研究背景中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷是指由于各種原因造成的腦和脊髓的損傷以及神經(jīng)功能障礙,而神經(jīng)元損傷及功能障礙被認(rèn)為是最為重要的機(jī)制之一。以往研究發(fā)現(xiàn),神經(jīng)元損傷的相關(guān)機(jī)制主要包括谷氨酸興奮性毒性、鈣離子超載、氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)等,其中研究最為深入的是由谷氨酸、谷氨酸受體及鈣離子代謝介導(dǎo)的興奮性神經(jīng)損傷相關(guān)機(jī)制。但是仍有很多問題沒有解決,如m Glu R5在神經(jīng)元損傷中的作用,以及綜合調(diào)控外鈣內(nèi)流和內(nèi)鈣釋放對(duì)神經(jīng)元損傷的影響等。Homer1蛋白是一類新型的突觸后致密物質(zhì),在神經(jīng)元功能調(diào)控中發(fā)揮重要作用。我們以往的研究表明,在創(chuàng)傷性神經(jīng)元損傷后,Homer1a表達(dá)明顯增高,可能通過影響I組m Glu Rs在突觸后膜上的錨定影響神經(jīng)元損傷。然而,Homer1b/c和Homer1a在神經(jīng)元損傷中究竟發(fā)揮什么樣的作用,其具體分子機(jī)制如何尚不清楚。實(shí)驗(yàn)?zāi)康谋狙芯康哪康氖?(1)以鈣離子代謝和氧化應(yīng)激反應(yīng)為切入點(diǎn),初步探討谷氨酸所致神經(jīng)元損傷的機(jī)制,研究m Glu R5在神經(jīng)元損傷中的作用;(2)研究鈣庫(kù)調(diào)節(jié)鈣離子通道在神經(jīng)元損傷中的作用,探討其阻滯劑神經(jīng)保護(hù)作用的可能機(jī)制;(3)研究Homer1b/c在神...

