目的:構(gòu)建miRNA-22慢病毒表達載體,上調(diào)(up-regulation)其在髓母細胞瘤細胞系DAOY和ONS-76中的表達。分析與miRNA-22分子結(jié)合靶基因的表達情況(如Casepase-3),觀察髓母細胞瘤細胞(DAOY,ONS-76)增殖(MTT實驗)、凋亡(流式細胞儀檢測實驗)等情況,闡明miRNA-22分子在髓母細胞瘤病理發(fā)生學中的作用機理。方法:1.慢病毒載體構(gòu)建:構(gòu)建miRNA-22真核表達質(zhì)粒,設(shè)計合成miRNA-22特異性RNA序列,用于RNAi實驗。2.細胞培養(yǎng):選定二株髓母細胞瘤細胞系(DAOY,ONS-76)進行培養(yǎng)。3.轉(zhuǎn)染實驗:將含有miRNA-22的慢病毒以及空載體病毒轉(zhuǎn)入上述細胞系,用以進行下一步的實驗。4.Western blot實驗:轉(zhuǎn)染后,上述細胞則分別變?yōu)榭蛰d體組(DAOY-K,ONS-76-K)以及轉(zhuǎn)入基因組(DAOY-Z,ONS-76-Z)。分別提取各組細胞蛋白,用Western blot技術(shù),測定其Casepase-3的表達量。5.DAOY-K和DAOY-Z進行MTT實驗,觀察其生長增殖生長情況。6.DAOY-K和DAOY-Z進行流式...

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【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
引言
材料方法
    2.1 構(gòu)建Has-mir-22過表達的慢病毒載體質(zhì)粒
        2.1.1 實驗儀器與試劑
        2.1.2 實驗方法
    2.2 髓母細胞瘤細胞系(DAOY,ONS-76)的培養(yǎng)
        2.2.1 實驗試劑和設(shè)備
        2.2.2 實驗方法和步驟
        2.2.3 實驗結(jié)果
    2.3 Has-mir-22過表達的慢病毒載體質(zhì)粒和空載體慢病毒轉(zhuǎn)染髓母細胞瘤細胞系DAOY和ONS-76
        2.3.1 實驗試劑和儀器
        2.3.2 實驗方法
        2.3.3 實驗結(jié)果
    2.4 檢測DAOY-K,DAOY-Z和ONS-76-K和ONS-76-Z的Caspase-3蛋白的表達
        2.4.1 實驗試劑和儀器
        2.4.2 實驗方法(含自配試劑)
        2.4.3 實驗結(jié)果及統(tǒng)計處理
    2.5 髓母細胞瘤細胞系DAOY-K,DAOY-Z的MTT實驗
        2.5.1 實驗試劑和儀器
        2.5.2 實驗方法
        2.5.3 實驗結(jié)果
    2.6 DAOY-K和DAOY-Z的流式細胞儀凋亡檢測
        2.6.1 實驗試劑或儀器
        2.6.2 實驗方法
        2.6.3 實驗結(jié)果
討論
    3.1 MiRNA的概述
        3.1.1 MiRNA的生成和結(jié)構(gòu)
        3.1.2 MiRNA的功能
    3.2. MiRNA與髓母細胞瘤
        3.2.1 髓母細胞瘤相關(guān)miRNA的研究現(xiàn)狀
        3.2.2 MiRNA-22與髓母細胞瘤臨床診斷及預后
        3.2.3 MiRNA和臨床治療
    3.3 miRNA-22參與髓母發(fā)生的機制研究
創(chuàng)新性
限制性
結(jié)論
參考文獻
綜述 髓母細胞瘤相關(guān)miRNA的研究進展
    參考文獻
英文縮略詞
攻讀學位期間研究成果
致謝



本文編號：3885628