目的:本研究通過探討腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激（Endoplasmic reticulum stress,ERS）下,ATF4對(duì)線粒體未折疊蛋白反應(yīng)(Mitochondria unfolded protein response,UPR^mt)的影響,揭示腫瘤細(xì)胞中ERS與UPR^mt之間的關(guān)系,并為干預(yù)細(xì)胞器交互作用治療腫瘤提供有意義的線索。方法:本研究選擇人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞U87和SHG44細(xì)胞系作為研究對(duì)象,通過ERS誘導(dǎo)劑衣霉素（Tunicamycin,Tm）和毒胡蘿卜素（Thapsigargin,Tg）誘導(dǎo)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞產(chǎn)生ERS,采用基因干涉手段過表達(dá)或敲減ATF4的表達(dá)運(yùn)用western blots、RT-qPCR、流式細(xì)胞術(shù)和mitotracker染色等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)檢測(cè)UPR^mt相關(guān)蛋白、線粒體DNA（Mitochondrial DNA,mtDNA）拷貝數(shù)、線粒體膜電勢(shì)、線粒體形態(tài)和數(shù)量變化。結(jié)果:1.ERS能誘導(dǎo)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞線粒體功能損傷。使用ERS誘導(dǎo)劑Tm、Tg處理腦膠質(zhì)瘤SHG44與U87細(xì)胞構(gòu)建ERS細(xì)... 

【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞ERS模型構(gòu)建A.MTT檢測(cè)U87和SHG44細(xì)胞Tm及Tg處理24h后細(xì)胞活力；B.

-26-體膜電勢(shì)明顯下降（圖2C）。基于以上結(jié)果，可證明ERS可誘導(dǎo)線粒體功能失調(diào)，并且低濃度處理下，細(xì)胞存在一定的保護(hù)機(jī)制，保障線粒體功能，而隨著藥物濃度加大，線粒體功能明顯受損。圖2ERS誘導(dǎo)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞線粒體功能損傷。A.mitotracker染色分析Tm處理12h后的SHG44細(xì)胞線粒體數(shù)量形態(tài)；B.RT-qPCR檢測(cè)U87和SHG44細(xì)胞Tm處理12h后mtDNA拷貝數(shù)變化；C.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)SHG44細(xì)胞Tm處理24h后線粒體膜電勢(shì)變化。與con相比，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。

-28-圖3ERS能誘導(dǎo)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞產(chǎn)生UPRmtA.westernblots檢測(cè)Tm、Tg處理U87細(xì)胞6、12h總蛋白中UPRmt指標(biāo)變化；B.westernblots檢測(cè)Tm、Tg處理SHG44細(xì)胞6、12h線粒體總蛋白UPRmt指標(biāo)變化；C.RT-qPCR檢測(cè)Tm處理U87、


本文編號(hào)：3606008