目的：研究硫化氫（Hydrogen sulfide, H₂S）對(duì)魚藤酮誘導(dǎo)的BV2小膠質(zhì)細(xì)胞活化及炎癥因子生成的調(diào)節(jié)作用，并探討其相關(guān)機(jī)制。方法：以BV2細(xì)胞和原代培養(yǎng)的皮層小膠質(zhì)細(xì)胞為研究對(duì)象，采用魚藤酮建立細(xì)胞炎癥模型。采用免疫熒光方法檢測(cè)小膠質(zhì)細(xì)胞活化的特異性標(biāo)記物Iba-1的表達(dá)；實(shí)時(shí)熒光定量PCR（Quantitative Polymerase Chain Reaction, Q-PCR）檢測(cè)小膠質(zhì)細(xì)胞表面標(biāo)記物CD68及YM1/2的表達(dá)；MTT比色法檢測(cè)細(xì)胞活力；采用逆轉(zhuǎn)錄PCR（ReverseTranscription-Polymerase Chain Reaction, RT-PCR）方法檢測(cè)炎癥相關(guān)蛋白環(huán)氧化酶-2（cyclooxygenase-2, COX-2）、白細(xì)胞介素（Interleukin, IL）-1βmRNA水平的變化；用活性氧族物質(zhì)（Reactive oxygen species, ROS）探針-雙氫乙酰乙酸-二氯熒光黃（Dichlorofluorescin diacetate, DCFH-DA）測(cè)定細(xì)胞內(nèi)ROS含量；采用West... 

【文章來(lái)源】：蘇州大學(xué)江蘇省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：63 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

NaHS對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞激活的影響

圖 1. NaHS 對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞激活的影響。（圖 1-A. MTT 測(cè)定各組的細(xì)胞凋亡率；圖 1-B. 免疫熒光顯微鏡觀察 NaHS (100 μM, 5 min)對(duì)魚藤酮誘導(dǎo)(10 nM, 24 h)的 BV2 細(xì)胞中 Iba-1 的表達(dá)變化的影響，綠色熒光代表 Iba-1，藍(lán)色熒光代表細(xì)胞核，標(biāo)尺示 37.5 μm；圖 1-C, D. Real time PCR 檢測(cè) NaHS 對(duì) CD68（C）及 Ym1/2（D）基因轉(zhuǎn)錄水平的影響，與對(duì)照組相比，**P<0.01；與魚藤酮組相比，##P<0.01，###P<0.001。n=4-5）2. NaHS 預(yù)處理對(duì)魚藤酮誘導(dǎo)的促炎因子表達(dá)和生成的影響在上述結(jié)果基礎(chǔ)上，我們進(jìn)一步檢測(cè)了NaHS對(duì)魚藤酮誘導(dǎo)的相關(guān)炎癥因子如COX-2, IL-1β及PGE2產(chǎn)生的影響。如圖所示，魚藤酮處理后18 h和24 h，BV2細(xì)胞中COX-2的mRNA及蛋白水平顯著升高（圖2-A、B），48h后細(xì)胞培養(yǎng)上清中PGE2水平明顯增加（圖2-C）；NaHS (100 μM)預(yù)處理5 min能夠抑制COX-2mRNA和蛋白，以及PGE2的升高。與COX-2相似的是，魚藤酮處理細(xì)胞18 h后，IL-1 的轉(zhuǎn)錄水平也較對(duì)照組升高，而用NaHS預(yù)處理5 min后能夠抑制其升高（圖2-D）。此外，NaHS(100 μM)預(yù)處理也

圖 2. NaHS 對(duì)魚藤酮誘導(dǎo)的炎癥相關(guān)因子產(chǎn)生的影響。（圖 2-A, B. RT-PCR 及 werstern blot 檢測(cè) NaHS(100 μM, 5 min)對(duì)魚藤酮(10 nM)誘導(dǎo)的 COX-2 轉(zhuǎn)錄(A)和蛋白表達(dá)(B)的影響；圖2-C. ELISA檢測(cè)NaHS對(duì)魚藤酮(10 nM, 48 h)誘導(dǎo)的PGE2的影響；圖 2-D. RT-PCR 檢測(cè) NaHS 對(duì)魚藤酮(10 nM, 18 h)誘導(dǎo)的 IL-1β轉(zhuǎn)錄的影響；圖 2-E. DCF 法檢測(cè)NaHS 對(duì)魚藤酮(10 nM, 18 h)誘導(dǎo)的 ROS 蓄積的影響；圖 2-F. ELISA 檢測(cè) NaHS 對(duì)魚藤酮(10 nM,48 h)誘導(dǎo)的原代小膠質(zhì)細(xì)胞 PGE2產(chǎn)生的影響，與對(duì)照組相比，**P<0.01，***P<0.001；與魚藤酮組相比，##P<0.01，#P<0.05。n=3）3. NaHS 后處理對(duì)魚藤酮誘導(dǎo)的 COX-2 表達(dá)的影響鑒于神經(jīng)炎癥常存在于疾病的發(fā)生或發(fā)展中，所以我們也評(píng)價(jià)了魚藤酮處理后再給予外源性 H2S 的作用。分別在魚藤酮處理 BV2 細(xì)胞 0 h、1 h、6 h 及 12 h 后， 加入 NaHS(100 μM)，24h 后提取蛋白分析 COX-2 蛋白表達(dá)變化 。Western blott 結(jié)果顯示，魚藤酮處理 24 h 后， BV2 細(xì)胞 COX-2 的蛋白水平顯著升高，而在魚藤酮給藥

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]“廢氣不廢”:氣體信號(hào)分子硫化氫的研究進(jìn)展[J]. 金紅芳,杜軍保,唐朝樞.  生理學(xué)報(bào). 2010(06)



本文編號(hào)：3599152