神經(jīng)膠質瘤是顱內(nèi)常見的惡性腫瘤,具有發(fā)病率、復發(fā)率、死亡率高和治愈率低的“三高一低”的特點,依照WHO組織病理學和臨床標準,人類大腦神經(jīng)膠質瘤分為I-IV級,WHO IV級被認為是神經(jīng)膠質母細胞瘤,在成年人群中,是主要盛行和惡性的原始大腦腫瘤。異檸檬酸脫氫酶（isocitrate dehydrogenase, IDH）是一類酶家族,在人基因組中,有5類IDH基因可編碼3類異檸檬酸脫氫酶：IDH1,IDH2和IDH3,均可催化異檸檬酸（ICT）生成還原性輔酶（NADPH）和α-酮戊二酸（α-KG）。研究發(fā)現(xiàn),IDH1（R132）突變在繼發(fā)性膠質母細胞瘤和低級別神經(jīng)膠質瘤中發(fā)生率較高,IDH2（R172）突變則較低,IDH1和IDH2突變都是單一位點的氨基酸突變。IDH1突變后其催化活性降低,相對應的酶促反應產(chǎn)物NADPH和α-KG的產(chǎn)量下降,但同時又使其獲得了一種新的酶促活性,催化NADPH和a-KG生成2-HG。IDH突變后,細胞內(nèi)HIF-1α穩(wěn)定性提高,進而調(diào)節(jié)其下游靶基因的表達,促進腫瘤細胞的生長。當前,腫瘤細胞內(nèi)微環(huán)境是癌癥研究領域的核心問題,對腫瘤生長、遷移的生物學機制的正確理... 

【文章來源】：山西大學山西省

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
第一章 文獻綜述
    1.1 異檸檬酸脫氫酶(isocitrate dehydrogenase,IDH)突變對膠質瘤細胞中HIF-1α的影響
        1.1.1 神經(jīng)膠質瘤
        1.1.2 IDH突變的特點以及對HIF-1α的影響
    1.2 HIF-1α對下游靶基因MMPs,VEGF和Cyclin D1表達的影響
    1.3 LiCl對腫瘤細胞中Wnt/β-catenin及其他通路的調(diào)控作用
    1.4 研究LiCl與IDH突變之間的關系和意義
    1.5 論文設計思路
        1.5.1 研究背景
        1.5.2 實驗目的和主要研究內(nèi)容
        1.5.3 實驗方案及流程
        1.5.4 研究的創(chuàng)新點
第二章 C6細胞中IDH2突變對其遷移和增殖的影響
    2.1 實驗材料
        2.1.1 細胞和質粒
        2.1.2 酶和生化試劑
        2.1.3 試劑的配制
        2.1.4 實驗儀器
    2.2 實驗方法
        2.2.1 細胞培養(yǎng)
        2.2.2 三種質粒轉染C6細胞
        2.2.3 三種質粒轉染C6細胞后細胞內(nèi)HIF-1α、Cyclin D1、M2-PK以及培養(yǎng)基內(nèi)VEGF的表達水平分析
        2.2.4 免疫熒光檢測實驗
        2.2.5 明膠酶譜實驗
        2.2.6 體外劃痕擦傷實驗
    2.3 實驗結果
        2.3.1 三種質粒轉染C6細胞后細胞內(nèi)HIF-1α、Cyclin D1、M2-PK以及培養(yǎng)基內(nèi)VEGF的水平變化
        2.3.2 C6細胞內(nèi)HIF-1α和VEGF的免疫熒光檢測結果
        2.3.3 明膠酶譜檢測C6細胞內(nèi)MMP-2,9的分泌水平
        2.3.4 體外劃痕擦傷檢測C6細胞的遷移能力
    2.4 討論
第三章 GSK-3β的磷酸化對IDH2突變的C6細胞增殖活性的影響
    3.1 實驗材料
        3.1.1 細胞和質粒
        3.1.2 酶和生化試劑
        3.1.3 試劑的配制
        3.1.4 實驗儀器
    3.2 實驗方法
        3.2.1 細胞培養(yǎng)
        3.2.2 三種質粒轉染C6細胞
        3.2.3 LiCl處理細胞
        3.2.4 LY294002處理細胞
        3.2.5 LiCl和LY294002作用分別轉染三種質粒的C6細胞后細胞內(nèi)GSK-3β的磷酸化水平分析
        3.2.6 LY294002作用分別轉染三種質粒的C6細胞后對細胞增殖活力的影響
        3.2.7 LY294002和LiCl先后作用分別轉染三種質粒的C6細胞后對細胞增殖活力的影響
    3.3 實驗結果
        3.3.1 LiCl作用分別轉染三種質粒的C6細胞后細胞內(nèi)GSK-3β的磷酸化水平變化
        3.3.2 LY294002作用分別轉染三種質粒的C6細胞后細胞內(nèi)GSK-3β的磷酸化水平變化
        3.3.3 LY294002和LiCl先后作用分別轉染三種質粒的C6細胞后細胞內(nèi)GSK-3β的磷酸化水平變化
        3.3.4 LY294002作用分別轉染三種質粒的C6細胞后對細胞增殖活力的影響
        3.3.5 LY294002和LiCl先后作用分別轉染三種質粒的C6細胞后對細胞增殖活力的影響
    3.4 討論
第四章 LiCl對IDH2突變的C6細胞遷移和增殖的影響
    4.1 實驗材料
        4.1.1 細胞和質粒
        4.1.2 酶和生化試劑
        4.1.3 試劑的配制
        4.1.4 實驗儀器
    4.2 實驗方法
        4.2.1 細胞培養(yǎng)
        4.2.2 三種質粒轉染C6細胞
        4.2.3 LiCl處理細胞
        4.2.4 LiCl作用分別轉染三種質粒的C6細胞后對細胞增殖活力的影響
        4.2.5 明膠酶譜實驗
        4.2.6 體外劃痕擦傷實驗
        4.2.7 LiCl作用分別轉染三種質粒的C6細胞后細胞內(nèi)HIF-1α的表達水平分析和β-catenin的核積累量的分析
    4.3 實驗結果
        4.3.1 LiCl作用分別轉染三種質粒的C6細胞后對細胞增殖活力的影響
        4.3.2 明膠酶譜檢測C6細胞內(nèi)MMP-2,9的分泌水平
        4.3.3 體外劃痕擦傷檢測LiCl對C6細胞遷移能力的影響
        4.3.4 LiCl作用分別轉染三種質粒的C6細胞后細胞內(nèi)HIF-1α的表達水平和β-catenin在細胞核積累量的影響
    4.4 討論
參考文獻
總結與展望
附錄
致謝
個人簡況及聯(lián)系方式


【參考文獻】：
期刊論文
[1]GSK-3β:結直腸癌發(fā)生發(fā)展中的重要調(diào)控分子[J]. 李揮力,王繼亮,王國斌,陶凱雄.  世界華人消化雜志. 2010(28)
[2]口腔鱗癌中HIF-1α和MMP-2的表達及其相關性[J]. 陳衛(wèi)民,王巖.  河南大學學報(醫(yī)學版). 2008(04)
[3]HIF-1α和MMP-2在乳腺浸潤性導管癌中的表達及其相關性[J]. 蔡鳳林,周士福,馬兆生,吳玉玉,高瑋紅.  四川醫(yī)學. 2007(08)



本文編號：3629120