子區(qū)甲基化狀態(tài)的檢測
        2.4.1 組織DNA提取
        2.4.2 亞硫酸氫鈉修飾基因組DNA
        2.4.3 修飾后DNA的純化回收
        2.4.4 甲基化特異性PCR(MSP)
    2.5 統(tǒng)計學(xué)分析
第三章 實驗結(jié)果
    3.1 大鼠行為變化
    3.2 6-OHDA單側(cè)損毀MFB大鼠黑質(zhì)TH染色變化
    3.3 6-OHDA單側(cè)損毀MFB大鼠黑質(zhì)FP1mRNA表達變化
    3.4 6-OHDA單側(cè)損毀MFB大鼠黑質(zhì)FP1基因啟動子甲基化狀態(tài)
第四章 討論
結(jié)論
參考文獻
綜述
    參考文獻
攻讀學(xué)位期間的研究成果
致謝



本文編號：3900341