本研究采用細(xì)胞培養(yǎng)、MTS分析、熒光染色成像、RNA干擾、Western blotting等細(xì)胞學(xué)分子生物學(xué)技術(shù)和方法,以PC12細(xì)胞和原代神經(jīng)元為實驗對象,綜合研究了在魚藤酮誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞凋亡過程中,氧化應(yīng)激H2O2對Akt信號通路的影響及其對關(guān)聯(lián)的XIAP信號通路的調(diào)控機理；探討了魚藤酮誘導(dǎo)H202產(chǎn)生,抑制Akt經(jīng)XIAP通路導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞凋亡機理。其結(jié)果如下：1魚藤酮誘導(dǎo)H2O2依賴的神經(jīng)細(xì)胞凋亡PC12細(xì)胞和原代神經(jīng)元用0-1μM魚藤酮處理24 h、或用過氧化氫酶(CAT, 350 U/ml)預(yù)處理1h后再用魚藤酮(0.5和1μM)處理24h。用特異性熒光探針H2DCFDA顯色成像分析細(xì)胞內(nèi)H2O2變化,形態(tài)學(xué)和MTS分析細(xì)胞活性,Western blot分析Caspase-3和PARP蛋白表達(dá)評價細(xì)胞凋亡信號狀況。結(jié)果表明,魚藤酮以濃度依賴的方式明顯誘導(dǎo)PC12細(xì)胞和原代神經(jīng)元細(xì)胞H2O2升高和活性下降,以及Cleaved-caspase-3和Cleaved-PARP增加；用CAT預(yù)處理改善魚藤酮誘導(dǎo)細(xì)胞形態(tài)改變和活性下降,且削弱魚藤酮增加的Cleaved-caspase-3和...

【文章頁數(shù)】：82 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖３－１?ＸＩＡＰ結(jié)構(gòu)和功能示意圖??

從而能進(jìn)一步促進(jìn)細(xì)胞存活ＰＳｌ。ＸＩＡＰ除了能發(fā)生自泛素化是自己降解外，還能??作用于其它與調(diào)亡相關(guān)的蛋白：ＸＩＡＰ可Ｗ是激活的Ｃａｓｐａｓｅ－３泛素降解，但并??不作用于其前體形式ｔＷ。其結(jié)構(gòu)和功能如圖３－１所示。??Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏ打?ｏｆ?Ｃａｓｐａｓｅ－３?ａｎｄ?－７....

圖４－１魚藤爾濃度依賴地誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞活性降低??Ｆｉ，?４－１?Ｒｏｔｅｎｏｎｅ?ｄｏｓｅ－ｄｅｅｎｄｅｎｔｌｉｎｄｕｃｅｓ?ｖｉａｉｌｉｔｒｅｕｃｔｉｏｎ?ｉｎ?ｎｅｕｒｏｎａｌ?ｃｅｌｌｓ??

２實驗結(jié)果??２．１魚藤爾濃度依賴地誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞死亡??由圖４－１所示，用０－１?的魚藤麗分別處理ＰＣ１２細(xì)胞和原代小鼠大腦皮質(zhì)??神經(jīng)元２４?ｈ后，細(xì)胞活性呈濃度依賴性下降，與對照組相比，用０．５?ｐｉＭ魚藤廁??處理后，？（：１２細(xì)胞活力降至７９％，原代神經(jīng)元活力降至６０％左....

圖４－２魚藤兩濃度依賴地誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞Ｃａｓｐａｓｅ－３通路激活??Ｆｉ．?４－２?Ｒｏｔｅｎｏｎｅ?ｄｏｓｅ－ｄｅｅｎｄｅｎｔｌｉｎｄｕｃｅｓ?ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｃａｓａｓｅ－３??

２．２魚藤麗濃度依賴地激活神經(jīng)細(xì)胞Ｃａｓｐａｓｅ－３通路??之前的研究發(fā)現(xiàn)，魚藤麗可影響神經(jīng)細(xì)胞活性，引起神經(jīng)細(xì)胞死亡表現(xiàn)為??細(xì)胞活力下降。由圖４－２可見，Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ分析顯示魚藤砸也濃度依賴地誘導(dǎo)??Ｐｒｏ－ｃａｓｐａｓｅ－３?和?Ｐｒｏ－ＰＡＲＰ?下降，同時?Ｃ....

圖５－４過表達(dá)Ａｋｔ部分地阻止魚藤麵誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞化化產(chǎn)生??Ｆｉｇ．?５－４?Ｏｖｅｒｅｘｐｉ＇ｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?Ａｋｔ?ｂｌｏｃｋｓ?ｒｏｔ：ｅｎｏｎｅ－ｉｎｄｕｃｅｄ?Ｈ２Ｏ２??

?？??表達(dá)Ａｋｔ。由圖５－３Ａ可見，帶有明顯ＨＡ表達(dá)的Ａｄ－ｍｙｒ－Ａｋｔ細(xì)胞明顯抵抗魚藤??砸導(dǎo)致的Ａｋｔ、Ｆｏｘｏ３ａ和ＧＳＫ３（３磯酸化抑制；與之一致的，按照由ＭＴＳ細(xì)胞活??性分析、ＤＡＰＩ染色調(diào)亡分析和Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ分析結(jié)果可見，與對照組相比，魚??藤麗誘導(dǎo)....

本文編號：3897530