目的通過(guò)系統(tǒng)研究周?chē)窠?jīng)橫斷損傷后免疫反應(yīng)和神經(jīng)再生的關(guān)系,在分子水平探討促進(jìn)周?chē)窠?jīng)再生的潛在靶向分子。為獲得更好的修復(fù)效果,利用組織工程技術(shù)在體外構(gòu)建新型組織工程神經(jīng)修復(fù)大鼠周?chē)窠?jīng)缺損,綜合評(píng)價(jià)其在神經(jīng)修復(fù)方面的效果,以期在未來(lái)指導(dǎo)臨床治療神經(jīng)損傷工作。方法利用基因芯片分析技術(shù)尋找與免疫反應(yīng)和神經(jīng)再生相關(guān)的差異表達(dá)基因,綜合分析差異基因和調(diào)控蛋白質(zhì)的交互網(wǎng)絡(luò)關(guān)系,通過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR和免疫組織化學(xué)染色驗(yàn)證差異基因。從幼年SD大鼠皮膚內(nèi)分離、培養(yǎng)SKPs細(xì)胞,誘導(dǎo)分化為SKP-Neurons和SKP-SCs,利用SKP-Neurons和SKP-SCs與殼聚糖/絲素導(dǎo)管共培養(yǎng)來(lái)構(gòu)建新型組織工程神經(jīng)。構(gòu)建的新型組織工程神經(jīng)修復(fù)大鼠坐骨神經(jīng)10 mm缺損。術(shù)后通過(guò)行為學(xué)、神經(jīng)電生理、熒光金逆行示蹤、神經(jīng)和神經(jīng)支配靶肌肉形態(tài)學(xué)等指標(biāo)綜合評(píng)價(jià)修復(fù)效果。結(jié)果1.基因分析驗(yàn)證:差異基因篩選結(jié)果顯示有600多個(gè)基因和10個(gè)經(jīng)典途徑參與免疫反應(yīng),其中約60個(gè)基因參與神經(jīng)再生的5個(gè)經(jīng)典途徑,分析并篩選出6個(gè)參與多途徑的基因,它們被用來(lái)進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR和免疫組織化學(xué)染色驗(yàn)證。證明基因分析的準(zhǔn)確性,篩選的... 

【文章頁(yè)數(shù)】：115 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
abstract
中英文縮略詞表
第1章 緒論
    1.1 神經(jīng)再生和免疫反應(yīng)相關(guān)的分子機(jī)制研究
        1.1.1 Alcam
        1.1.2 Creb1
        1.1.3 Gli2
        1.1.4 Mid1
        1.1.5 Nedd4l
        1.1.6 Nfatc2
        1.1.7 Nrg1
        1.1.8 Nrp1和Nrp2
        1.1.9 Rac1
        1.1.10 Runx3
        1.1.11 Vax1
    1.2 皮膚源前體細(xì)胞(SKPs)在周?chē)窠?jīng)領(lǐng)域的應(yīng)用
第2章 周?chē)窠?jīng)再生的分子機(jī)制研究
    2.1 引言
    2.2 材料與方法
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.2.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.2.4 大鼠坐骨神經(jīng)橫斷模型的制備
        2.2.5 樣品RNA提取和放大、微陣列芯片雜交、芯片掃描
        2.2.6 生物信息學(xué)分析
        2.2.7 實(shí)時(shí)定量PCR(qRT-PCR)驗(yàn)證
        2.2.8 免疫組織化學(xué)驗(yàn)證
        2.2.9 統(tǒng)計(jì)分析
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 坐骨神經(jīng)橫斷后近端殘端基因表達(dá)譜
        2.3.2 基因功能分析
        2.3.3 坐骨神經(jīng)橫斷后免疫反應(yīng)與軸突導(dǎo)向、生長(zhǎng)的相關(guān)性分析
        2.3.4 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子的級(jí)聯(lián)調(diào)節(jié)
        2.3.5 免疫反應(yīng)和神經(jīng)系統(tǒng)信號(hào)的經(jīng)典通路富集分析
        2.3.6 差異基因?qū)崟r(shí)定量PCR驗(yàn)證和免疫組織化學(xué)驗(yàn)證
    2.4 討論
    2.5 本章小結(jié)
第3章 新型組織工程神經(jīng)體外構(gòu)建及修復(fù)大鼠坐骨神經(jīng)缺損的效果評(píng)價(jià)
    3.1 引言
    3.2 材料與方法
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        3.2.3 皮膚源前體細(xì)胞(SKPs)的分離、培養(yǎng)
        3.2.4 SKPs分別向施萬(wàn)細(xì)胞和神經(jīng)元分化培養(yǎng)
        3.2.5 培養(yǎng)、分化細(xì)胞的免疫細(xì)胞化學(xué)染色
        3.2.6 新型組織工程神經(jīng)的體外構(gòu)建
        3.2.7 新型組織工程神經(jīng)的免疫細(xì)胞化學(xué)染色
        3.2.8 新型組織工程神經(jīng)掃描電鏡樣本制備
        3.2.9 TEN修復(fù)大鼠10mm坐骨神經(jīng)缺損模型制備
        3.2.10 CatWalk步態(tài)分析
        3.2.11 神經(jīng)電生理檢測(cè)
        3.2.12 熒光金(FG)逆行示蹤檢測(cè)
        3.2.13 動(dòng)物模型灌注取材
        3.2.14 免疫組織化學(xué)染色
        3.2.15 透射電鏡樣本制備
        3.2.16 靶肌肉濕重測(cè)量
        3.2.17 肌肉馬松(Masson)染色
        3.2.18 運(yùn)動(dòng)終板染色
        3.2.19 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 SKPs、SKP-SCs和SKP-Neurons的分離、培養(yǎng)和鑒定
        3.3.2 新型組織工程神經(jīng)的體外構(gòu)建
        3.3.3 CatWalk步態(tài)分析
        3.3.4 神經(jīng)電生理檢測(cè)
        3.3.5 再生神經(jīng)形態(tài)學(xué)研究
        3.3.6 熒光金逆行示蹤
        3.3.7 再生神經(jīng)靶肌肉研究
    3.4 討論
    3.5 本章小結(jié)
第4章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)介及在讀期間科研成果
致謝



本文編號(hào)：3649479