本研究以帕金森(PD)和腦缺血損傷模型為例,采用原代皮層純星形膠質細胞培養(yǎng)體系、皮層或中腦純神經元培養(yǎng)體系以及中腦神經元-星形膠質細胞混合培養(yǎng)體系作為研究對象,探討梓醇和PBEF在神經退行性疾病中的保護作用和機理,主要內容如下： 1.梓醇的神經保護作用 梓醇在純星形膠質細胞培養(yǎng)體系中的神經保護作用。一方面,采用H202誘導的星形膠質細胞氧化應激損傷,結果發(fā)現(xiàn),梓醇能夠明顯提高細胞活力,減少細胞內ROS的形成。此外,梓醇還通過增強谷胱甘肽還原酶(GR)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)等谷胱甘肽代謝循環(huán)中關鍵酶的活性以及降低氧化型谷胱甘肽(GSSG)在總谷胱甘肽(GSx)中的比例,從而抑制H202誘導的氧化應激損傷。但是,梓醇對過氧化氫酶(CAT)活性的增強作用卻并不明顯,說明梓醇在此損傷模型中潛在的保護機制主要是增強谷胱甘肽代謝循環(huán)效率以及抑制ROS生成。另一方面,采用脂多糖(LPS)與干擾素-Y(IFN-Y)共同刺激星形膠質細胞誘導炎癥反應,結果表明,梓醇顯著抑制了一氧化氮(NO)和ROS的生成,削弱了誘導型一氧化氮合酶(iNOS)的活性。此外,梓醇還明顯下調了相關炎癥基因iNOS...

【文章頁數】：131 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
引言
1. 文獻綜述
    1.1 帕金森綜合癥概述
        1.1.1 PD的致病機制
        1.1.2 PD的預防與治療措施
        1.1.3 PD模型的構建
    1.2 腦缺血缺氧損傷的概述
        1.2.1 腦缺血的致病機制
        1.2.2 腦缺血損傷模型的構建
    1.3 星形膠質細胞概述
        1.3.1 星形膠質細胞的特性
        1.3.2 星形膠質細胞的生物學功能
        1.3.3 星形膠質細胞與神經元之間的相互作用
        1.3.4 星形膠質細胞與神經元之間的谷氨酸-谷氨酰胺代謝偶聯(lián)
        1.3.5 星形膠質細胞的激活與炎癥反應
    1.4 NAD、NAM和PBEF的研究概況
        1.4.1 NAD的合成與代謝過程
        1.4.2 PBEF的生物學功能
    1.5 梓醇的研究概況
        1.5.1 梓醇的理化性質
        1.5.2 梓醇的藥理活性
    1.6 選題依據
2. 梓醇在純星形膠質細胞培養(yǎng)體系中的神經保護作用
    2.1 實驗材料與設備
        2.1.1 實驗動物
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要儀器
    2.2 實驗方法
        2.2.1 小鼠皮層純星形膠質細胞培養(yǎng)
        2.2.2 免疫細胞化學染色
        2.2.3 細胞活力測定
        2.2.4 ROS含量測定
        2.2.5 GSx與GSSG含量測定
        2.2.6 GR活性測定
        2.2.7 GSH-Px活性測定
        2.2.8 CAT活性測定
        2.2.9 NO含量和iNOS活性測定
        2.2.10 反轉錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)
        2.2.11 NF-KB表達的測定
        2.2.12 統(tǒng)計學分析方法
    2.3 實驗結果
        2.3.1 梓醇對H202誘導的星形膠質細胞氧化應激損傷的保護作用
            2.3.1.1 星形膠質細胞的形態(tài)學觀察
            2.3.1.2 H202最佳損傷濃度的篩選
            2.3.1.3 梓醇對H202誘導的星形膠質細胞損傷的保護作用
            2.3.1.4 梓醇對H202誘導的星形膠質細胞ROS生成的影響
            2.3.1.5 梓醇對星形膠質細胞GSx與GSSG含量的影響
            2.3.1.6 梓醇對星形膠質細胞GR、GSH-Px和CAT活性的影響
        2.3.2 梓醇對LPS+IFN-Y誘導的星形膠質細胞激活的抑制作用
            2.3.2.1 梓醇對LPS+IFN-Y誘導的星形膠質細胞激活的形態(tài)學影響
