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成體神經(jīng)干細(xì)胞移植治療大鼠腦出血實(shí)驗(yàn)研究

發(fā)布時(shí)間:2022-02-12 23:23
  目的:評估成體神經(jīng)干細(xì)胞移植治療大鼠腦出血療效,觀察移植的成體神經(jīng)干細(xì)胞在大鼠腦內(nèi)分化方向。方法:①取成年大鼠海馬齒狀回,通過機(jī)械分離及胰酶消化法制備單細(xì)胞懸液;密度梯度離心及培養(yǎng)基選擇法獲取成體神經(jīng)干細(xì)胞懸液;體外培養(yǎng)、鑒定及標(biāo)記。②自體血紋狀體注入法制作大鼠腦出血模型20只,選取LONGA評分相同的模型鼠10只,隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組(注入神經(jīng)干細(xì)胞)和對照組(注入等量生理鹽水)各5只,術(shù)后24小時(shí),將體外培養(yǎng)并標(biāo)記的大鼠成體神經(jīng)干細(xì)胞通過立體定向腦實(shí)質(zhì)移植法移植入大鼠腦內(nèi)血腫周圍。③術(shù)后每周,連續(xù)7周,采用旋轉(zhuǎn)實(shí)驗(yàn)及肢體放置實(shí)驗(yàn)對大鼠進(jìn)行行為學(xué)測試,以觀察大鼠神經(jīng)功能恢復(fù)狀況;7周后行免疫組化檢測移植的成體神經(jīng)干細(xì)胞在實(shí)驗(yàn)組大鼠腦內(nèi)的分化方向。結(jié)果:①成體神經(jīng)干細(xì)胞在體外懸浮培養(yǎng)時(shí)逐漸成球生長,當(dāng)克隆球直徑達(dá)到160±10um時(shí),部分成體神經(jīng)干細(xì)胞開始長出突起,克隆球中央細(xì)胞因缺乏營養(yǎng)開始死亡,傳至第三代時(shí),細(xì)胞仍能保持較高的增殖能力。②自體血注入大鼠腦內(nèi)紋狀體后,大鼠出現(xiàn)明顯腦出血癥狀及體征。③成體神經(jīng)干細(xì)胞移植入大鼠腦血模型腦內(nèi)后,實(shí)驗(yàn)組大鼠神經(jīng)功能修復(fù)與對照組相比,存在顯著差異(P... 

【文章來源】:中南大學(xué)湖南省211工程院校985工程院校教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】:59 頁

【學(xué)位級別】:碩士

【文章目錄】:
摘要
Abstract
目錄
英文縮略詞表
1 緒論
2 材料與方法
    2.1 成體神經(jīng)干細(xì)胞制備
        2.1.1 材料
        2.1.2 方法
    2.2 成體神經(jīng)干細(xì)胞鑒定
        2.2.1 材料
        2.2.2 方法
    2.3 成體神經(jīng)干細(xì)胞標(biāo)記
        2.3.1 材料
        2.3.2 方法
    2.4 腦出血模型制作
        2.4.1 材料
        2.4.2 方法
    2.5 成體神經(jīng)干細(xì)胞移植
        2.5.1 材料
        2.5.2 方法
    2.6 大鼠行為學(xué)測試
        2.6.1 材料
        2.6.2 方法
    2.7 免疫組織化學(xué)染色檢測
        2.7.1 材料
        2.7.2 方法
    2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 成體神經(jīng)干細(xì)胞制備結(jié)果
    3.2 腦出血模型制作結(jié)果
    3.3 成體神經(jīng)干細(xì)胞移植術(shù)后大鼠行為學(xué)測試結(jié)果
    3.4 成體神經(jīng)干細(xì)胞移植術(shù)后免疫組織化學(xué)染色結(jié)果
4 分析及討論
    4.1 成體神經(jīng)干細(xì)胞的制備探討
        4.1.1 成體神經(jīng)干細(xì)胞定位與分布
        4.1.2 成體神經(jīng)干細(xì)胞分離、純化探討
        4.1.3 成體神經(jīng)干細(xì)胞傳代時(shí)機(jī)探討
        4.1.4 成體神經(jīng)干細(xì)胞鑒定及標(biāo)記方法探討
    4.2 腦出血模型制作方法探討
    4.3 成體神經(jīng)干細(xì)胞移植探討
        4.3.1 移植時(shí)間點(diǎn)選擇
        4.3.2 移植途徑選擇
        4.3.3 移植位點(diǎn)選擇
    4.4 成體神經(jīng)干細(xì)胞的功能
    4.5 成體神經(jīng)干細(xì)胞移植術(shù)后大鼠行為學(xué)測試結(jié)果分析
    4.6 成體神經(jīng)干細(xì)胞移植術(shù)后免疫組化結(jié)果分析
5 結(jié)論
6 展望
參考文獻(xiàn)
綜述
    References
附錄
    附錄A 海馬分離步驟及圖片
    附錄B 成體神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)方法
    附錄C 腦出血模型制作圖片
    附錄D 成體神經(jīng)干細(xì)胞移植圖片
攻讀學(xué)位期間論文發(fā)表與獲獎(jiǎng)
致謝


【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]神經(jīng)干細(xì)胞立體定向腦內(nèi)移植治療大鼠重型顱腦損傷[J]. 黎國雄,王傳湄,龔利平,吳江,龔良庚,田洪濤.  中國臨床神經(jīng)外科雜志. 2009(05)
[2]成年大鼠腦出血后室管膜下區(qū)、血腫周圍神經(jīng)前體細(xì)胞增殖研究[J]. 孫建軍,劉勇,張蓬勃,陳新林,郭振宇,張建水,楊蓬勃,師蔚.  南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2008(11)
[3]神經(jīng)干細(xì)胞和嗅鞘細(xì)胞聯(lián)合移植與神經(jīng)干細(xì)胞移植治療實(shí)驗(yàn)性腦出血的比較[J]. 唐洲平,康慧聰,彭嵐,朱遂強(qiáng),雷霆,方思羽,張?zhí)K明.  中華神經(jīng)科雜志. 2005(08)
[4]同種異體神經(jīng)干細(xì)胞移植治療大鼠腦內(nèi)出血的研究[J]. 張朋奇,姜曉兵,朱賢立,趙甲山.  華中醫(yī)學(xué)雜志. 2005(02)
[5]中樞神經(jīng)系統(tǒng)不同部位來源的神經(jīng)干細(xì)胞在體外生長特性的比較[J]. 許漢鵬,茍琳,楊浩,王春婷,吳玉梅,鞠躬.  解剖學(xué)報(bào). 2004(04)



本文編號(hào):3622572

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