目的 從C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞系中分離培養(yǎng)膠質(zhì)瘤干細(xì)胞(glioma stem cells,GSCs)，并進(jìn)行純化鑒定從而獲得可靠的GSCs細(xì)胞株；研究重組子pDsRed2-C1-PEX對GSCs生物學(xué)活性及微環(huán)境的影響。 方法 （1）采用全貼壁培養(yǎng)法培養(yǎng)C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞，無血清懸浮分離及單克隆培養(yǎng)純化擴(kuò)增GSCs，細(xì)胞免疫熒光化學(xué)染色鑒定GSCs。 （2）脂質(zhì)體介導(dǎo)pDsRed2-C1-PEX轉(zhuǎn)染大鼠C6膠質(zhì)瘤干細(xì)胞及熒光顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)染熒光，RT-PCR鑒定PEX在GSCs的表達(dá)及檢測PEX對血管生成相關(guān)因子（MMP-2mRNA、VEGFmRNA）表達(dá)的影響。 （3） MTT法測定GSCs生長曲線，流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期。 結(jié)果 （1）成功分離并培養(yǎng)出GSCs，單克隆培養(yǎng)GSCs呈球狀生長，不易吹散，折光性較強(qiáng)，細(xì)胞免疫熒光染色鑒定出腫瘤球表達(dá)CD133，其分化的子代細(xì)胞表達(dá)NSE或GFAP，分化細(xì)胞為與神經(jīng)元或膠質(zhì)細(xì)胞相似的腫瘤細(xì)胞。 （2）成功瞬時(shí)轉(zhuǎn)染，PEX在GSCs中高表達(dá)并且其對體外培養(yǎng)的GSCs的增殖有明顯抑制作用，流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期顯示：GSCs-PEX轉(zhuǎn)染組細(xì)胞周期G0/...

【文章頁數(shù)】：47 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1第3代C6膠質(zhì)瘤干細(xì)胞腫瘤球

結(jié)構(gòu)較致密不易吹散，折光性較強(qiáng)。連續(xù)傳3代后細(xì)胞，單克隆培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)的腫瘤球形態(tài)規(guī)則呈球形，且為來源于同一細(xì)胞的大量亞細(xì)胞系克隆球，故非GSCs比例少（圖1）。圖1第3代C6膠質(zhì)瘤干細(xì)胞腫瘤球圖2GSCs呈CD133免疫熒光染色陽性（倒置相差顯微鏡,×400）（Cy3染色，倒....

圖2GSCs呈CD133免疫熒光染色陽性（倒置相差顯微鏡,×400）（Cy3染色，倒置熒光顯微鏡×400）

色：冷PBS重懸細(xì)胞離心棄上清，每管細(xì)胞樣品中加入0.535ML碘化色緩沖液0.5ml，碘化丙啶染色液(20X)25μl,RNaseA(50X)10μl緩慢胞沉淀，37℃避光溫浴30分鐘，用FCM方法檢測三組細(xì)胞周期的變每組檢查3孔細(xì)胞，即每組重復(fù)3次(n=3)。3結(jié)果....

圖3GSCs分化的子代細(xì)胞呈NSE+

3.2GSCs免疫熒光鑒定BTS貼壁4h后，行CD133免疫熒光染色，結(jié)果顯示胞膜胞漿發(fā)出紅色BTS球體內(nèi)有大量表達(dá)CD133的GSCs（圖2）。貼壁分化10天后，分別行免疫熒光染色，結(jié)果顯示BTSC子代分化細(xì)胞胞漿發(fā)出綠色熒光，表明G細(xì)胞表達(dá)NSE或GFAP，分化細(xì)胞為與神經(jīng)....

圖4GSCs分化的子代細(xì)胞呈GFAP+（FITC染色，倒置熒光顯微鏡×200）（FITC染色,倒置熒光顯微鏡×200）

3.2GSCs免疫熒光鑒定BTS貼壁4h后，行CD133免疫熒光染色，結(jié)果顯示胞膜胞漿發(fā)出紅色BTS球體內(nèi)有大量表達(dá)CD133的GSCs（圖2）。貼壁分化10天后，分別行免疫熒光染色，結(jié)果顯示BTSC子代分化細(xì)胞胞漿發(fā)出綠色熒光，表明G細(xì)胞表達(dá)NSE或GFAP，分化細(xì)胞為與神經(jīng)....

本文編號：3897039