研究背景中樞神經系統(tǒng)損傷是指由于各種原因造成的腦和脊髓的損傷以及神經功能障礙,而神經元損傷及功能障礙被認為是最為重要的機制之一。以往研究發(fā)現,神經元損傷的相關機制主要包括谷氨酸興奮性毒性、鈣離子超載、氧化應激和炎癥反應等,其中研究最為深入的是由谷氨酸、谷氨酸受體及鈣離子代謝介導的興奮性神經損傷相關機制。但是仍有很多問題沒有解決,如m Glu R5在神經元損傷中的作用,以及綜合調控外鈣內流和內鈣釋放對神經元損傷的影響等。Homer1蛋白是一類新型的突觸后致密物質,在神經元功能調控中發(fā)揮重要作用。我們以往的研究表明,在創(chuàng)傷性神經元損傷后,Homer1a表達明顯增高,可能通過影響I組m Glu Rs在突觸后膜上的錨定影響神經元損傷。然而,Homer1b/c和Homer1a在神經元損傷中究竟發(fā)揮什么樣的作用,其具體分子機制如何尚不清楚。實驗目的本研究的目的是:(1)以鈣離子代謝和氧化應激反應為切入點,初步探討谷氨酸所致神經元損傷的機制,研究m Glu R5在神經元損傷中的作用;(2)研究鈣庫調節(jié)鈣離子通道在神經元損傷中的作用,探討其阻滯劑神經保護作用的可能機制;(3)研究Homer1b/c在神...

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【學位級別】：博士

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中文摘要
Abstract
前言
文獻回顧
    第一部分 谷氨酸受體信號通路與神經元損傷
        1. 神經元損傷相關機制
            1.1 興奮性氨基酸學說
            1.2 鈣離子超載學說
            1.3 其他相關學說
        2. 谷氨酸受體與神經元損傷
            2.1 NMDAR與神經元損傷
            2.2 AMPAR與神經元損傷
            2.3 m Glu Rs與神經元損傷
    第二部分 Homer1蛋白與神經元損傷相關疾病
        1. Homer家族蛋白
        2. Homer1蛋白
            2.1 Homer1蛋白的結構特征
            2.2 Homer1蛋白與其他突觸后致密物質的相互作用
        3. Homer1與神經元損傷相關疾病
            3.1 Homer1與神經病理性痛
            3.2 Homer1與阿爾茲海默癥
            3.3 Homer1與TBI
實驗一 mGluR5信號通路在神經元損傷中的作用
    1 材料
        1.1 實驗動物
        1.2 實驗試劑
        1.3 實驗儀器
    2 方法
        2.1 小鼠皮層原代神經元培養(yǎng)
        2.2 谷氨酸損傷模型的建立
        2.3 細胞活力檢測
        2.4 乳酸脫氫酶釋放檢測
        2.5 神經元凋亡Caspase-3 活性檢測
        2.6 鈣離子成像
        2.7 ROS含量檢測
        2.8 小鼠TBI模型的建立
        2.9 腦干濕重檢測
        2.10 腦組織缺損檢測
        2.11 腦組織切片神經細胞凋亡TUNEL染色
        2.12 小鼠神經功能學NSS評分
        2.13 水迷宮實驗
        2.14 熒光實時定量PCR
        2.15 Western blot檢測
        2.16 免疫熒光染色
        2.17 數據的統(tǒng)計學分析
    3 結果
        3.1 谷氨酸引起的興奮性神經元損傷是一種鈣離子依賴性的氧化應激性損傷
        3.2 mGluR5激活對谷氨酸引起興奮性神經元損傷具有保護作用
        3.3 mGluR5通過PKC-ERK信號通路發(fā)揮神經保護作用
        3.4 mGluR5在TBI模型中發(fā)揮有限的神經保護作用
    4 討論（Discussion）
實驗二 鈣庫調節(jié)鈣通道在神經元損傷中的作用
    1 材料
        1.1 實驗動物
        1.2 實驗試劑
        1.3 實驗儀器
    2 方法
        2.1 小鼠皮層原代神經元培養(yǎng)
        2.2 谷氨酸損傷模型的建立
        2.3 細胞活力檢測
        2.4 乳酸脫氫酶釋放檢測
        2.5 Hoechst染色
        2.6 PI染色
        2.7 流式細胞術
        2.8 鈣離子成像
        2.9 熒光實時定量PCR
        2.10 Western blot檢測
        2.11 神經元慢病毒轉染
        2.12 數據的統(tǒng)計學分析
    3 結果
        3.1 SKF-96365減輕谷氨酸所致興奮性神經元損傷
        3.2 SKF-96365通過Homer1-Ca2+信號通路發(fā)揮神經保護作用
    4 討論（Discussion）
實驗三 Homer1b/c調控內質網、線粒體功能在神經元損傷中的作用
    1 材料
        1.1 實驗動物
        1.2 實驗試劑
        1.3 實驗儀器
    2 方法
        2.1 小鼠皮層原代神經元培養(yǎng)
        2.2 神經元si RNA轉染
        2.3 谷氨酸損傷模型的建立
        2.4 乳酸脫氫酶釋放檢測
        2.5 ROS含量檢測
        2.6 Hoechst染色
        2.7 PI染色
        2.8 鈣離子成像
        2.9 免疫熒光染色
        2.10 Western blot檢測
        2.11 數據的統(tǒng)計學分析
    3 結果
        3.1 下調Homer1b/c減輕谷氨酸所致興奮性神經元損傷
        3.2 下調Homer1b/c抑制谷氨酸所致的內質網鈣離子釋放
        3.3 下調Homer1b/c減輕谷氨酸所致內質網應激
        3.4 下調Homer1b/c保護谷氨酸損傷后的線粒體功能
    4 討論（Discussion）
實驗四 Homer1a調控鈣離子穩(wěn)態(tài)在神經元損傷中的作用
    1 材料
        1.1 實驗動物
        1.2 實驗試劑
        1.3 實驗儀器
    2 方法
        2.1 小鼠皮層原代神經元培養(yǎng)
        2.2 谷氨酸損傷模型的建立
        2.3 免疫熒光染色
        2.4 乳酸脫氫酶釋放檢測
        2.5 Hoechst染色
        2.6 PI染色
        2.7 流式細胞術
        2.8 鈣離子成像
        2.9 ROS含量檢測
        2.10 Western blot檢測
        2.11 神經元慢病毒轉染
        2.12 數據的統(tǒng)計學分析
    3 結果
        3.1 過表達Homer1a減輕谷氨酸所致興奮性神經元損傷
        3.2 過表達Homer1a綜合調控外鈣內流與內鈣釋放
    4 討論（Discussion）
小結
參考文獻
個人簡歷及研究成果
Acknowledgments



本文編號：3748200