目的:從小鼠胚胎大腦皮質(zhì)中分離并鑒定靜息和活化的神經(jīng)干細(xì)胞。方法:通過流式細(xì)胞術(shù),從胚胎14.5 d的小鼠大腦皮質(zhì)中分選出大小不同的細(xì)胞團;利用免疫熒光技術(shù)檢測神經(jīng)干細(xì)胞標(biāo)志物Pax6以及增殖標(biāo)志物Ki67的表達(dá)變化;借助RT-qPCR分析兩組細(xì)胞中干細(xì)胞標(biāo)志基因Pax6、Oct4、Sox2和Nanog的表達(dá)情況;采用流式細(xì)胞術(shù)及RT-qPCR分析兩組細(xì)胞所處的周期;體外培養(yǎng)對大、小細(xì)胞組進(jìn)行增殖能力檢測。結(jié)果:免疫熒光結(jié)果表明,分離出的兩類細(xì)胞均表達(dá)Pax6,且大細(xì)胞組Ki67為陽性,小細(xì)胞組為陰性。細(xì)胞周期分析顯示,小細(xì)胞組G₀/G₁期比例高于大細(xì)胞組,而G₂/M期為0,且cyclin A和cyclin B的表達(dá)顯著低于大細(xì)胞組(P<0.05)。體外培養(yǎng)顯示,相對于大細(xì)胞,小細(xì)胞形成的微球數(shù)量少,速度慢;大、小細(xì)胞形成的微球消化后,Pax6和Ki67染色均陽性,且陽性率無顯著差異(P>0.05)。結(jié)論:大、小細(xì)胞團分別為活化和靜息的神經(jīng)干細(xì)胞。活化的干細(xì)胞具有較強的增殖能力,而靜息干細(xì)胞自我復(fù)制與增殖能力...

【文章頁數(shù)】：8 頁

【文章目錄】：
材料和方法
    1 動物
    2 主要試劑
        2.1 細(xì)胞培養(yǎng)試劑
        2.2 抗體及其他試劑
        2.3 實驗儀器
    3 主要方法
        3.1 大腦皮層單細(xì)胞懸液制備
        3.2 流式細(xì)胞術(shù)
        3.3RT-qPCR
        3.4 細(xì)胞周期的檢測
        3.5 細(xì)胞培養(yǎng)
        3.6 免疫熒光染色
    4 統(tǒng)計學(xué)處理
結(jié)果
    1小鼠E14.5大腦皮質(zhì)經(jīng)流式細(xì)胞術(shù)分選為大、小兩團細(xì)胞
    2大細(xì)胞主要為神經(jīng)干細(xì)胞，小細(xì)胞部分為神經(jīng)干細(xì)胞
    3 RT-qPCR檢測大、小細(xì)胞團干細(xì)胞特異性標(biāo)志基因的表達(dá)
    4 大、小細(xì)胞增殖特性的檢測
    5 大、小細(xì)胞的細(xì)胞周期及周期相關(guān)蛋白的檢測
    6 大、小細(xì)胞體外培養(yǎng)特性不同
    7 小細(xì)胞在體外可以被激活成具有大細(xì)胞活性的細(xì)胞
討論



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