目的：探討前腦缺血再灌后星形膠質(zhì)細(xì)胞神經(jīng)酰胺(ceramide)特異性積累的分子機(jī)制以及對(duì)神經(jīng)元損傷的影響。 方法：采用成年清潔級(jí)雄性SD大鼠,建立四動(dòng)脈阻斷前腦缺血再灌注模型,側(cè)腦室分別給予中性鞘磷脂酶2(N-SMase2) siRNA、control siRNA、N-SMase2活性抑制劑GW4869、TNFa受體抑制劑R-7050、p38MAPK抑制劑SB-203580、PP2B抑制劑、PKCδ抑制劑Rottlerin、A2bAR拮抗劑MRS-1754、N-SMase2激動(dòng)劑柔紅霉素(DNR)。觀察中性鞘磷脂酶(N-SMase)、酸性鞘磷脂酶(A-SMase)及N-SMase2活性變化；免疫熒光或免疫組化檢測(cè)ceramide及相關(guān)蛋白神經(jīng)細(xì)胞定位；尼氏染色實(shí)驗(yàn)觀察神經(jīng)元損傷情況；TUNEL實(shí)驗(yàn)觀察神經(jīng)元凋亡變化；Western blot實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)N-SMase2、p38MAPK及p-p38MAPK蛋白水平變化；免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)檢測(cè)N-SMase2與RACK1、EED之間的結(jié)合作用：Realtime PCR測(cè)定IL-1β、IL-6、TNFα等前炎癥因子mRNA水平變化。同時(shí)采用體外分離...

【文章頁(yè)數(shù)】：88 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
前言
材料和方法
    1. 實(shí)驗(yàn)材料與試劑
        1.1 儀器設(shè)備
        1.2 試劑來(lái)源
    2. 研究方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及大鼠腦缺血模型制作
        2.2 側(cè)腦室織藥物和siRNA
        2.3 大鼠原代星形膠質(zhì)細(xì)胞的培養(yǎng)
        2.4 大鼠原代神經(jīng)元的培養(yǎng)
        2.5 氧戲糖剝脫模型(OGD)
        2.6 細(xì)胞共培養(yǎng)
        2.7 海馬組織蛋白提取
        2.8 蛋白濃度測(cè)定
        2.9 免疫印跡（Western blot)
        2.10 免疫共沉淀
        2.11 鞘磷脂海活性測(cè)定和特異性中性鞘磷脂酶2活性測(cè)定
        2.12 免疫突光及免疫組織化學(xué)
        2.13 尼氏染色
        2.14 TUNEL細(xì)胞調(diào)亡檢測(cè)法
        2.15 Real-time RT-PCR
        2.16 數(shù)據(jù)處理
結(jié)果
    1.前腦缺血誘導(dǎo)ceramide在海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞而不是神經(jīng)元的特異性積累且與N-SMase激活密切相關(guān)
    2.前腦缺血誘導(dǎo)星形膠質(zhì)細(xì)胞中N-SMase2而不是A-SMase的快速激活
    3.腦缺血/再灌中N-SMase2激活參與了誘導(dǎo)神經(jīng)元損傷
    4.TNFaR/RACKl/EED通路部分介導(dǎo)了腦缺血N-SMase2的早期激活
    5.P38MAPK；誘導(dǎo)的N-SMase2磷酸化是腦缺血N-SMase2/ceramide途徑激活的重要機(jī)制
    6.AibAR調(diào)控了腦缺血P38MAPK剌激N-SMase2/ceramide途徑的撖活
    7.腦缺血/再灌中N-SMase2的瀲活剌撖了星形膠質(zhì)細(xì)胞炎癥因子的生成
    8.前腦缺血星形膠質(zhì)細(xì)胞ceramide積累誘導(dǎo)了周圍神經(jīng)元炎性次級(jí)損傷
實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)及英文注釋
討論
小結(jié)
參考文獻(xiàn)
附錄(一) 綜述
    參考文獻(xiàn)
附錄(二) 縮略詞表
附錄(三) 發(fā)表文章
致謝



本文編號(hào)：3822593