本文關(guān)鍵詞：異甘草素誘導人膠質(zhì)瘤SHG44細胞自噬、凋亡并增強替莫唑胺抗膠質(zhì)瘤作用的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：膠質(zhì)細胞瘤在顱內(nèi)惡性腫瘤中無論是侵襲程度還是發(fā)病率都是位居首位的。雖然有先進的多學科治療方法,如手術(shù)、化療、放療等,但高惡性程度膠質(zhì)瘤對于患者仍然是致命的。盡管化療方式有所進展,但惡性膠質(zhì)瘤患者在術(shù)后的平均存活時間仍然少于15個月。替莫唑胺作為烷基化抗腫瘤藥物已成為抗惡性膠質(zhì)瘤的一線藥物。但由于腫瘤細胞對藥物的普遍耐藥性,替莫唑胺治療惡性膠質(zhì)瘤的有效率不到45%。異甘草素有多靶點、多機制的抗腫瘤特性,尤其是抑制腫瘤生長及誘導細胞凋亡方面作用顯著。本研究為異甘草素的抗瘤效應和機制進行了拓展,并為異甘草素在治療人膠質(zhì)瘤方面的應用提供了理論依據(jù)。目的:探討異甘草素在誘導人膠質(zhì)瘤細胞SHG44自噬、凋亡的作用及涉及的分子信號,觀察異甘草素聯(lián)合替莫唑胺對人膠質(zhì)瘤細胞SHG44增殖、自噬、凋亡的影響,為異甘草素治療人膠質(zhì)瘤奠定理論依據(jù)。方法:1.異甘草素對人膠質(zhì)瘤細胞SHG44增殖、自噬、凋亡的影響:應用異甘草素在不同時段、不同濃度下作用于人膠質(zhì)瘤細胞SHG44,利用CCK-8法了解SHG44細胞增殖受抑制的情況;用流式細胞術(shù)Annexin V-IP標記來檢測不同濃度異甘草素(0、20、40、60、80μmol/L)處理SHG44人膠質(zhì)瘤細胞48h后細胞的凋亡情況;通過透射電鏡觀察人膠質(zhì)瘤細胞SHG44內(nèi)部超微結(jié)構(gòu)發(fā)生的變化;應用免疫熒光染色觀測細胞內(nèi)部及其周邊自噬和凋亡相關(guān)蛋白的分布情況;再應用Western blot檢測細胞中Caspase-3、Bcl-2以及LC3B等蛋白的表達趨勢。2.異甘草素聯(lián)合替莫唑胺對人膠質(zhì)瘤細胞SHG44增殖、自噬、凋亡的影響:通過體外實驗,觀察異甘草素單藥、替莫唑胺單藥以及異甘草素聯(lián)合替莫唑胺對SHG44人膠質(zhì)瘤細胞的作用結(jié)果。應用CCK-8法測試各組細胞增殖抑制率的差異;流式細胞術(shù)Annexin V-PI標記檢測各組細胞的凋亡變化;通過透射電鏡觀測SHG44細胞在異甘草素和替莫唑胺聯(lián)合作用后細胞超微結(jié)構(gòu)的變化;應用免疫熒光染色觀測細胞內(nèi)部及其周邊自噬和凋亡相關(guān)蛋白的分布情況;利用Western blot檢測各組中細胞自噬、凋亡蛋白以及及相關(guān)分子信號的表達差異。結(jié)果:1.異甘草素作用于人膠質(zhì)瘤細胞SHG44后,可見腫瘤細胞在增殖過程中呈現(xiàn)除時間及劑量依賴性的增殖抑制,且異甘草素80μmol/L組在作用72h后對SHG44細胞的抑制率超過了半數(shù)抑制率;流式細胞術(shù)檢測出不同濃度異甘草素(0、20、40、60、80μmol/L)作用于SHG44人膠質(zhì)瘤細胞48h后,細胞的凋亡率分別為(1.54±0.85)%、(6.72±2.81)%、(11.82±3.21)%、(16.61±3.79)%和(26.15±3.82)%;透射電鏡下可見細胞內(nèi)部出現(xiàn)自噬小泡以及自噬溶酶體;在熒光顯微鏡下可見SHG44細胞內(nèi)出現(xiàn)的自噬以及凋亡相關(guān)的免疫熒光顆粒;Western blot結(jié)果顯示異甘草素作用于SHG44細胞48h后LC3-Ⅱ/Ⅰ比值以及Caspase-3的蛋白表達均呈現(xiàn)上升趨勢,而Bcl-2表達呈下降趨勢。2.實驗中人膠質(zhì)瘤細胞SHG44對加藥各組都具有劑量依賴性的增殖抑制,且與異甘草素、替莫唑胺單藥組相比兩者聯(lián)合用藥組對膠質(zhì)瘤產(chǎn)生的增殖抑制率更為顯著(P0.05);流式細胞術(shù)檢測單用替莫唑胺(200μmol/L)、異甘草素(80μmol/L)作用于膠質(zhì)瘤細胞48h后,早期凋亡率分別為(12.62±3.12)%、(24.86±4.01)%,而聯(lián)合組的凋亡率明顯上升為(38.31±4.97)%;透射電鏡下聯(lián)合處理組的SHG44細胞中出現(xiàn)大量自噬體以及凋亡小體;異甘草素和替莫唑胺聯(lián)合組在熒光顯微鏡下明顯可見細胞內(nèi)自噬及凋亡相關(guān)蛋白的熒光顆粒分布;Western blot檢測中聯(lián)合組較單藥組在LC3-Ⅱ/Ⅰ比值、Caspase-3以及Beclin 1在蛋白表達水平上均升高,而Bc L-2呈下降趨勢。結(jié)論:1.異甘草素能有效的抑制人膠質(zhì)瘤細胞SHG44的增殖,誘導SHG44細胞發(fā)生自噬和凋亡,并且抑制了抗凋亡分子bcl-2的表達,增加了凋亡相關(guān)分子caspase-3和自噬相關(guān)分子LC3-Ⅱ/Ⅰ比值的表達。2.異甘草素可以增強替莫唑胺對人膠質(zhì)瘤細胞SHG44的生長抑制,其主要表現(xiàn)在兩藥聯(lián)合效抑制了SHG44細胞的增殖,且誘導自噬和凋亡的發(fā)生。
【關(guān)鍵詞】：人膠質(zhì)瘤細胞 異甘草素 替莫唑胺 自噬 凋亡
【學位授予單位】：甘肅中醫(yī)藥大學(原名：甘肅中醫(yī)學院)
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R739.4
【目錄】：

