Pygo2蛋白作為Wnt信號通路下游新功能蛋白，其表達(dá)紊亂與人腦膠質(zhì)瘤惡性程度密切相關(guān)，調(diào)控機(jī)制非常復(fù)雜，很多機(jī)制尚不清楚。本實(shí)驗(yàn)旨在探討人腦膠質(zhì)瘤中異常表達(dá)的miRNA對Pygo2蛋白的可能調(diào)控作用。 目的：研究miRNA靶向Pygo2在人腦膠質(zhì)瘤的表達(dá)及作用機(jī)制 方法：利用生物信息學(xué)預(yù)測軟件（targetscan，miRanda，PicTar等）預(yù)測Pygo2的miRNAs，進(jìn)而通過人腦膠質(zhì)瘤miRNA表達(dá)譜芯片檢測系統(tǒng)篩選候選的靶向Pygo2-3’UTR的miRNAs。針對差異表達(dá)最大的miRNA，首先構(gòu)建成含有突變位點(diǎn)Pygo2-3’UTR的熒光素酶報告載體，然后利用Pygo2-miRNA過表達(dá)質(zhì)粒下調(diào)Pygo2，從而抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖及侵襲。 結(jié)果：生物信息學(xué)預(yù)測軟件預(yù)測出37個與Pygo2相關(guān)的miRNAs，結(jié)合人腦膠質(zhì)瘤miRNA表達(dá)譜芯片低表達(dá)結(jié)果，發(fā)現(xiàn)Pygo2可能受包括miR-31、miR-34c-5p、miR-195、miR-214在內(nèi)13個miRNAs調(diào)控。熒光素酶報告基因活性、real-time PCR驗(yàn)證及western blot實(shí)驗(yàn)提示... 

【文章頁數(shù)】：48 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

miRNAs在U87和CHG-5細(xì)胞中的相對表達(dá)情況

pGL3-control載體示意圖

miRNAs熒光素酶相對表達(dá)情況

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Pygo2轉(zhuǎn)基因小鼠模型的建立及表型的初步分析[J]. 袁圓陽,駱啟聰,李超,李博安.  廈門大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2010(02)



本文編號：3698488