目的：本實(shí)驗(yàn)通過(guò)研究野生型和polyQ擴(kuò)展突變型ataxin-3蛋白在細(xì)胞內(nèi)的亞細(xì)胞定位及ataxin-3蛋白的polyQ擴(kuò)展突變對(duì)線粒體、高爾基體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)形態(tài)的影響,以期更深入地了解ataxin-3的生物學(xué)功能及突變型ataxin-3蛋白的可能毒性作用機(jī)制。方法：用Lipofectamine2000脂質(zhì)體將GFP-ataxin-3融合蛋白表達(dá)載體pEGFP-N1-MJD20Q/68Q轉(zhuǎn)染入Hela細(xì)胞。轉(zhuǎn)染24小時(shí)后采用間接免疫熒光法用紅色熒光染料分別標(biāo)記識(shí)別線粒體、高爾基體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜的標(biāo)記蛋白TOM20、GM130、calnexin.在激光共聚焦顯微鏡下觀察ataxin-3蛋白是否與各細(xì)胞器共定位及ataxin-3蛋白的polyQ擴(kuò)展突變對(duì)線粒體、高爾基體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)形態(tài)的影響。結(jié)果：1.ataxin-3蛋白與線粒體標(biāo)記蛋白TOM20無(wú)共定位,但表達(dá)polyQ擴(kuò)展型ataxin-3組線粒體碎裂細(xì)胞百分比增加（P<0.05）。2.ataxin-3蛋白與高爾基體標(biāo)記蛋白GM130無(wú)共定位信號(hào)且擴(kuò)展突變型ataxin-3也不引起高爾基體碎裂。3.野生型和polyQ擴(kuò)展型ataxin-3... 

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【文章頁(yè)數(shù)】：59 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略詞表
1 前言
2 儀器與材料
    2.1 主要儀器
    2.2 主要試劑與耗材
    2.3 主要溶液配制
3 實(shí)驗(yàn)方法
    3.1 質(zhì)粒擴(kuò)增、抽提
    3.2 Hela細(xì)胞的培養(yǎng)
    3.3 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染Hela細(xì)胞
    3.4 免疫熒光-激光共聚焦檢測(cè)
4 結(jié)果
    4.1 質(zhì)粒酶切鑒定及在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)
    4.2 ataxin-3與細(xì)胞器的激光共聚焦結(jié)果
        4.2.1 ataxin-3與線粒體
        4.2.2 ataxin-3與高爾基體
        4.2.3 ataxin-3與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)
5 討論
    5.1 ataxin-3蛋白與線粒體
    5.2 ataxin-3蛋白與高爾基體
    5.3 ataxin-3蛋白與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)
6 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]ataxin-3相互作用蛋白的篩選及鑒定（英文）[J]. 沈璐,湯建光,唐北沙,江泓,趙國(guó)華,夏昆,張玉虎,蔡芳,譚利明,潘乾.  中華醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)雜志. 2005(03)



本文編號(hào)：3609830