研究背景:缺血性卒中是指因供血動脈狹窄或堵塞導致局部腦組織供血不足的一種急性腦血管病,最終發(fā)展為部分腦功能喪失,具有發(fā)病率、致死率、致殘率高的特點。目前,臨床上藥物治療手段仍以組織纖溶酶原激活劑溶栓為主,但治療時間窗狹窄和再灌注損傷風險大的缺點限制了其臨床應(yīng)用。內(nèi)皮細胞,作為血腦屏障的基本組成,在腦缺血損傷過程中對維持血腦屏障的功能、減少神經(jīng)炎癥的發(fā)生至關(guān)重要。然而,目前仍然沒有找到理想的“內(nèi)皮細胞保護劑”應(yīng)對缺血引起的血管內(nèi)皮損傷問題。因此,從新的視角尋找血管內(nèi)皮干預策略,是當前缺血性腦卒中防治共同關(guān)注的研究命題之一。近年來,外泌體(Exosomes)作為細胞分泌的一種可攜帶大量生物信息穿過血腦屏障的囊泡,在缺血性腦卒中的診斷和治療方面具有巨大潛力。因此,以外泌體作為研究切入點,探索卒中病程中潛在的分子靶點并進行干預,對建立有效的卒中干預策略具有重大意義。研究目的:以外泌體中含量豐富的mi RNA為研究對象,尋找缺血性卒中患者循環(huán)外泌體中差異表達的mi RNA。論證差異表達mi RNA是否可以作為缺血性腦卒中治療的有效靶點。實驗方法和結(jié)果:1.過夜超速離心法從患者血清樣本中純化外泌體...

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【學位級別】：碩士

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1 引言
2 實驗儀器與材料
    2.1 實驗儀器
    2.2 材料
3 實驗方法
    3.1 細胞培養(yǎng)
    3.2 OGD模型構(gòu)建
    3.3 蛋白提取與定量
    3.4 免疫印跡(Western Blot)
    3.5 細胞免疫熒光(Immunocytochemistry)
    3.6 RNA提取及RT-qPCR熒光定量分析
    3.7 去外泌體培養(yǎng)基的制備和外泌體提取
    3.8 透射電鏡觀察外泌體的形態(tài)
    3.9 外泌體粒徑檢測
    3.10 miRNA轉(zhuǎn)錄組學分析
    3.11 mimics/inhibitor轉(zhuǎn)染
    3.12 TUNEL染色
    3.13 流式細胞凋亡檢測
    3.14 原代細胞培養(yǎng)
    3.15 MCAO模型建立
    3.16 統(tǒng)計學方法
4 實驗結(jié)果
    4.1 超速離心提取血清外泌體方法學構(gòu)建
    4.2 缺血性腦卒中患者組血清外泌體含量相較于正常對照組上調(diào)
    4.3 缺血性腦卒中患者血清外泌體miRNAs表達譜生物信息學分析
    4.4 MCAO模型小鼠的梗死灶miR-339-5p上調(diào)
    4.5 OGD上調(diào)PC12 細胞和其外泌體中的miR-339-5p
    4.6 OGD模型中內(nèi)皮細胞接收更多外泌體miR-339-5p
    4.7 miR-339-5p減少OGD損傷模型導致的內(nèi)皮細胞凋亡
    4.8 miR-339-5p可能通過下調(diào)BAX和 BCL2L11 減少內(nèi)皮細胞凋亡
    4.9 miR-339-5p減少OGD損傷導致的內(nèi)皮細胞炎癥因子上調(diào)
5 討論
6 結(jié)論
參考文獻
綜述 外泌體在中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病診斷和治療中的研究進展
    參考文獻
作者簡歷及在學期間所取得的科研成果



本文編號：3831335