癲癇是一種常見的神經(jīng)性疾病,往往會給人們生活帶來巨大的影響。大腦受到損傷后,誘發(fā)神經(jīng)炎癥和活性氧并累積,從而促進(jìn)了癲癇的發(fā)生發(fā)作并持續(xù)存在。癲癇的發(fā)生又進(jìn)一步加重氧化應(yīng)激,形成惡性循環(huán)。Sirt3是一個種依賴于煙酰胺腺嘌呤二核苷酸的Ⅲ類去乙�；�,通過對相關(guān)線粒體蛋白脫乙酰化來保證線粒體功能完整性,其在癲癇中的作用尚不明確。本課題擬通過Sir3基因敲除小鼠來探究Sirt3在癲癇發(fā)生中的作用,并研究其發(fā)揮的作用機(jī)制。目的:紅藻氨酸（kainic acid,KA）致癇后,比較Sir3基因敲除小鼠和野生型小鼠癲癇發(fā)作嚴(yán)重程度及對學(xué)習(xí)記憶的損害,并從氧化應(yīng)激方面探究其可能機(jī)制。方法:以Sirt3基因敲除小鼠和C57BL/6野生型小鼠為對象,腹腔注射KA（22mg/kg）建立癲癇模型,并記錄其癲癇發(fā)作潛伏時間,發(fā)作最高等級;蛋白免疫印跡,RT-PCR檢測相關(guān)蛋白表達(dá);FJB染色觀察腦內(nèi)海馬區(qū)域神經(jīng)元死亡情況;DCFH-DA探針檢測腦內(nèi)的ROS活性;Morris水迷宮、曠場檢測小鼠學(xué)習(xí)記憶能力和焦慮抑郁狀態(tài)。以N2A細(xì)胞作為體外研究對象,KA給藥建立癲癇模型;Si-RNA利用Lipo3000轉(zhuǎn)染試... 

【文章來源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

Sirtuins家族成員脫乙�；^程

KA給藥24小時能引起C57BL/6小鼠Sirt3表達(dá)顯著下降

浙江大學(xué)碩士論文實(shí)驗(yàn)結(jié)果18如圖4所示，Sirt3基因敲除小鼠（KO）的發(fā)作潛伏時間明顯長于C57BL/6小鼠（WT）（P<0.05）；Sirt3基因敲除小鼠（KO）的發(fā)作最高等級明顯低于C57BL/6小鼠（WT）（P<0.05）。以上結(jié)果提示，敲除Sirt3對癲癇的發(fā)生有保護(hù)作用。圖4敲除Sirt3延長小鼠癲癇發(fā)作時間，降低小鼠癲癇發(fā)作最高等級Figure4Sirt3deficiencyprolongtheseizurelatencyanddecreasetheseizureseverity腹腔注射KA后開始計(jì)時，記錄小鼠癲癇發(fā)作情況。圖A為小鼠的癲癇發(fā)作潛伏期統(tǒng)計(jì)圖，圖B為2h內(nèi)小鼠癲癇發(fā)作最高等級統(tǒng)計(jì)圖。*表示與WT組比P<0.05。(WT:n=23，KO:n=19)3.3敲除Sirt3對腦內(nèi)氧化應(yīng)激的影響根據(jù)前面的結(jié)果，在癲癇發(fā)作24h后，腦內(nèi)Sirt3表達(dá)顯著降低。因此，我們選取癲癇發(fā)作24h為時間節(jié)點(diǎn)，以Sirt3基因敲除小鼠和C57BL/6小鼠為研究對象，腹腔注射KA建立癲癇模型。癲癇發(fā)作24h后，斷頭取海馬組織，檢測海馬內(nèi)氧化應(yīng)激狀態(tài)。以ROS含量和乙�；疭OD表達(dá)為檢測指標(biāo)來觀察敲除Sirt3后，腦內(nèi)氧化應(yīng)激的變化。ROS是是自由基的一種，若其在細(xì)胞內(nèi)得不到及時清除，會導(dǎo)致氧化應(yīng)激[20]。超氧化物歧化酶SOD是生物體內(nèi)一種抗氧化酶，是線粒體內(nèi)ROS主要清除劑。SOD有兩種修飾狀態(tài)，分別為乙酰化和脫乙�；问�。通常其脫乙�；问接猩飳W(xué)活性，能清除ROS，所以其乙酰化形式表達(dá)越高，清除ROS能力越弱[25]。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Role of sirtuins in ischemia-reperfusion injury[J]. Eirini Pantazi,Mohamed Amine Zaouali,Mohamed Bejaoui,Emma Folch-Puy,Hassen Ben Abdennebi,Joan Roselló-Catafau.  World Journal of Gastroenterology. 2013(43)



本文編號：3594751