研究發(fā)現(xiàn),拮抗P2X7受體可明顯減輕缺血/再灌注導(dǎo)致的大腦損傷,且拮抗P2X7受體可抑制細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶(extracellular regulated protein kinase,E RK)激酶的激活,因此本實(shí)驗(yàn)主要是探討ERK激酶在拮抗P2X7受體抗大鼠腦缺血/再灌注損傷中的作用及可能機(jī)制,實(shí)驗(yàn)中使用P2X7受體的拮抗劑亮藍(lán)G(Brilliant Blue G,BBG)及ERK激酶的抑制劑PD98059用于研究。在體實(shí)驗(yàn):制備大鼠的大腦中動脈栓塞模型,進(jìn)行大腦的缺血/再灌注。離體實(shí)驗(yàn):原代培養(yǎng)星形膠質(zhì)細(xì)胞,制備星形膠質(zhì)細(xì)胞的缺氧/復(fù)氧模型以模擬在體的大鼠大腦缺血/再灌注。目的:探討拮抗P2X7受體對大鼠腦缺血/再灌注損傷的作用及可能機(jī)制。方法:1.大鼠隨機(jī)分為5組:假手術(shù)(sham)組,缺血/再灌注(I/R)組,缺血/再灌注+BBG(I/R+BBG)組,缺血/再灌注+PD98059(I/R+PD98059)組,缺血/再灌注+BBG+PD98059(I/R+BBG+PD98059)組。采用線栓法建立大鼠大腦中動脈栓塞(middle cerebral artery occlusio...

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
前言
材料與方法
    1. 材料
    2. 儀器和設(shè)備
    3. 實(shí)驗(yàn)方法
        3.1 實(shí)驗(yàn)分組和大鼠腦I/R損傷模型的制備
        3.2 神經(jīng)行為學(xué)評價
        3.3 腦梗死體積的測定
        3.4 檢測蛋白的表達(dá)變化
        3.5 星形膠質(zhì)細(xì)胞的原代培養(yǎng)、純化及傳代
        3.6 星形膠質(zhì)細(xì)胞純度鑒定
        3.7 實(shí)驗(yàn)分組及星形膠質(zhì)細(xì)胞缺氧/復(fù)氧模型制作
        3.8 星形膠質(zhì)細(xì)胞存活率的檢測
        3.9 細(xì)胞接種熒光示蹤法檢測星形膠質(zhì)細(xì)胞縫隙連接功能
        3.10 Hoechst 33258 檢測星形膠質(zhì)細(xì)胞的凋亡情況
        3.11 蛋白提取
    4. 統(tǒng)計學(xué)分析
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    1. 拮抗P2X7受體對腦I/R損傷大鼠神經(jīng)功能的影響
    2. 拮抗P2X7受體對腦I/R損傷大鼠腦梗死體積影響
    3. 拮抗P2X7受體對腦I/R損傷大鼠腦組織中ERK、p-ERK蛋白表達(dá)的影響
    4. 抑制ERK激酶對腦I/R損傷大鼠神經(jīng)功能的影響
    5. 抑制ERK激酶對腦I/R損傷大鼠腦梗死體積影響
    6. 抑制ERK激酶對腦I/R損傷大鼠腦組織中Bax、Bcl-2 蛋白表達(dá)的影響
    7. 抑制ERK激酶對腦I/R損傷大鼠腦組織中p-ERK、ERK、Cx43蛋白表達(dá)的影響
    8. 星形膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察和純度鑒定
    9. 拮抗P2X7受體對缺氧/復(fù)氧損傷星形膠質(zhì)細(xì)胞存活率的影響
    10. 拮抗P2X7受體對缺氧/復(fù)氧損傷的星形膠質(zhì)細(xì)胞細(xì)胞凋亡的影響
    11. 拮抗P2X7受體對缺氧/復(fù)氧星形膠質(zhì)細(xì)胞中p-ERK蛋白表達(dá)的影響
    12. 抑制ERK激酶對缺氧/復(fù)氧損傷星形膠質(zhì)細(xì)胞存活率的影響
    13. 抑制ERK激酶對星形膠質(zhì)細(xì)胞凋亡的影響
    14. 抑制ERK激酶對H/R損傷星形膠質(zhì)細(xì)胞中Bax、Bcl-2 蛋白表達(dá)的影響
    15. 抑制ERK激酶對H/R損傷星形膠質(zhì)細(xì)胞中p-ERK、Cx43蛋白表達(dá)的影響
    16. 拮抗P2X7受體對星形膠質(zhì)細(xì)胞間GJ功能的影響
討論
    1. 拮抗P2X7受體減輕腦I/R損傷及星形膠質(zhì)細(xì)胞H/R損傷
    2. 拮抗P2X7受體可以抑制ERK激酶的激活
    3. ERK激酶對縫隙連接及Cx43的調(diào)控
    4. 拮抗P2X7受體減輕腦缺血的其他可能作用機(jī)制
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
附錄A 主要英文縮略詞表
附錄B 主要試劑配制方法
附錄C 個人簡歷及已發(fā)表文章
附錄D 綜述
    參考文獻(xiàn)



本文編號：3871738