發(fā)布時間：2023-03-19 08:25

　　目的：1、揭示A2AR在實驗性自身免疫性重癥肌無力（ExperimentalAutoimmune Myasthenia Gravis，EAMG）發(fā)生、發(fā)展中的作用；2、證實A2AR是通過作用于EAMG病理性T細胞進而影響EAMG的發(fā)病過程；3、探討激活A2AR調節(jié)EAMG疾病進程的具體分子機制。 方法：1、通過主動免疫建立大鼠EAMG動物模型；2、組織病理學實驗技術檢測A2AR的表達和相關病理學改變；3、FACS方法檢測A2AR在CD4+T細胞、CD8+T細胞和B細胞上的分布；4、體外加入A2AR激動劑CGS21680、A2AR拮抗劑SCH58261、ZM241385，cAMP拮抗劑H-89后ELISA方法檢測細胞培養(yǎng)上清中anti-AChR IgG的分泌情況、3H標記技術檢測淋巴細胞增殖能力、FACS方法檢測Th1、Th2、Th17及Treg四種亞型的改變；5、免疫磁珠法分選細胞獲得B細胞加入CGS21680后ELISA方法檢測細胞培養(yǎng)上清中anti-AChR IgG的分泌情況、3H標記技術檢測B淋巴細胞增殖能力；6、于一次免疫前一天和二次免疫前一天分別給予CGS21680，觀察老鼠...

【文章頁數(shù)】：88 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
中英文對照
中文摘要
Abstract
1、文獻綜述
    1.1 重癥肌無力簡介
        1.1.1 重癥肌無力
        1.1.2 實驗性自身免疫性重癥肌無力
        1.1.3 MG/EAMG 的免疫調節(jié)機制
    1.2 腺苷 A2A 受體簡介
        1.2.1 腺苷
        1.2.2 腺苷受體
        1.2.3 腺苷 A2A 受體
        1.2.4 A2AR 治療自身免疫性疾病
        1.2.5 A2AR 的功能
2、前言
3、材料與方法
    3.1 實驗材料
        3.1.1 實驗動物及細胞
        3.1.2 儀器設備
        3.1.3 藥品與試劑
    3.2 主要試劑配制方法
        3.2.1 緩沖液
        3.2.2 細胞培養(yǎng)液
        3.2.3 免疫病理實驗用試劑
        3.2.4 免疫抗原
        3.2.5 流式所用試劑
        3.2.6 其它試劑
    3.3 實驗方法
        3.3.1 EAMG 動物模型的建立及評定
        3.3.2 CGS21680 體內給藥治療
        3.3.3 處死動物，組織取材
        3.3.4 淋巴細胞培養(yǎng)
        3.3.5 檢測 A2AR 在 EAMG 中的作用
        3.3.6 抗 AChR IgG 抗體的檢測
        3.3.7 ELISA 方法檢測血清及細胞培養(yǎng)上清中細胞因子分泌情況
        3.3.8 淋巴細胞增殖實驗
        3.3.9 流式細胞術檢測
        3.3.10 磁珠分選 B 淋巴細胞
        3.3.11 免疫熒光法檢測神經(jīng)肌肉接頭處 AChR、C3 和 IgG 的變化情況
    3.4 數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計學檢驗
4、實驗結果
    4.1 EAMG 模型的建立
        4.1.1 臨床評分和體重
        4.1.2 EAMG 大鼠血清中的 anti-AChR IgG 檢測
        4.1.3 EAMG 大鼠神經(jīng)肌肉接頭處 AChR 缺失并且 IgG 和補體 C3 沉著
    4.2 檢測 A2AR 在 EAMG 中的表達
        4.2.1 EAMG 淋巴結和脾中的 A2AR 的表達
        4.2.2 A2AR 在 CD4+T 細胞、CD8+T 細胞和 B 細胞上的表達
    4.3 激活 A2AR 觀察 AChR 特異性淋巴細胞的變化
        4.3.1 激活 A2AR 后對 AChR 特異性淋巴細胞 anti-AChR IgG 分泌的影響
        4.3.2 激活 A2AR 后對 AChR 特異性淋巴細胞 anti-AChR IgG 分泌細胞的影響
        4.3.3 激活 A2AR 后對 AChR 特異性淋巴細胞增殖活性的影響
    4.4 體外激活 A2AR 后對 AChR 特異性 T 淋巴細胞和 B 淋巴細胞的影響
        4.4.1 激活 A2AR 后對 B 細胞增殖和抗體分泌的作用
        4.4.2 激活 A2AR 后能夠改變 Th 亞群的分布
    4.5 體內激活 A2AR 后對 EAMG 發(fā)病的影響
        4.5.1 預防性體內給藥實驗完全緩解 EAMG 的發(fā)病而治療性給藥部分緩解 EAMG 的發(fā)病過程
        4.5.2 治療性給藥和預防性給藥對于血清中 anti-AChR IgG 的影響和AChR 特異性淋巴細胞增殖能力的影響
        4.5.3 預防性給藥方案組能夠逆轉 Th 細胞亞群失衡
5、討論
6、結論
致謝
參考文獻
個人簡歷



本文編號：3764919