目的:從小鼠胚胎大腦皮質(zhì)中分離并鑒定靜息和活化的神經(jīng)干細胞。方法:通過流式細胞術(shù),從胚胎14.5 d的小鼠大腦皮質(zhì)中分選出大小不同的細胞團;利用免疫熒光技術(shù)檢測神經(jīng)干細胞標(biāo)志物Pax6以及增殖標(biāo)志物Ki67的表達變化;借助RT-qPCR分析兩組細胞中干細胞標(biāo)志基因Pax6、Oct4、Sox2和Nanog的表達情況;采用流式細胞術(shù)及RT-qPCR分析兩組細胞所處的周期;體外培養(yǎng)對大、小細胞組進行增殖能力檢測。結(jié)果:免疫熒光結(jié)果表明,分離出的兩類細胞均表達Pax6,且大細胞組Ki67為陽性,小細胞組為陰性。細胞周期分析顯示,小細胞組G₀/G₁期比例高于大細胞組,而G₂/M期為0,且cyclin A和cyclin B的表達顯著低于大細胞組(P<0.05)。體外培養(yǎng)顯示,相對于大細胞,小細胞形成的微球數(shù)量少,速度慢;大、小細胞形成的微球消化后,Pax6和Ki67染色均陽性,且陽性率無顯著差異(P>0.05)。結(jié)論:大、小細胞團分別為活化和靜息的神經(jīng)干細胞�；罨母杉毎哂休^強的增殖能力,而靜息干細胞自我復(fù)制與增殖能力...

【文章頁數(shù)】：8 頁

【文章目錄】：
材料和方法
    1 動物
    2 主要試劑
        2.1 細胞培養(yǎng)試劑
        2.2 抗體及其他試劑
        2.3 實驗儀器
    3 主要方法
        3.1 大腦皮層單細胞懸液制備
        3.2 流式細胞術(shù)
        3.3RT-qPCR
        3.4 細胞周期的檢測
        3.5 細胞培養(yǎng)
        3.6 免疫熒光染色
    4 統(tǒng)計學(xué)處理
結(jié)果
    1小鼠E14.5大腦皮質(zhì)經(jīng)流式細胞術(shù)分選為大、小兩團細胞
    2大細胞主要為神經(jīng)干細胞，小細胞部分為神經(jīng)干細胞
    3 RT-qPCR檢測大、小細胞團干細胞特異性標(biāo)志基因的表達
    4 大、小細胞增殖特性的檢測
    5 大、小細胞的細胞周期及周期相關(guān)蛋白的檢測
    6 大、小細胞體外培養(yǎng)特性不同
    7 小細胞在體外可以被激活成具有大細胞活性的細胞
討論



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