目的:構(gòu)建miRNA-22慢病毒表達(dá)載體,上調(diào)(up-regulation)其在髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞系DAOY和ONS-76中的表達(dá)。分析與miRNA-22分子結(jié)合靶基因的表達(dá)情況(如Casepase-3),觀察髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞(DAOY,ONS-76)增殖(MTT實(shí)驗(yàn))、凋亡(流式細(xì)胞儀檢測實(shí)驗(yàn))等情況,闡明miRNA-22分子在髓母細(xì)胞瘤病理發(fā)生學(xué)中的作用機(jī)理。方法:1.慢病毒載體構(gòu)建:構(gòu)建miRNA-22真核表達(dá)質(zhì)粒,設(shè)計(jì)合成miRNA-22特異性RNA序列,用于RNAi實(shí)驗(yàn)。2.細(xì)胞培養(yǎng):選定二株髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞系(DAOY,ONS-76)進(jìn)行培養(yǎng)。3.轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn):將含有miRNA-22的慢病毒以及空載體病毒轉(zhuǎn)入上述細(xì)胞系,用以進(jìn)行下一步的實(shí)驗(yàn)。4.Western blot實(shí)驗(yàn):轉(zhuǎn)染后,上述細(xì)胞則分別變?yōu)榭蛰d體組(DAOY-K,ONS-76-K)以及轉(zhuǎn)入基因組(DAOY-Z,ONS-76-Z)。分別提取各組細(xì)胞蛋白,用Western blot技術(shù),測定其Casepase-3的表達(dá)量。5.DAOY-K和DAOY-Z進(jìn)行MTT實(shí)驗(yàn),觀察其生長增殖生長情況。6.DAOY-K和DAOY-Z進(jìn)行流式...

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
引言
材料方法
    2.1 構(gòu)建Has-mir-22過表達(dá)的慢病毒載體質(zhì)粒
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)儀器與試劑
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)方法
    2.2 髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞系(DAOY,ONS-76)的培養(yǎng)
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)試劑和設(shè)備
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)方法和步驟
        2.2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    2.3 Has-mir-22過表達(dá)的慢病毒載體質(zhì)粒和空載體慢病毒轉(zhuǎn)染髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞系DAOY和ONS-76
        2.3.1 實(shí)驗(yàn)試劑和儀器
        2.3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    2.4 檢測DAOY-K,DAOY-Z和ONS-76-K和ONS-76-Z的Caspase-3蛋白的表達(dá)
        2.4.1 實(shí)驗(yàn)試劑和儀器
        2.4.2 實(shí)驗(yàn)方法(含自配試劑)
        2.4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果及統(tǒng)計(jì)處理
    2.5 髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞系DAOY-K,DAOY-Z的MTT實(shí)驗(yàn)
        2.5.1 實(shí)驗(yàn)試劑和儀器
        2.5.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.5.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    2.6 DAOY-K和DAOY-Z的流式細(xì)胞儀凋亡檢測
        2.6.1 實(shí)驗(yàn)試劑或儀器
        2.6.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.6.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
討論
    3.1 MiRNA的概述
        3.1.1 MiRNA的生成和結(jié)構(gòu)
        3.1.2 MiRNA的功能
    3.2. MiRNA與髓母細(xì)胞瘤
        3.2.1 髓母細(xì)胞瘤相關(guān)miRNA的研究現(xiàn)狀
        3.2.2 MiRNA-22與髓母細(xì)胞瘤臨床診斷及預(yù)后
        3.2.3 MiRNA和臨床治療
    3.3 miRNA-22參與髓母發(fā)生的機(jī)制研究
創(chuàng)新性
限制性
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述 髓母細(xì)胞瘤相關(guān)miRNA的研究進(jìn)展
    參考文獻(xiàn)
英文縮略詞
攻讀學(xué)位期間研究成果
致謝



本文編號：3885628