羥基酪醇（HT）,化學(xué)名為3,4-二羥基苯乙醇,是一種環(huán)烯醚萜類羥基芳族化合物,具有脂溶性和水溶性物理學(xué)特性的醇臨二酚。在生物學(xué)方面已研究表明其具有抗氧化性、抗血小板聚集、抗動(dòng)脈粥樣硬化、抗癌和抗菌等活性。它作為橄欖油中的主要成分而在地中海一帶飲食健康中起到重要作用。腦膠質(zhì)瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)臨床常見(jiàn)疾病之一,它的治療在世界醫(yī)學(xué)屬于疑難病癥已被公認(rèn)。因其病理學(xué)上行為展現(xiàn)為浸潤(rùn)性生長(zhǎng),雖然顯微技術(shù)已廣泛運(yùn)用,但是用手術(shù)將其徹底切除仍達(dá)不到預(yù)期效果。替莫唑胺是目前治療腦膠質(zhì)瘤較為可信的藥物,但效果仍然不堪理想。新型、高效、低毒的抗膠質(zhì)瘤藥物的研發(fā)仍值得期待。 本研究旨從橄欖苦苷粗提物或橄欖葉的鹽酸水解液中分離純化得到高純度的HT,再進(jìn)一步研究其是否有誘導(dǎo)腦膠質(zhì)細(xì)胞HEB和腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251凋亡的效果,從而探討其抗腦膠質(zhì)瘤的生物學(xué)活性。這將為橄欖葉及富含橄欖皂苷相關(guān)資源的合理充分利用提供有力的實(shí)驗(yàn)依據(jù)和理論基礎(chǔ),為HT在腫瘤預(yù)防與治療等運(yùn)用方面開(kāi)拓新視野。以下為實(shí)驗(yàn)方法及結(jié)論概述： （1）用0.5M的HCl水解橄欖苦苷粗提物,水解條件為時(shí)間15min、溫度105℃、料液比1/30,... 

【文章頁(yè)數(shù)】：75 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
緒言
第1章 引言
    1.1 羥基酪醇分離純化方法研究進(jìn)展
        1.1.1 前言
        1.1.2 羥基酪醇的粗提
            1.1.2.1 從液-固橄欖油廢料中提取
            1.1.2.2 從橄欖壓榨廠廢水中提取
            1.1.2.3 從橄欖葉中提取
            1.1.2.4 從橄欖果汁中提取
        1.1.3 羥基酪醇的純化
            1.1.3.1 有機(jī)溶劑萃取法及離子型樹脂吸附
            1.1.3.2 非離子型樹脂吸附和分子篩法
            1.1.3.3 酶及固定化酶法
            1.1.3.4 超臨界CO_2萃取
    1.2 羥基酪醇的生物學(xué)活性概述
        1.2.1 抗菌活性
        1.2.2 促進(jìn)新陳代謝和延緩衰老
        1.2.3 抗炎癥活性
        1.2.4 抗癌活性
        1.2.5 展望
    1.3 本課題研究的目的、意義及主要內(nèi)容
        1.3.1 課題來(lái)源
        1.3.2 研究目的及意義
        1.3.3 主要研究?jī)?nèi)容
第2章 羥基酪醇的分離純化
    2.1 橄欖苦苷粗提物的鹽酸水解液中分離純化羥基酪醇
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
            2.1.1.1 主要化學(xué)試劑
            2.1.1.2 主要儀器設(shè)備
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1.2.0 色譜條件
            2.1.2.1 HT標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作
            2.1.2.2 橄欖苦苷的水解
            2.1.2.3 水解液的澄清
            2.1.2.4 澄清液的萃取
            2.1.2.5 萃取液的濃縮與HT含量檢測(cè)
        2.1.3 結(jié)果與分析
            2.1.3.1 HT的標(biāo)準(zhǔn)曲線
            2.1.3.2 水解與澄清
            2.1.3.3 萃取與濃縮
        2.1.4 小結(jié)
    2.2 從橄欖葉的鹽酸水解液中分離純化純化羥基酪醇
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
            2.2.1.1 主要化學(xué)試劑
            2.2.1.2 主要儀器設(shè)備
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.2.1 色譜條件
            2.2.2.2 橄欖葉的處理及水解
            2.2.2.3 水解液的澄清
            2.2.2.4 樹脂的處理及篩選
            2.2.2.5 LX-18C吸附量的篩選、洗脫及純度檢測(cè)
            2.2.2.6 用ODS柱在AKTA~(TM)purifier系統(tǒng)中純化澄清液
        2.2.3 結(jié)果與分析
            2.2.3.1 水解和澄清
            2.2.3.2 樹脂的篩選
            2.2.3.3 LX-18C吸附量的篩選、洗脫及純度檢測(cè)
            2.2.3.4 AKTA~(TM)purifier系統(tǒng)中ODS分離的效果
        2.2.4 小結(jié)