• 中文摘要5-8
• ABSTRACT8-12
• 中英文縮略詞表12-13
• 前言13-16
• 立題依據(jù)16-18
• 1.異甘草素抗膠質(zhì)瘤細胞的依據(jù)16-17
• 2.異甘草素增強替莫唑胺抗膠質(zhì)瘤細胞作用的依據(jù)17-18
• 實驗一 異甘草素抑制惡性膠質(zhì)瘤細胞的研究18-34
• 1 材料18-21
• 1.1 細胞系18
• 1.2 實驗儀器和材料18-21
• 2 實驗方法21-25
• 2.1 人膠質(zhì)瘤細胞SHG44的培養(yǎng)21-22
• 2.2 細胞計數(shù)22
• 2.3 CCK-8 檢測異甘草素對SHG44膠質(zhì)瘤細胞的增殖抑制22
• 2.4 流試細胞術(shù)分析異甘草素對SHG44細胞凋亡的影響22-23
• 2.5 透射電鏡下觀測異甘草素對SHG44細胞超微結(jié)構(gòu)的改變23
• 2.6 免疫熒光觀察細胞中LC3B、Caspase-3 蛋白的分布23-24
• 2.7 Western Blot檢測LC3B、Caspase-3、Bc L-2 等蛋白的表達24-25
• 2.8 統(tǒng)計學分析25
• 3 實驗結(jié)果25-32
• 3.1 CCK-8 檢測異甘草素對SHG44細胞增殖抑制的作用25-27
• 3.2 流試細胞術(shù)分析甘草素對SHG44細胞凋亡的影響27-28
• 3.3 透射電鏡下觀測異甘草素對SHG44細胞超微結(jié)構(gòu)的改變28-29
• 3.4 免疫熒光觀察細胞中LC3B、Caspase-3 蛋白的分布29-30
• 3.5 Western Blot檢測LC3B、Caspase-3、Bc L-2 等蛋白的表達30-32
• 4 討論32-34
• 實驗二 異甘草素聯(lián)合替莫唑胺抗膠質(zhì)瘤細胞的機制研究34-46
• 1 材料34
• 1.1 主要試劑34
• 1.2 主要實驗設(shè)備34
• 2 實驗方法34-35
• 2.1 CCK-8 法檢測異甘草素聯(lián)合替莫唑胺對膠質(zhì)瘤細胞的增殖抑制34
• 2.2 流試細胞術(shù)檢測各組細胞凋亡34
• 2.3 透射電鏡觀測聯(lián)合處理后膠質(zhì)瘤細胞的超微結(jié)構(gòu)34-35
• 2.4 免疫熒光觀察聯(lián)合處理后細胞中LC3B、Caspase-3 的分布35
• 2.5 Western Blot檢測各組細胞LC3B、Beclin1、Caspase-3、Bc L-2等蛋白的表達35
• 2.6 統(tǒng)計學分析35
• 3 實驗結(jié)果35-44
• 3.1 CCK-8 檢測對SHG44膠質(zhì)瘤細胞增殖的影響35-37
• 3.2 流式細胞術(shù)檢測各組對SHG44細胞凋亡的影響37-38
• 3.3 透射電鏡下觀察聯(lián)合處理后SHG44細胞超微結(jié)構(gòu)的改變38-40
• 3.4 熒光顯微鏡下觀察ISL和TMZ聯(lián)合處理膠質(zhì)瘤細胞40-42
• 3.5 Western blot檢測SHG44細胞凋亡和自噬的調(diào)控機制42-44
• 4 討論44-46
• 結(jié)語46-47
• 參考文獻47-51
• 文獻綜述51-55
• 參考文獻54-55
• 致謝55-56
• 在學期間主要研究成果56

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

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  本文關(guān)鍵詞：異甘草素誘導人膠質(zhì)瘤SHG44細胞自噬、凋亡并增強替莫唑胺抗膠質(zhì)瘤作用的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：370543