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

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中文摘要
Abstract
前言
文獻(xiàn)回顧
    第一部分 谷氨酸受體信號(hào)通路與神經(jīng)元損傷
        1. 神經(jīng)元損傷相關(guān)機(jī)制
            1.1 興奮性氨基酸學(xué)說
            1.2 鈣離子超載學(xué)說
            1.3 其他相關(guān)學(xué)說
        2. 谷氨酸受體與神經(jīng)元損傷
            2.1 NMDAR與神經(jīng)元損傷
            2.2 AMPAR與神經(jīng)元損傷
            2.3 m Glu Rs與神經(jīng)元損傷
    第二部分 Homer1蛋白與神經(jīng)元損傷相關(guān)疾病
        1. Homer家族蛋白
        2. Homer1蛋白
            2.1 Homer1蛋白的結(jié)構(gòu)特征
            2.2 Homer1蛋白與其他突觸后致密物質(zhì)的相互作用
        3. Homer1與神經(jīng)元損傷相關(guān)疾病
            3.1 Homer1與神經(jīng)病理性痛
            3.2 Homer1與阿爾茲海默癥
            3.3 Homer1與TBI
實(shí)驗(yàn)一 mGluR5信號(hào)通路在神經(jīng)元損傷中的作用
    1 材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    2 方法
        2.1 小鼠皮層原代神經(jīng)元培養(yǎng)
        2.2 谷氨酸損傷模型的建立
        2.3 細(xì)胞活力檢測(cè)
        2.4 乳酸脫氫酶釋放檢測(cè)
        2.5 神經(jīng)元凋亡Caspase-3 活性檢測(cè)
        2.6 鈣離子成像
        2.7 ROS含量檢測(cè)
        2.8 小鼠TBI模型的建立
        2.9 腦干濕重檢測(cè)
        2.10 腦組織缺損檢測(cè)
        2.11 腦組織切片神經(jīng)細(xì)胞凋亡TUNEL染色
        2.12 小鼠神經(jīng)功能學(xué)NSS評(píng)分
        2.13 水迷宮實(shí)驗(yàn)
        2.14 熒光實(shí)時(shí)定量PCR
        2.15 Western blot檢測(cè)
        2.16 免疫熒光染色
        2.17 數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 谷氨酸引起的興奮性神經(jīng)元損傷是一種鈣離子依賴性的氧化應(yīng)激性損傷
        3.2 mGluR5激活對(duì)谷氨酸引起興奮性神經(jīng)元損傷具有保護(hù)作用
        3.3 mGluR5通過PKC-ERK信號(hào)通路發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用
        3.4 mGluR5在TBI模型中發(fā)揮有限的神經(jīng)保護(hù)作用
    4 討論（Discussion）
實(shí)驗(yàn)二 鈣庫(kù)調(diào)節(jié)鈣通道在神經(jīng)元損傷中的作用
    1 材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    2 方法
        2.1 小鼠皮層原代神經(jīng)元培養(yǎng)
        2.2 谷氨酸損傷模型的建立
        2.3 細(xì)胞活力檢測(cè)
        2.4 乳酸脫氫酶釋放檢測(cè)
        2.5 Hoechst染色
        2.6 PI染色
        2.7 流式細(xì)胞術(shù)
        2.8 鈣離子成像
        2.9 熒光實(shí)時(shí)定量PCR
        2.10 Western blot檢測(cè)
        2.11 神經(jīng)元慢病毒轉(zhuǎn)染
        2.12 數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 SKF-96365減輕谷氨酸所致興奮性神經(jīng)元損傷
        3.2 SKF-96365通過Homer1-Ca2+信號(hào)通路發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用
    4 討論（Discussion）
實(shí)驗(yàn)三 Homer1b/c調(diào)控內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體功能在神經(jīng)元損傷中的作用
    1 材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    2 方法
        2.1 小鼠皮層原代神經(jīng)元培養(yǎng)
        2.2 神經(jīng)元si RNA轉(zhuǎn)染
        2.3 谷氨酸損傷模型的建立
        2.4 乳酸脫氫酶釋放檢測(cè)
        2.5 ROS含量檢測(cè)
        2.6 Hoechst染色
        2.7 PI染色
        2.8 鈣離子成像
        2.9 免疫熒光染色
        2.10 Western blot檢測(cè)
        2.11 數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 下調(diào)Homer1b/c減輕谷氨酸所致興奮性神經(jīng)元損傷
        3.2 下調(diào)Homer1b/c抑制谷氨酸所致的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣離子釋放
        3.3 下調(diào)Homer1b/c減輕谷氨酸所致內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激
        3.4 下調(diào)Homer1b/c保護(hù)谷氨酸損傷后的線粒體功能
    4 討論（Discussion）
實(shí)驗(yàn)四 Homer1a調(diào)控鈣離子穩(wěn)態(tài)在神經(jīng)元損傷中的作用
    1 材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    2 方法
        2.1 小鼠皮層原代神經(jīng)元培養(yǎng)
        2.2 谷氨酸損傷模型的建立
        2.3 免疫熒光染色
        2.4 乳酸脫氫酶釋放檢測(cè)
        2.5 Hoechst染色
        2.6 PI染色
        2.7 流式細(xì)胞術(shù)
        2.8 鈣離子成像
        2.9 ROS含量檢測(cè)
        2.10 Western blot檢測(cè)
        2.11 神經(jīng)元慢病毒轉(zhuǎn)染
        2.12 數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 過表達(dá)Homer1a減輕谷氨酸所致興奮性神經(jīng)元損傷
        3.2 過表達(dá)Homer1a綜合調(diào)控外鈣內(nèi)流與內(nèi)鈣釋放
    4 討論（Discussion）
小結(jié)
參考文獻(xiàn)
個(gè)人簡(jiǎn)歷及研究成果
Acknowledgments



本文編號(hào)：3748200