第3章 羥基酪醇對(duì)腦膠質(zhì)HEB和腦膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞凋亡作用研究
    3.1 羥基酪醇對(duì)正常腦膠質(zhì)細(xì)胞HEB凋亡作用研究
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
            3.1.1.1 細(xì)胞株
            3.1.1.2 主要化學(xué)試劑
            3.1.1.3 主要儀器設(shè)備
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)方法
            3.1.2.1 細(xì)胞的培養(yǎng)
            3.1.2.2 細(xì)胞的復(fù)蘇
            3.1.2.3 細(xì)胞的換液和傳代
            3.1.2.4 細(xì)胞的凍存
            3.1.2.5 顯微鏡下觀察HT對(duì)HEB細(xì)胞的形態(tài)學(xué)影響
            3.1.2.6 MTT法檢測(cè)HT對(duì)HEB細(xì)胞增殖抑制作用
            3.1.2.7 DNA ladder法檢測(cè)HT對(duì)HEB細(xì)胞凋亡作用
            3.1.2.8 電鏡下觀察HT對(duì)HEB細(xì)胞結(jié)構(gòu)的影響
            3.1.2.9 流式細(xì)胞儀檢測(cè)HT對(duì)HEB細(xì)胞的影響
            3.1.2.10 Western Blotting檢測(cè)凋亡蛋白
            3.1.2.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
        3.1.3 結(jié)果與分析
            3.1.3.1 HT對(duì)HEB細(xì)胞的抑制作用
            3.1.3.2 HT作用HEB細(xì)胞形態(tài)變化
            3.1.3.3 HT對(duì)HEB細(xì)胞脫氧核糖核酸(DNA)的影響
            3.1.3.4 HT誘導(dǎo)HEB細(xì)胞凋亡
            3.1.3.5 HT對(duì)HEB細(xì)胞周期的影響
            3.1.3.6 HT對(duì)HEB細(xì)胞凋亡蛋白表達(dá)影響
        3.1.4 小結(jié)
    3.2 羥基酪醇對(duì)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251凋亡作用研究
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
            3.2.1.1 細(xì)胞株
            3.2.1.2 主要化學(xué)試劑
            3.2.1.3 主要儀器設(shè)備
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            3.2.2.1 顯微鏡下觀察HT對(duì)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251的形態(tài)學(xué)影響
            3.2.2.2 MTT法檢測(cè)HT對(duì)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251增殖抑制作用
            3.2.2.3 DNA ladder法檢測(cè)HT對(duì)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251凋亡作用
            3.2.2.4 電鏡下觀察HT對(duì)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251結(jié)構(gòu)的影響
            3.2.2.5 流式細(xì)胞儀檢測(cè)HT對(duì)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251的影響
            3.2.2.6 Western Blotting檢測(cè)凋亡蛋白
            3.2.2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
        3.2.3 結(jié)果與分析
            3.2.3.1 HT對(duì)U251細(xì)胞的抑制作用
            3.2.3.2 HT作用U251細(xì)胞形態(tài)變化
            3.2.3.3 HT對(duì)U251細(xì)胞脫氧核糖核酸(DNA)的影響
            3.2.3.4 HT誘導(dǎo)U251細(xì)胞凋亡
            3.2.3.5 HT對(duì)U251細(xì)胞周期的影響
            3.2.3.6 HT對(duì)U251細(xì)胞凋亡蛋白表達(dá)影響
        3.2.4 小結(jié)
第4章 總結(jié)與展望
    4.1 總結(jié)
        4.1.1 HT分離純化的效果
        4.1.2 HT誘導(dǎo)腦膠質(zhì)HEB和腦膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞的凋亡性
    4.2 展望
致謝
參考文獻(xiàn)
附錄 縮略詞
攻讀學(xué)位期間的研究成果



本文編號(hào)：3732236