目的:通過體內(nèi)及體外實(shí)驗(yàn)探討注射型富血小板纖維蛋白（i-PRF）誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSCs）成神經(jīng)細(xì)胞分化的能力及二者聯(lián)合使用治療坐骨神經(jīng)損傷的療效。方法:取10-15日齡SD乳鼠脛骨骨髓分離培養(yǎng)BMSCs至第4代后隨機(jī)分為對(duì)照組（A組）及實(shí)驗(yàn)組（B、C組）。采用改良低速離心法備制i-PRF后分別取0、100、200ul加入各組12%FBS完全培養(yǎng)基中與BMSCs共培養(yǎng),2周后i-PRF及血清濃度降低各50%。第7、14、21d觀察各組細(xì)胞形態(tài)改變并以免疫組化法及Western blot檢測(cè)其誘導(dǎo)結(jié)果。取成年SD大鼠24只采用鉗夾法備制坐骨神經(jīng)損傷模型后隨機(jī)分為四組,A組鞘膜內(nèi)注射BMSCs懸液+i-PRF;B組鞘膜內(nèi)注射i-PRF;C組鞘膜內(nèi)注射BMSCs懸液;D組鞘膜內(nèi)注射生理鹽水,每組6只。術(shù)后每周對(duì)各組大鼠進(jìn)行BBB功能評(píng)分;術(shù)后2個(gè)月采用脫頸法處死大鼠取坐骨神經(jīng)組織行透射電鏡及HE染色觀察神經(jīng)修復(fù)情況;Western blot技術(shù)檢測(cè)相關(guān)蛋白表達(dá)。結(jié)果:BMSCs經(jīng)i-PRF誘導(dǎo)7天后細(xì)胞形態(tài)開始改變,21天后突觸生長(zhǎng),出現(xiàn)類神經(jīng)元細(xì)胞形態(tài);細(xì)胞免疫組化顯示:B、C組N... 

【文章來(lái)源】：西南醫(yī)科大學(xué)四川省

【文章頁(yè)數(shù)】：43 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

光學(xué)顯微鏡觀察第四代BMSCsa.倒置相差顯微鏡×100；b.倒置相差顯微鏡×200

-14-結(jié)果1i-PRF體外誘導(dǎo)BMSCs成神經(jīng)干細(xì)胞分化實(shí)驗(yàn)1.1大鼠BMSCs培養(yǎng)結(jié)果依照本課題組既往使用的密度梯度離心法進(jìn)行細(xì)胞分離及培養(yǎng)及傳代。在培養(yǎng)開始后3周可以獲得純化的第4代BMSCs群。見圖1。圖1光學(xué)顯微鏡觀察第四代BMSCsa.倒置相差顯微鏡×100；b.倒置相差顯微鏡×200Fig.1Observationoffourth-generationBMSCsbyopticalmicroscopea.Invertedphasecontrastmicroscope×100;b.Invertedphasecontrastmicroscope×2001.2i-PRF的備制結(jié)果依照Choukroun等改良低速離心法成功備制實(shí)驗(yàn)所需i-PRF。見圖2。圖2低速離心法備制i-PRFa.離心前；b.離心后Fig.2Preparationofi-PRFbylowspeedcentrifugationa.Beforecentrifugation;b.Aftercentrifugation

-15-1.3光鏡及結(jié)晶紫染色觀察結(jié)果實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞經(jīng)i-PRF誘導(dǎo)7天后細(xì)胞胞體逐漸變圓，少量細(xì)胞突觸生長(zhǎng)；14天后大量細(xì)胞突觸呈放射樣生長(zhǎng)，胞體呈圓形改變；21天后出現(xiàn)呈雙極或多極改變，突觸變長(zhǎng)。對(duì)照組細(xì)胞形態(tài)仍呈紡錘形、多角形，未見明顯變化。誘導(dǎo)結(jié)束后行結(jié)晶紫染色，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞胞體圓形，四周見放射狀長(zhǎng)突觸，對(duì)照組較前無(wú)明顯改變。見圖3。圖3細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察（×200）a.誘導(dǎo)前；b.實(shí)驗(yàn)組誘導(dǎo)后7d；c.實(shí)驗(yàn)組誘導(dǎo)后14d；d.實(shí)驗(yàn)組誘導(dǎo)后21d；e.對(duì)照組21d后結(jié)晶紫染色；f.實(shí)驗(yàn)組21d后結(jié)晶紫染色Fig.3Morphologicalobservationofcells(×200)a.Beforeinduction;b.Experimentalgroup7days;c.Experimentalgroup14days;d.Experimentalgroup21days;e.Crystalvioletstainingafter21daysinthecontrolgroup;f.Crystalvioletstainingafter21dinexperimentalgroup1.4免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)結(jié)果在實(shí)驗(yàn)組中，Nestind抗原在胞體及突觸表達(dá)呈陽(yáng)性；而對(duì)照組中，細(xì)胞Nestind抗原表達(dá)呈弱陽(yáng)性或陰性。見圖4。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號(hào)：3617431