目的： 研究三鄰甲苯基磷酸酯（Tri-ortho-cresyl phosphate，TOCP）對(duì)人成神經(jīng)瘤細(xì)胞SH-SY5Y細(xì)胞分化的影響，毒性作用與自噬的關(guān)系以及自噬水平的改變，為拓寬對(duì)TOCP的神經(jīng)毒性機(jī)制的認(rèn)識(shí)，進(jìn)一步理解和揭示神經(jīng)退行性病變的機(jī)理提供依據(jù)。 方法： 1.選用人成神經(jīng)瘤細(xì)胞SH-SY5Y為細(xì)胞模型，MTT法檢測(cè)TOCP對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞增殖的影響，以全反式維甲酸（ATRA）為誘導(dǎo)分化工具藥物，三甲基腺嘌呤（3-MA）為自噬抑制劑，在分化誘導(dǎo)過(guò)程中以及誘導(dǎo)分化后以不同濃度TOCP（0-1.0mmol/L）作用，動(dòng)態(tài)觀察SH-SY5Y細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化，測(cè)量細(xì)胞突起長(zhǎng)度，統(tǒng)計(jì)已分化細(xì)胞所占比例，臺(tái)盼藍(lán)拒染法檢測(cè)死亡細(xì)胞百分比。 2.在不同濃度TOCP（0-1.0mmol/L）處理后，采用自噬小體特異染色劑單丹尸磺酰胺（MDC）對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色觀察拍照后裂解，應(yīng)用熒光分光光度計(jì)（激發(fā)光波長(zhǎng)380nm、發(fā)射光波長(zhǎng)525nm）測(cè)定熒光強(qiáng)度進(jìn)行定量分析。 3.用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染GFP-LC3質(zhì)粒至SH-SY5Y細(xì)胞，用ATRA進(jìn)行誘導(dǎo)分化3天，1.0mmo... 

【文章頁(yè)數(shù)】：57 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
前言
材料與方法
    1.材料
        1.1 細(xì)胞系及培養(yǎng)
        1.2 主要試劑
        1.3 主要儀器
    2. 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 TOCP 對(duì) SH-SY5Y 細(xì)胞的增殖影響
        2.2 TOCP 對(duì) SH-SY5Y 細(xì)胞形態(tài)分化的影響
        2.3 TOCP 對(duì) SH-SY5Y 細(xì)胞自噬水平的影響
        2.4 細(xì)胞骨架蛋白降解方式分析
        2.5 TOCP 對(duì)自噬相關(guān)蛋白表達(dá)的影響
結(jié)果
    1.TOCP 對(duì) SH-SY5Y 細(xì)胞分化的影響
        1.1 TOCP 對(duì) SH-SY5Y 細(xì)胞增殖的影響
        1.2 ATRA 誘導(dǎo) SH-SY5Y 細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變
        1.3 TOCP 對(duì)誘導(dǎo)中 SH-SY5Y 細(xì)胞分化的影響
        1.4 TOCP 對(duì)已分化細(xì)胞的影響
    2.TOCP 對(duì) SH-SY5Y 細(xì)胞自噬水平的影響
        2.1 TOCP 導(dǎo)致 SH-SY5Y 細(xì)胞中自噬泡的增加
        2.2 SH-SY5Y 細(xì)胞 MDC 染色法后 OD 值比較
    3.骨架蛋白 NH-F 降解方式檢測(cè)
    4.TOCP 處理對(duì)自噬相關(guān)蛋白表達(dá)的影響
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄 1
附錄 2 綜述
    參考文獻(xiàn)
附錄 3
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Beclin1在原發(fā)性肝細(xì)胞癌中的表達(dá)及其臨床意義[J]. 康凱夫,王曉蔚,陳小伍,譚光明,康子婧.  南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2009(01)
[2]磷酸三鄰甲苯酯誘導(dǎo)少突膠質(zhì)細(xì)胞空泡樣變及突起變性損傷[J]. 吳守芝,曹榮,宋俊峰.  中華勞動(dòng)衛(wèi)生職業(yè)病雜志. 2007(05)
[3]自噬基因Beclin 1 shRNA表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建及其對(duì)宮頸癌細(xì)胞HeLa生長(zhǎng)的作用[J]. 王贊宏,彭芝蘭,段振玲,閆乃紅.  四川大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2007(02)
[4]全反式維甲酸體外誘導(dǎo)神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞分化的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 佟海俠,張繼紅,陸春偉,張錦華.  中國(guó)醫(yī)學(xué)工程. 2007(01)
[5]自噬及其在細(xì)胞代謝和疾病中的作用[J]. 林芳,顧振綸,秦正紅.  生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展. 2005(04)
[6]自噬在細(xì)胞生存和腫瘤發(fā)生中的作用[J]. 顏次慧,梁中琴,顧振綸,秦正紅.  中國(guó)藥理學(xué)通報(bào). 2005(03)
[7]120例急性有機(jī)磷殺蟲(chóng)劑中毒患者的隨訪研究[J]. 李芳健,何鳳生.  華南預(yù)防醫(yī)學(xué). 2004(01)
[8]切實(shí)搞好我國(guó)急性農(nóng)藥中毒的防治工作[J]. 黃金祥.  中華勞動(dòng)衛(wèi)生職業(yè)病雜志. 2002(06)
[9]食源性磷酸三鄰甲苯酯中毒性周?chē)窠?jīng)病（附179例臨床分析）[J]. 趙有奐.  實(shí)用內(nèi)科雜志. 1993(05)
[10]三鄰甲苯磷酸酯暴發(fā)中毒的臨床觀察[J]. 魯錫榮,張壽林,張哲民,楊師,何鳳生.  衛(wèi)生研究. 1992(05)

博士論文
[1]Beclin 1沉默對(duì)維生素K3誘導(dǎo)的人肝癌細(xì)胞損傷的影響[D]. 楊闖.吉林大學(xué) 2009

碩士論文
[1]自噬性死亡在結(jié)腸癌化療中的作用及其機(jī)制探討[D]. 熊海燕.第二軍醫(yī)大學(xué) 2009



本文編號(hào)：3691481