目的:膠質(zhì)瘤是成人中最常見的顱內(nèi)原發(fā)性惡性腫瘤。雖然目前采用手術(shù),放療和放療等綜合治療方法,但患者的預(yù)后仍然較差。根據(jù)世界衛(wèi)生組織（WHO）的分類,膠質(zhì)母細(xì)胞瘤（GBM,膠質(zhì)母細(xì)胞瘤）是最惡性的膠質(zhì)瘤,GBM預(yù)后不良的主要原因是其復(fù)發(fā)率高。盡管近年來聯(lián)合使用替莫唑胺和標(biāo)準(zhǔn)放療,但原發(fā)性GBM患者的平均生存期僅為14.6個月,5年生存率僅為9.8%�；趥�體患者的GBM基因表型的變化可能是個體化治療的突破。微小RNA（miRNA）是一類短的非編碼RNA分子,參與一系列重要的生物過程,如細(xì)胞增殖,凋亡,代謝和分化。最近的研究證實,miRNA在不同人類腫瘤的產(chǎn)生,血管生成,侵襲和凋亡中起重要作用。相當(dāng)多的研究表明惡性膠質(zhì)瘤中某些特定miRNA的表達失調(diào)。在我們最近的研究中,我們發(fā)現(xiàn)miR-196a在高級別膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中的表達明顯高于非腫瘤腦組織,但miR-196a在膠質(zhì)瘤中的特定作用和機制尚不清楚。在本實驗中,我們克隆了成熟microRNA-196a的序列,并對其在膠質(zhì)瘤細(xì)胞中的生物學(xué)功能進行了初步研究。在該研究中,我們用慢病毒載體感染神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系并建立穩(wěn)定的細(xì)胞系,其過表達miR-19... 

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略詞
第一部分 :miR-196a促進膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖和干細(xì)胞性并促進其向間質(zhì)型轉(zhuǎn)化的相關(guān)分子機制
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 主要試劑和儀器
            2.1.1 主要試劑和材料
            2.1.2 主要儀器
        2.2 實驗方法
            2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.2.2 慢病毒感染
            2.2.3細(xì)胞生物學(xué)功能實驗
            2.2.4 細(xì)胞蛋白質(zhì)提取
            2.2.5 Bradford蛋白質(zhì)濃度的測定
            2.2.6 Western印跡凝膠電泳
            2.2.7 蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移膜
            2.2.8 抗體雜交
    3 結(jié)果
        3.1 建立穩(wěn)定過表達和抑制表達miR-196a的細(xì)胞系
        3.2 過表達miR-196a促進膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖
        3.3 過表達miR-196a促進細(xì)胞周期進展
        3.4 miR-196a調(diào)節(jié)神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞周期相關(guān)蛋白的表達
        3.5 細(xì)胞侵襲和遷移實驗
        3.6 miR-196a調(diào)節(jié)神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞EMT相關(guān)蛋白的表達
        3.7 干細(xì)胞成球?qū)嶒?br>        3.8 miR-196aI轉(zhuǎn)染后的膠質(zhì)干瘤細(xì)胞的干細(xì)胞基因熒光鑒定
        3.9 miR-196aI轉(zhuǎn)染后的膠質(zhì)干瘤細(xì)胞中干細(xì)胞相關(guān)蛋白的表達
    4 討論
第二部分 :miR-196a靶向調(diào)控GATA6 影響膠質(zhì)瘤細(xì)胞生物學(xué)行為
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 主要試劑和儀器
            2.1.1 主要試劑和材料
            2.1.2 主要儀器
        2.2 實驗方法
            2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.2.2 細(xì)胞全基因組基因表達譜
            2.2.3 熒光素酶報告實驗
            2.2.4 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染
            2.2.5 建立人裸鼠膠質(zhì)瘤移植模型
            2.2.6 細(xì)胞生物學(xué)功能實驗
            2.2.7 細(xì)胞蛋白質(zhì)提取
            2.2.8 Bradford蛋白質(zhì)濃度的測定
            2.2.9 Western印跡凝膠電泳
            2.2.10 蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移膜
            2.2.11 抗體雜交
    3 結(jié)果
        3.1 通過生物信息學(xué)和芯片結(jié)果分析找到miR-196a的候選靶基因
        3.2 通過數(shù)據(jù)驗證GATA6 在不同膠質(zhì)瘤表達水平
        3.3 通過實驗驗證GATA6是miR-196a的靶基因
        3.4 挽救實驗
            3.4.1 GATA6 過表達可部分逆轉(zhuǎn)miR-196a誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖
            3.4.2 GATA6 過表達可部分逆轉(zhuǎn)miR-196a誘導(dǎo)的EMT
            3.4.3 GATA6 過表達可部分逆轉(zhuǎn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞干性
        3.5 GATA6 過表達對裸鼠皮下腫瘤形成的影響
    4 討論
本研究創(chuàng)新性的自我評價
參考文獻
綜述
    參考文獻
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個人簡介


【參考文獻】：
期刊論文
[1]High miR-196a levels promote the oncogenic phenotype of colorectal cancer cells[J]. Carl Christoph Schimanski,Kirsten Frerichs,Fareed Rahman,Martin Berger,Hauke Lang,Peter R Galle,Markus Moehler,Ines Gockel.  World Journal of Gastroenterology. 2009(17)



本文編號：3700175