Homer1介導(dǎo)的神經(jīng)元損傷分子機(jī)制及神經(jīng)保護(hù)作用研究
發(fā)布時間:2023-02-22 19:58
研究背景中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷是指由于各種原因造成的腦和脊髓的損傷以及神經(jīng)功能障礙,而神經(jīng)元損傷及功能障礙被認(rèn)為是最為重要的機(jī)制之一。以往研究發(fā)現(xiàn),神經(jīng)元損傷的相關(guān)機(jī)制主要包括谷氨酸興奮性毒性、鈣離子超載、氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)等,其中研究最為深入的是由谷氨酸、谷氨酸受體及鈣離子代謝介導(dǎo)的興奮性神經(jīng)損傷相關(guān)機(jī)制。但是仍有很多問題沒有解決,如m Glu R5在神經(jīng)元損傷中的作用,以及綜合調(diào)控外鈣內(nèi)流和內(nèi)鈣釋放對神經(jīng)元損傷的影響等。Homer1蛋白是一類新型的突觸后致密物質(zhì),在神經(jīng)元功能調(diào)控中發(fā)揮重要作用。我們以往的研究表明,在創(chuàng)傷性神經(jīng)元損傷后,Homer1a表達(dá)明顯增高,可能通過影響I組m Glu Rs在突觸后膜上的錨定影響神經(jīng)元損傷。然而,Homer1b/c和Homer1a在神經(jīng)元損傷中究竟發(fā)揮什么樣的作用,其具體分子機(jī)制如何尚不清楚。實(shí)驗?zāi)康谋狙芯康哪康氖?(1)以鈣離子代謝和氧化應(yīng)激反應(yīng)為切入點(diǎn),初步探討谷氨酸所致神經(jīng)元損傷的機(jī)制,研究m Glu R5在神經(jīng)元損傷中的作用;(2)研究鈣庫調(diào)節(jié)鈣離子通道在神經(jīng)元損傷中的作用,探討其阻滯劑神經(jīng)保護(hù)作用的可能機(jī)制;(3)研究Homer1b/c在神...
【文章頁數(shù)】:133 頁
【學(xué)位級別】:博士
【文章目錄】:
縮略語表
中文摘要
Abstract
前言
文獻(xiàn)回顧
第一部分 谷氨酸受體信號通路與神經(jīng)元損傷
1. 神經(jīng)元損傷相關(guān)機(jī)制
1.1 興奮性氨基酸學(xué)說
1.2 鈣離子超載學(xué)說
1.3 其他相關(guān)學(xué)說
2. 谷氨酸受體與神經(jīng)元損傷
2.1 NMDAR與神經(jīng)元損傷
2.2 AMPAR與神經(jīng)元損傷
2.3 m Glu Rs與神經(jīng)元損傷
第二部分 Homer1蛋白與神經(jīng)元損傷相關(guān)疾病
1. Homer家族蛋白
2. Homer1蛋白
2.1 Homer1蛋白的結(jié)構(gòu)特征
2.2 Homer1蛋白與其他突觸后致密物質(zhì)的相互作用
3. Homer1與神經(jīng)元損傷相關(guān)疾病
3.1 Homer1與神經(jīng)病理性痛
3.2 Homer1與阿爾茲海默癥
3.3 Homer1與TBI
實(shí)驗一 mGluR5信號通路在神經(jīng)元損傷中的作用
1 材料
1.1 實(shí)驗動物
1.2 實(shí)驗試劑
1.3 實(shí)驗儀器
2 方法
2.1 小鼠皮層原代神經(jīng)元培養(yǎng)
2.2 谷氨酸損傷模型的建立
2.3 細(xì)胞活力檢測
2.4 乳酸脫氫酶釋放檢測
2.5 神經(jīng)元凋亡Caspase-3 活性檢測
2.6 鈣離子成像
2.7 ROS含量檢測
2.8 小鼠TBI模型的建立
2.9 腦干濕重檢測
2.10 腦組織缺損檢測
2.11 腦組織切片神經(jīng)細(xì)胞凋亡TUNEL染色
2.12 小鼠神經(jīng)功能學(xué)NSS評分
2.13 水迷宮實(shí)驗
2.14 熒光實(shí)時定量PCR
2.15 Western blot檢測
2.16 免疫熒光染色
2.17 數(shù)據(jù)的統(tǒng)計學(xué)分析
3 結(jié)果
3.1 谷氨酸引起的興奮性神經(jīng)元損傷是一種鈣離子依賴性的氧化應(yīng)激性損傷
3.2 mGluR5激活對谷氨酸引起興奮性神經(jīng)元損傷具有保護(hù)作用
3.3 mGluR5通過PKC-ERK信號通路發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用
3.4 mGluR5在TBI模型中發(fā)揮有限的神經(jīng)保護(hù)作用
4 討論(Discussion)
實(shí)驗二 鈣庫調(diào)節(jié)鈣通道在神經(jīng)元損傷中的作用
1 材料
1.1 實(shí)驗動物
1.2 實(shí)驗試劑
1.3 實(shí)驗儀器
2 方法
