DGCR8/ZFAT-AS1通過PRC2促進(jìn)CDX2轉(zhuǎn)錄調(diào)控膠質(zhì)瘤細(xì)胞生物學(xué)行為的機(jī)制研究
發(fā)布時(shí)間：2022-01-11 14:46
目的:腦膠質(zhì)瘤是人中樞神經(jīng)系統(tǒng)中最常見的原發(fā)性顱內(nèi)惡性腫瘤。盡管近年來手術(shù)切除、化療和放療在膠質(zhì)瘤治療方面取得了顯著進(jìn)展,但膠質(zhì)瘤患者的預(yù)后仍然很差,在所有癌癥中,5年生存率最低,病理級別高的膠質(zhì)瘤患者中位生存期大約為15個(gè)月。因此探索新的有效的分子靶向治療標(biāo)志具有重要意義。本研究旨在為揭示RNA結(jié)合蛋白DGCR8和長鏈非編碼RNA ZFAT-AS1是否在調(diào)控膠質(zhì)瘤細(xì)胞生物學(xué)行為中發(fā)揮重要作用,并深入研究可能的分子調(diào)控機(jī)制,即DGCR8促進(jìn)ZFAT-AS1降解以減弱其以PRC2依賴的方式對CDX2的轉(zhuǎn)錄抑制,上調(diào)CDX2的表達(dá),促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為。研究方法:首先培養(yǎng)人膠質(zhì)瘤細(xì)胞U87、U251和人星型膠質(zhì)細(xì)胞HA。通過quantitative Real-time PCR方法和Western blot方法檢測在瘤周腦實(shí)質(zhì)、膠質(zhì)瘤組織、人星型膠質(zhì)細(xì)胞、膠質(zhì)瘤細(xì)胞中,DGCR8、ZFAT-AS1、CDX2和RRM2B的表達(dá)水平。為進(jìn)一步檢測其對膠質(zhì)瘤細(xì)胞生物學(xué)行為的作用,通過細(xì)胞穩(wěn)定轉(zhuǎn)染方法分別構(gòu)建DGCR8沉默的細(xì)胞系,以及ZFAT-AS1、CDX2和RRM2B過表達(dá)和表達(dá)沉默的細(xì)...
【文章來源】：中國醫(yī)科大學(xué)遼寧省
【文章頁數(shù)】：67 頁
【學(xué)位級別】：碩士
【部分圖文】：
ZFAT-AS1的表達(dá)水平及對膠質(zhì)瘤細(xì)胞生物學(xué)行為的影響
中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文17圖3.3DGCR8通過與ZFAT-AS1結(jié)合降低其穩(wěn)定性，發(fā)揮促癌作用（A-B）RNA免疫沉淀（RIP）實(shí)驗(yàn)證實(shí)DCGR8與ZFAT-AS1結(jié)合。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantitativereal-timePCR）法測定相對富集。（A）相對于正常IgG免疫沉淀組，anti-SNRNP70組中U1小核RNA(snRNA)的相對富集量。（B）與正常IgG免疫沉淀組相比，ZFAT-AS1在anti-DGCR8組中的相對富集量。正常小鼠IgG組為陰性對照，anti-SNRNP70組為陽性對照，GAPDH為陰性RNA對照。數(shù)據(jù)以均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示（各組n=3）。與anti-normalIgG組比較，**P<0.01；與GAPDH組比較，##P<0.01。采用t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。（C）采用Click-iT新生RNA捕獲試劑盒（ThermoFisherScientific,USA）對新合成的RNA進(jìn)行標(biāo)記和捕獲，quantitativereal-time
中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文19圖3.4沉默CDX2抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為（A）在膠質(zhì)瘤鄰近的正常腦實(shí)質(zhì)（Adjacent）和不同分級膠質(zhì)瘤組織中的CDX2表達(dá)水平。對Westernblot檢測條帶的灰密度值（IDVs）進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示（各組n=12），與Adjacent組比較，**P<0.01；與I-II級膠質(zhì)瘤組比較，##P<0.01。（B）CDX2在HA、U87和U251細(xì)胞中的表達(dá)水平。數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示（各組n=3）。與HA組相比，*P<0.05，**P<0.01。