目的:探討IL-4是否介導(dǎo)JAK1/STAT6通路促進(jìn)小膠質(zhì)細(xì)胞向M2型極化,減輕腦出血后炎癥反應(yīng)和減少神經(jīng)細(xì)胞凋亡以促進(jìn)神經(jīng)功能損傷恢復(fù)?方法:1.通過建立凝血酶誘導(dǎo)BV2細(xì)胞分化模型,使用CD16/32作為M1型小膠質(zhì)細(xì)胞的標(biāo)志物,CD206作為M2型的標(biāo)志物,利用免疫熒光方法檢測Iba-1+CD16/32、Iba-1+CD206熒光蛋白表達(dá)共定位,明確BV2細(xì)胞是否在凝血酶誘導(dǎo)后被激活,且分別檢測出兩組標(biāo)記物共定位表達(dá)各自相對熒光強度。再將凝血酶誘導(dǎo)后的BV2細(xì)胞分為四組:（1）Control組:僅凝血酶誘導(dǎo)BV2細(xì)胞分化模型組;（2）Thr+PBS組:凝血酶誘導(dǎo)BV2細(xì)胞分化模型的PBS組;（3）Thr+IL-4組:凝血酶誘導(dǎo)BV2細(xì)胞分化模型的IL-4組;（4）IL-4+AG組:凝血酶誘導(dǎo)BV2細(xì)胞分化模型的IL-4和AG-490組。利用Western blot方法檢測p-JAK1、JAK1、p-STAT6和STAT6等通路蛋白的表達(dá)水平,利用免疫熒光技術(shù)檢測BV2細(xì)胞中Iba-1+CD16/32和Iba-1+CD206共定位表達(dá)細(xì)胞相對熒光強度。2.利用膠原酶VII建立小鼠... 

【文章來源】：遵義醫(yī)科大學(xué)貴州省

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

利用膠原酶VII建立C57BL/6小鼠腦出血模型，建模成功后手術(shù)組和假手術(shù)組實物圖

圖 2 體外實驗中，IL-4 對 BV2 細(xì)胞極化過程的作用結(jié)果。（注：A 免疫熒光染色測量不同極化亞型 BV2 細(xì)胞的熒光蛋白 Iba-1+CD16/32 和 Iba-1+CD206 表達(dá)共定位的相對熒光強度；B 與 Thr+PBS組相比，Thr+IL-4 組細(xì)胞中 Iba-1+CD16/32 熒光蛋白表達(dá)共定位的相對熒光強度顯著減弱，而細(xì)胞中 Iba-1+CD206 熒光蛋白表達(dá)共定位的相對熒光強度顯著增強，并且給予 AG-490 處理后上述結(jié)果被明顯逆轉(zhuǎn)，且差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義，*P < 0.05；n = 5，比例尺 = 50μm。）Fig. 2 Effect of IL-4 on BV2 microglial polarization in vitro. (A) The phenotypes of BV2 cells weredetected by the relative fluorescent intensity of Iba-1 + CD16/32 costaining and Iba-1 + CD206 costaining.(B) Iba-1 + CD16/32 cells were significantly decreased in the Thr+IL-4 group compared with those in theThr+PBS group. Furthermore, the relative intensity of Iba-1 + CD206 cells in the thr+IL-4 group wassignificantly higher than that in the PBS group. However, this result was reversed by using AG-490. Dataare the means ±SD (*P < 0.05; n = 5). Scale bar = 50 μm.2.2 IL-4 激活凝血酶誘導(dǎo)的 BV2 細(xì)胞中 JAK1/STAT6 信號通路

遵義醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 何 洋實驗檢測了 p-JAK1、JAK1、p-STAT6 和 STAT6 四個通路蛋白。結(jié)果表明，腦出血后，JAK1/STAT6 通路被激活，與 Control 組相比，Thr+PBS 組中p-JAK1/ JAK1、p-STAT6/ STAT6 水平無明顯差異；與 Control 組和 Thr+PBS組相比，Thr+IL-4 組中 p-JAK1/JAK1 和 p-STAT6/STAT6 的表達(dá)水平明顯上調(diào)；然而，在 IL-4+AG 組中，p-JAK1/JAK1 和 p-STAT6/STAT6 的表達(dá)水平較 Thr+IL-4 組中明顯下調(diào)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（*P < 0.05；n = 6）（如圖 3）。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]脊髓損傷后IL-4促使小膠質(zhì)細(xì)胞和巨噬細(xì)胞在組織修復(fù)和功能恢復(fù)中發(fā)揮作用[J]. 王晶,Francos-Quijorna I,Amo-Aparicio J,Martinez-Muriana A,López-Vales R.  神經(jīng)損傷與功能重建. 2016(06)



本文編號：3609646