2.1 小鼠皮層原代神經(jīng)元培養(yǎng)
2.2 谷氨酸損傷模型的建立
2.3 細(xì)胞活力檢測
2.4 乳酸脫氫酶釋放檢測
2.5 Hoechst染色
2.6 PI染色
2.7 流式細(xì)胞術(shù)
2.8 鈣離子成像
2.9 熒光實(shí)時定量PCR
2.10 Western blot檢測
2.11 神經(jīng)元慢病毒轉(zhuǎn)染
2.12 數(shù)據(jù)的統(tǒng)計學(xué)分析
3 結(jié)果
3.1 SKF-96365減輕谷氨酸所致興奮性神經(jīng)元損傷
3.2 SKF-96365通過Homer1-Ca2+信號通路發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用
4 討論(Discussion)
實(shí)驗三 Homer1b/c調(diào)控內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體功能在神經(jīng)元損傷中的作用
1 材料
1.1 實(shí)驗動物
1.2 實(shí)驗試劑
1.3 實(shí)驗儀器
2 方法
2.1 小鼠皮層原代神經(jīng)元培養(yǎng)
2.2 神經(jīng)元si RNA轉(zhuǎn)染
2.3 谷氨酸損傷模型的建立
2.4 乳酸脫氫酶釋放檢測
2.5 ROS含量檢測
2.6 Hoechst染色
2.7 PI染色
2.8 鈣離子成像
2.9 免疫熒光染色
2.10 Western blot檢測
2.11 數(shù)據(jù)的統(tǒng)計學(xué)分析
3 結(jié)果
3.1 下調(diào)Homer1b/c減輕谷氨酸所致興奮性神經(jīng)元損傷
3.2 下調(diào)Homer1b/c抑制谷氨酸所致的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣離子釋放
3.3 下調(diào)Homer1b/c減輕谷氨酸所致內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激
3.4 下調(diào)Homer1b/c保護(hù)谷氨酸損傷后的線粒體功能
4 討論(Discussion)
實(shí)驗四 Homer1a調(diào)控鈣離子穩(wěn)態(tài)在神經(jīng)元損傷中的作用
1 材料
1.1 實(shí)驗動物
1.2 實(shí)驗試劑
1.3 實(shí)驗儀器
2 方法
2.1 小鼠皮層原代神經(jīng)元培養(yǎng)
2.2 谷氨酸損傷模型的建立
2.3 免疫熒光染色
2.4 乳酸脫氫酶釋放檢測
2.5 Hoechst染色
2.6 PI染色
2.7 流式細(xì)胞術(shù)
2.8 鈣離子成像
2.9 ROS含量檢測
2.10 Western blot檢測
2.11 神經(jīng)元慢病毒轉(zhuǎn)染
2.12 數(shù)據(jù)的統(tǒng)計學(xué)分析
3 結(jié)果
3.1 過表達(dá)Homer1a減輕谷氨酸所致興奮性神經(jīng)元損傷
3.2 過表達(dá)Homer1a綜合調(diào)控外鈣內(nèi)流與內(nèi)鈣釋放
4 討論(Discussion)
小結(jié)
參考文獻(xiàn)
個人簡歷及研究成果
Acknowledgments
本文編號:3748200
【文章頁數(shù)】:133 頁
【學(xué)位級別】:博士
【文章目錄】:
縮略語表
中文摘要
Abstract
前言
文獻(xiàn)回顧
第一部分 谷氨酸受體信號通路與神經(jīng)元損傷
1. 神經(jīng)元損傷相關(guān)機(jī)制
1.1 興奮性氨基酸學(xué)說
1.2 鈣離子超載學(xué)說
1.3 其他相關(guān)學(xué)說
2. 谷氨酸受體與神經(jīng)元損傷
2.1 NMDAR與神經(jīng)元損傷
2.2 AMPAR與神經(jīng)元損傷
2.3 m Glu Rs與神經(jīng)元損傷
第二部分 Homer1蛋白與神經(jīng)元損傷相關(guān)疾病
1. Homer家族蛋白
2. Homer1蛋白
2.1 Homer1蛋白的結(jié)構(gòu)特征
2.2 Homer1蛋白與其他突觸后致密物質(zhì)的相互作用
3. Homer1與神經(jīng)元損傷相關(guān)疾病
3.1 Homer1與神經(jīng)病理性痛
3.2 Homer1與阿爾茲海默癥
3.3 Homer1與TBI
實(shí)驗一 mGluR5信號通路在神經(jīng)元損傷中的作用
1 材料
1.1 實(shí)驗動物
1.2 實(shí)驗試劑
1.3 實(shí)驗儀器
2 方法
2.1 小鼠皮層原代神經(jīng)元培養(yǎng)
2.2 谷氨酸損傷模型的建立
2.3 細(xì)胞活力檢測
2.4 乳酸脫氫酶釋放檢測