（C）CDX2對U87和U251細(xì)胞增殖的影響。（D）CDX2過表達(dá)或下調(diào)后檢測U87和U251細(xì)胞的凋亡百分比。（E）CDX2對U87和U251細(xì)胞遷移和侵襲的影響。標(biāo)尺代表50μm。數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示（各組n=3）。與CDX2(+)NC組比較，*P<0.05，**P<0.01；與CDX2(-)NC組比較，##P<0.05；##P<0.01。統(tǒng)計(jì)分析采用單因素方差分析。3.5ZFAT-AS1通過招募并結(jié)合PRC2在CDX2啟動(dòng)子區(qū)誘導(dǎo)H3K27me3修飾，抑制CDX2的轉(zhuǎn)錄PRC2通過催化H3K27me2/3修飾抑制基因轉(zhuǎn)錄活性。研究表明，lncRNAs正
本文編號：3582965
【文章來源】：中國醫(yī)科大學(xué)遼寧省
【文章頁數(shù)】：67 頁
【學(xué)位級別】：碩士
【部分圖文】：
ZFAT-AS1的表達(dá)水平及對膠質(zhì)瘤細(xì)胞生物學(xué)行為的影響
中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文17圖3.3DGCR8通過與ZFAT-AS1結(jié)合降低其穩(wěn)定性，發(fā)揮促癌作用（A-B）RNA免疫沉淀（RIP）實(shí)驗(yàn)證實(shí)DCGR8與ZFAT-AS1結(jié)合。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantitativereal-timePCR）法測定相對富集。（A）相對于正常IgG免疫沉淀組，anti-SNRNP70組中U1小核RNA(snRNA)的相對富集量。（B）與正常IgG免疫沉淀組相比，ZFAT-AS1在anti-DGCR8組中的相對富集量。正常小鼠IgG組為陰性對照，anti-SNRNP70組為陽性對照，GAPDH為陰性RNA對照。數(shù)據(jù)以均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示（各組n=3）。與anti-normalIgG組比較，**P<0.01；與GAPDH組比較，##P<0.01。采用t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。（C）采用Click-iT新生RNA捕獲試劑盒（ThermoFisherScientific,USA）對新合成的RNA進(jìn)行標(biāo)記和捕獲，quantitativereal-time
中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文19圖3.4沉默CDX2抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為（A）在膠質(zhì)瘤鄰近的正常腦實(shí)質(zhì)（Adjacent）和不同分級膠質(zhì)瘤組織中的CDX2表達(dá)水平。對Westernblot檢測條帶的灰密度值（IDVs）進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示（各組n=12），與Adjacent組比較，**P<0.01；與I-II級膠質(zhì)瘤組比較，##P<0.01。（B）CDX2在HA、U87和U251細(xì)胞中的表達(dá)水平。數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示（各組n=3）。與HA組相比，*P<0.05，**P<0.01。（C）CDX2對U87和U251細(xì)胞增殖的影響。（D）CDX2過表達(dá)或下調(diào)后檢測U87和U251細(xì)胞的凋亡百分比。（E）CDX2對U87和U251細(xì)胞遷移和侵襲的影響。標(biāo)尺代表50μm。數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示（各組n=3）。與CDX2(+)NC組比較，*P<0.05，**P<0.01；與CDX2(-)NC組比較，##P<0.05；##P<0.01。統(tǒng)計(jì)分析采用單因素方差分析。3.5ZFAT-AS1通過招募并結(jié)合PRC2在CDX2啟動(dòng)子區(qū)誘導(dǎo)H3K27me3修飾，抑制CDX2的轉(zhuǎn)錄PRC2通過催化H3K27me2/3修飾抑制基因轉(zhuǎn)錄活性。研究表明，lncRNAs正
本文編號：3582965
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