目的構(gòu)建檢測日本乙型腦炎病毒（JEV） GⅢ型拷貝數(shù)的質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品,利用該質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品定量檢測病毒的拷貝數(shù)。方法通過設(shè)計(jì)引物經(jīng)反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)擴(kuò)增JEV相對(duì)保守區(qū)序列（prM結(jié)構(gòu)蛋白）,得到的目的片段克隆連接到pMD19-T載體上,從而獲得JEV質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品。隨后,通過實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（RT-qPCR）得到質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程以及對(duì)JEV患者血清中病毒拷貝數(shù)進(jìn)行檢測。結(jié)果構(gòu)建的JEV質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品的RT-qPCR結(jié)果顯示:相同濃度復(fù)孔間Ct值差異�。ǎ�0.5）,熔解曲線峰值單一。得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y=-0.288 9x+11.516,R~2=0.993,乙腦患者血清樣品原液及倍比稀釋度的病毒拷貝數(shù)分別為1 184 130.27、120 912.86、10 736.84、1 053.45、121.25 copies/μL。結(jié)論本研究成功構(gòu)建了檢測JEV的質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品,通過RT-qPCR發(fā)現(xiàn)其具有穩(wěn)定性好、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn),可應(yīng)用于JEV拷貝數(shù)的定量檢測。 

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 菌株、載體
    1.2 主要試劑及儀器
    1.3 JEV在適應(yīng)株上的培養(yǎng)
    1.4 標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)粒的構(gòu)建
    1.5 標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒體系的建立
    1.6 JE患者血清中病毒拷貝數(shù)定量檢測
2 結(jié)果
    2.1 JEV pr M區(qū)域片段的獲得
    2.2 JEV標(biāo)準(zhǔn)品的鑒定
    2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制及JE患者血清中拷貝數(shù)的測定
    2.4 JE患者血清原液及倍比稀釋的樣品拷貝數(shù)
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Mechanism of Japanese encephalitis virus genotypes replacement based on human,porcine and mosquito-originated cell lines model[J]. Loan Phuong Do,Trang Minh Bui,Nga Thi Phan.  Asian Pacific Journal of Tropical Medicine. 2016(04)



本文編號(hào)：3703330