發(fā)布時間：2023-02-06 17:26

　　目的：檢測膠質(zhì)瘤擴(kuò)增序列41(Glioma-amplified sequence41, GAS41)基因在不同病理級別的神經(jīng)膠質(zhì)瘤組織及神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系中的表達(dá),探討GAS41基因在神經(jīng)膠質(zhì)瘤發(fā)展中的作用。 方法：(1)采用免疫組織化學(xué)染色法、Western blot從蛋白水平檢測30例不同病理級別的神經(jīng)膠質(zhì)瘤組織中GAS41的表達(dá)情況。 (2)通過Western blot檢測神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系中GAS41的表達(dá)情況,并通過分子克隆技術(shù)構(gòu)建GAS41基因的RNA干擾慢病毒載體GV118-GAS41-RNAi,連同包裝質(zhì)粒pHelper1.0和包膜質(zhì)粒pHelper2.0共同轉(zhuǎn)染293T包裝細(xì)胞,收集儲存可表達(dá)GAS41特異性干擾慢病毒載體的病毒顆粒并進(jìn)行滴度測定。 結(jié)果：(1)GAS41蛋白在高級別神經(jīng)膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)強(qiáng)于低級別神經(jīng)膠質(zhì)瘤組織,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.011<0.05)。 (2)GAS41在神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系A(chǔ)172中表達(dá)較高,構(gòu)建的GAS41干擾慢病毒載體GV118-GAS41-RNAi經(jīng)PCR鑒定和測序,結(jié)果與設(shè)計(jì)序列完全相符,慢病毒重組載體構(gòu)建成功,將GV...

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
前言
第一部分 GAS41在神經(jīng)膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)及意義初探
    1 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.2 實(shí)驗(yàn)方法
    2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.1 免疫組織化學(xué)檢測各級別神級膠質(zhì)瘤中GAS41蛋白的表達(dá)
        2.2 免疫組織化學(xué)檢測結(jié)果的評分統(tǒng)計(jì)
        2.3 Western Blot檢測各級別神級膠質(zhì)瘤中GAS41蛋白的表達(dá)
    3 討論
    4 結(jié)論
第二部分 高表達(dá)GAS41細(xì)胞系的篩選GAS41 RNA干擾慢病毒的載體構(gòu)建
    1 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.2 實(shí)驗(yàn)方法
    2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.1 Western Blot檢測神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系中GAS41蛋白的表達(dá)
        2.2 陽性克隆PCR電泳結(jié)果
        2.3 陽性克隆DNA測序結(jié)果
        2.4 慢病毒載體的包裝及滴度測定
    3 討論
    4 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間主要研究成果
中英文縮略詞對照表
致謝



本文編號：3736314