2.5 神經(jīng)元凋亡Caspase-3 活性檢測
2.6 鈣離子成像
2.7 ROS含量檢測
2.8 小鼠TBI模型的建立
2.9 腦干濕重檢測
2.10 腦組織缺損檢測
2.11 腦組織切片神經(jīng)細(xì)胞凋亡TUNEL染色
2.12 小鼠神經(jīng)功能學(xué)NSS評分
2.13 水迷宮實(shí)驗
2.14 熒光實(shí)時定量PCR
2.15 Western blot檢測
2.16 免疫熒光染色
2.17 數(shù)據(jù)的統(tǒng)計學(xué)分析
3 結(jié)果
3.1 谷氨酸引起的興奮性神經(jīng)元損傷是一種鈣離子依賴性的氧化應(yīng)激性損傷
3.2 mGluR5激活對谷氨酸引起興奮性神經(jīng)元損傷具有保護(hù)作用
3.3 mGluR5通過PKC-ERK信號通路發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用
3.4 mGluR5在TBI模型中發(fā)揮有限的神經(jīng)保護(hù)作用
4 討論(Discussion)
實(shí)驗二 鈣庫調(diào)節(jié)鈣通道在神經(jīng)元損傷中的作用
1 材料
1.1 實(shí)驗動物
1.2 實(shí)驗試劑
1.3 實(shí)驗儀器
2 方法
2.1 小鼠皮層原代神經(jīng)元培養(yǎng)
2.2 谷氨酸損傷模型的建立
2.3 細(xì)胞活力檢測
2.4 乳酸脫氫酶釋放檢測
2.5 Hoechst染色
2.6 PI染色
2.7 流式細(xì)胞術(shù)
2.8 鈣離子成像
2.9 熒光實(shí)時定量PCR
2.10 Western blot檢測
2.11 神經(jīng)元慢病毒轉(zhuǎn)染
2.12 數(shù)據(jù)的統(tǒng)計學(xué)分析
3 結(jié)果
3.1 SKF-96365減輕谷氨酸所致興奮性神經(jīng)元損傷
3.2 SKF-96365通過Homer1-Ca2+信號通路發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用
4 討論(Discussion)
實(shí)驗三 Homer1b/c調(diào)控內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體功能在神經(jīng)元損傷中的作用
1 材料
1.1 實(shí)驗動物
1.2 實(shí)驗試劑
1.3 實(shí)驗儀器
2 方法
2.1 小鼠皮層原代神經(jīng)元培養(yǎng)
2.2 神經(jīng)元si RNA轉(zhuǎn)染
2.3 谷氨酸損傷模型的建立
2.4 乳酸脫氫酶釋放檢測
2.5 ROS含量檢測
2.6 Hoechst染色
2.7 PI染色
2.8 鈣離子成像
2.9 免疫熒光染色
2.10 Western blot檢測
2.11 數(shù)據(jù)的統(tǒng)計學(xué)分析
3 結(jié)果
3.1 下調(diào)Homer1b/c減輕谷氨酸所致興奮性神經(jīng)元損傷
3.2 下調(diào)Homer1b/c抑制谷氨酸所致的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣離子釋放
3.3 下調(diào)Homer1b/c減輕谷氨酸所致內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激
3.4 下調(diào)Homer1b/c保護(hù)谷氨酸損傷后的線粒體功能
4 討論(Discussion)
實(shí)驗四 Homer1a調(diào)控鈣離子穩(wěn)態(tài)在神經(jīng)元損傷中的作用
1 材料
1.1 實(shí)驗動物
1.2 實(shí)驗試劑
1.3 實(shí)驗儀器
2 方法
2.1 小鼠皮層原代神經(jīng)元培養(yǎng)
2.2 谷氨酸損傷模型的建立
2.3 免疫熒光染色
2.4 乳酸脫氫酶釋放檢測
2.5 Hoechst染色
2.6 PI染色
2.7 流式細(xì)胞術(shù)
2.8 鈣離子成像
2.9 ROS含量檢測
2.10 Western blot檢測
2.11 神經(jīng)元慢病毒轉(zhuǎn)染
2.12 數(shù)據(jù)的統(tǒng)計學(xué)分析
3 結(jié)果
3.1 過表達(dá)Homer1a減輕谷氨酸所致興奮性神經(jīng)元損傷
3.2 過表達(dá)Homer1a綜合調(diào)控外鈣內(nèi)流與內(nèi)鈣釋放
4 討論(Discussion)
小結(jié)
參考文獻(xiàn)
個人簡歷及研究成果
Acknowledgments
本文編號:3748200
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