            2.3.2.2 梓醇對LPS+IFN-Y誘導的星形膠質細胞NO生成和iNOS活性的影響
            2.3.2.3 梓醇對LPS+IFN-Y誘導的星形膠質細胞ROS生成的影響
            2.3.2.4 梓醇對LPS+IFN-Y誘導的星形膠質細胞炎癥因子表達的影響
            2.3.2.5 梓醇對LPS+IFN-Y誘導的星形膠質細胞NF-KB活性的影響
    2.4 討論
    2.5 小結
3. 梓醇在中腦純神經元培養(yǎng)體系中的神經保護作用
    3.1 實驗材料與設備
        3.1.1 實驗動物
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 主要儀器
    3.2 實驗方法
        3.2.1 小鼠中腦純神經元的培養(yǎng)
        3.2.2 免疫細胞化學分析
        3.2.3 Hoechst 33258染色
        3.2.4 流式細胞儀分析凋亡與壞死
        3.2.5 NO含量測定
        3.2.6 免疫印記(Western Blotting)
        3.2.7 統(tǒng)計學分析方法
    3.3 實驗結果
        3.3.1 梓醇對魚藤酮誘導的中腦多巴胺能神經元損傷的保護作用
        3.3.2 梓醇對魚藤酮誘導的中腦神經元凋亡與壞死的影響
        3.3.3 梓醇對魚藤酮誘導的中腦神經元NO生成和iNOS表達的影響
        3.3.4 梓醇對魚藤酮介導的JNK和ERK信號通路的調控
    3.4 討論
    3.5 小結
4. 梓醇在中腦神經元-星形膠質細胞混合培養(yǎng)體系中的神經保護作用
    4.1 實驗材料及設備
        4.1.1 實驗動物
        4.1.2 主要試劑
        4.1.3 主要設備
    4.2 實驗方法
        4.2.1 小鼠中腦神經元.星形膠質細胞混合培養(yǎng)
        4.2.2 細胞活力與LDH的測定
        4.2.3 細胞線粒體提取
        4.2.4 ROS含量測定
        4.2.5 線粒體膜電位(MMP)的測定
        4.2.6 線粒體復合物I活性測定
        4.2.7 線粒體通透性轉運孔(MPTp)開放度的測定
        4.2.8 細胞內鈣離子(Ca2+)測定
        4.2.9 統(tǒng)計學分析方法
    4.3 實驗結果
        4.3.1 梓醇對MPP+誘導的中腦神經元損傷的的保護作用
        4.3.2 梓醇對MPP+誘導的線粒體功能紊亂的影響
        4.3.3 梓醇對MPP+誘導的ROS生成和Ca2+超載的影響
        4.3.4 梓醇對MPP+誘導的MPTp開放的影響
    4.4 討論
    4.5 小結
5. PBEF在腦缺血缺氧損傷中的神經保護作用
    5.1 實驗材料與設備
        5.1.1 實驗動物
        5.1.2 主要試劑
        5.1.3 主要儀器
    5.2 實驗方法
        5.2.1 原代皮層神經元的培養(yǎng)以及OGD模型的構建
        5.2.2 細胞的存活與死亡測定
        5.2.3 免疫細胞化學染色
        5.2.4 活細胞實時成像測定MMP
        5.2.5 細胞內NAD+含量測定
        5.2.6 細胞內ATP含量測定
        5.2.7 細胞轉染
        5.2.8 線粒體生物合成的測定
        5.2.9 統(tǒng)計學分析方法
    5.3 實驗結果
        5.3.1 外源NAD+與NAM對OGD及谷氨酸誘導的神經元損傷的保護作用
        5.3.2 外源NAD+與NAM對FK866引起的神經元損傷的保護作用
        5.3.3 FK866加劇OGD誘導的神經元損傷與NAD+耗竭
        5.3.4 PBEF通過調節(jié)NAD+合成削弱神經元損傷
        5.3.5 PBEF在正�；騉GD損傷條件下對細胞ATP水平的影響
        5.3.6 PBEF在損傷條件下對線粒體生物合成的影響
        5.3.7 PBEF在谷氨酸興奮性毒性損傷中對MMP的影響
    5.4 討論
    5.5 小結
結論與展望
    結論
    展望
創(chuàng)新點
參考文獻
附錄 縮略詞表
攻讀博士學位期間發(fā)表學術論文情況
致謝
作者簡介



本文編號：3827925