目的：探討應用EGF、bFGF誘導BMSCs向神經(jīng)樣細胞分化的可行性，并進一步研究Wnt/β-catenin信號通路在BMSCs向神經(jīng)樣細胞分化中的作用。 方法：取4周齡大健康清潔級SD大鼠骨髓,采用全骨髓貼壁法體外培養(yǎng)BMSCs,流式細胞儀檢測P3代細胞表面的骨髓基質標志CD90和造血細胞標志CD45。取P3代細胞，根據(jù)誘導條件不同分為4組：空白對照組（1%胎牛血清+DMEM/F-12）、EGF組（20ng/mlEGF+1%胎牛血清+DMEM/F-12）、bFGF組（20ng/mlbFGF+1%胎牛血清+DMEM/F-12）、EGF+bFGF組（20ng/mlEGF+20ng/mlbFGF+1%胎牛血清+DMEM/F-12），倒置相差顯微鏡觀察細胞形態(tài)變化，誘導7天后，采用免疫細胞化學法和Western blot檢測神經(jīng)細胞標志蛋白NSE、GFAP的表達，RT-PCR檢測NSE、GFAP、nestin、β-catenin、BDNF、GDNF基因mRNA的變化。 結果：P3代BMSCs大致呈單一的長梭形或扁平形，緊密漩渦樣排列生長，流式細胞儀示CD90表達高達98.95%，... 

【文章頁數(shù)】：48 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第1章 引言
第2章 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗動物
        2.1.2 實驗試劑
        2.1.3 主要儀器
    2.2 實驗方法
        2.2.1 器材的準備
        2.2.2 BMSCs 的分離、培養(yǎng)
        2.2.3 流式細胞儀鑒定 BMSCs
        2.2.4 誘導分化分組
        2.2.5 細胞形態(tài)學觀察
        2.2.6 免疫細胞染色檢測 NSE、GFAP 神經(jīng)標志蛋白
        2.2.7 Western blot 檢測 NSE、GFAP 蛋白表達水平
        2.2.8 RT-PCR 檢測相關 mRNA 表達水平
    2.3 統(tǒng)計學處理
第3章 結果
    3.1 細胞形態(tài)觀察與鑒定
        3.1.1 BMSCs 形態(tài)觀察
        3.1.2 BMSCs 鑒定
    3.2 BMSCs 神經(jīng)分化及神經(jīng)標志的免疫細胞染色
    3.3 Western blot 檢測
    3.4 RT-PCR 檢測結果
第4章 討論
    4.1 BMSCs 概述
        4.1.1 BMSCs 的分離與鑒定
        4.1.2 微環(huán)境對 BMSCs 的影響
    4.2 EGF、bFGF 誘導 BMSCs 成神經(jīng)分化
    4.3 不同血清濃度對 BMSCs 成神經(jīng)分化的影響
    4.4 Wnt/β-catenin 信號通路在 BMSCs 成神經(jīng)分化中的作用
第5章 結論
致謝
參考文獻
攻讀學位期間的研究成果
綜述
    參考文獻


【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
[1]骨髓間充質干細胞結合多肽自組裝支架材料治療脊髓損傷的實驗研究[D]. 李長文.華中科技大學 2009



本文編號：3728004