背景泛素-蛋白酶體系統(tǒng)（ubiquitin-proteasome system,UPS）是細胞內蛋白質降解的主要途徑,負責降解80%以上的細胞內錯誤折疊蛋白或其他突變蛋白。泛素（Ubiquitin,Ub）與底物的結合稱作泛素化（ubiquitination）,是由泛素激活酶（E1）、泛素結合酶（E2）和泛素連接酶（E3）的連續(xù)作用催化泛素自身的不同位置lysine（K）和底物結合完成的。Ub-K48連接的泛素化通常將底物導向蛋白酶體依賴降解,而Ub-K63連接的泛素化則主要具有調節(jié)信號通路、內吞作用和蛋白質相互作用的功能。蛋白質泛素化在多種神經退行性疾病中具有重要意義。而衰老和帕金森氏病均引起泛素蛋白酶體系統(tǒng)功能異常,研究表明多巴胺能神經元隨著衰老和帕金森氏病均出現(xiàn)丟失現(xiàn)象,其機制與泛素蛋白酶體系統(tǒng)密切相關,但是Ub-K 48和Ub-K 63結合物在多巴胺能神經元內的表達及其與衰老的關系尚不清楚。目的本課題研究在小鼠黑質多巴胺神經元內Ub-K48和Ub-K63結合物的表達情況及其與衰老的關系,旨在為防治帕金森疾病尋找新的靶點和思路。方法將12只5周齡C57BL6雄性小鼠和6只13月齡C... 

【文章來源】：安徽醫(yī)科大學安徽省

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

Ub-K48和Ub-K63的連接物在正常小鼠黑質致密部分的多巴胺神經元胞質中密集表

安徽醫(yī)科大學碩士學位論文273.25周齡C57BL6小鼠中腦黑質部位Ub-K48的陽性表達低于Ub-K63蛋白的陽性表達。為了解Ub-K63與Ub-K48在黑質區(qū)域的具體分布位置，采用黑質部位連續(xù)石蠟切片進行免疫組化實驗，免疫組化結果顯示，5周齡C57BL6小鼠中腦部位Ub-K63陽性率高于Ub-K48。對比TH陽性細胞的分布情況，可以推論Ub-K48和Ub-K63更集中分布在黑質的致密部部位和腹側被蓋區(qū)。圖25周齡小鼠中腦黑質免疫組化，Ub-K48和Ub-K63多位于SNC(黑質致密部)和VTA(腹側被蓋區(qū))。在黑質部位，Ub-K48陽性細胞率低于Ub-K63(H).bar=200μm(A-C),50μm(D)。每個實驗重復3次，n=3。*P<0.05,**P<0.01。Fig3.TheImmunohistochemistryofthesubstantianigraofthe5weekmousebrain.Ub-K48andUb-K63aremostlylocatedinSNC(substantianigraparscompacta)andVTA(ventraltegmentalarea).ThepositiverateofUb-K48insubstantianigrawaslowerthanUb-K63(H).Bar=200μm(A-C),50μm(D-G).Eachoftheexperimentswasrepeated3times,n=3.*P<0.05，**P<0.01.

安徽醫(yī)科大學碩士學位論文283.313月齡C57BL6小鼠中腦黑質多巴胺能神經元胞質部位Ub-K48蛋白與TH有共聚集現(xiàn)象按照類似5周齡小鼠的處理方式處理13月齡的C57BL6雄性鼠，免疫熒光雙標結果顯示出顯著區(qū)別于5周齡的現(xiàn)象。13月齡小鼠中腦的多巴胺能神經元胞質內可見Ub-K48泛素聚集，與TH蛋白有共聚集現(xiàn)象。圖3與正常5周齡小鼠相比，在13月齡老年鼠黑質多巴胺能神經元的細胞質中發(fā)現(xiàn)了Ub-K48的聚集物，并與TH出現(xiàn)共聚集現(xiàn)象。5周齡小鼠黑質（A）和13月齡小鼠黑質的免疫熒光（E）結果圖。圖（B）是（A）中方框部分的放大。（C，D）是在合并圖（B）的不同信號通道。圖（F）是（E）中方框部分的放大。（G，H）是在合并圖（F）的不同信號通道。箭頭所指的13月齡小鼠大腦多巴胺神經元胞質內可見Ub-K48泛素聚集(F,G,H)。圖（I）是含Ub-K48聚集顆粒的細胞陽性率的統(tǒng)計結果。Bar=50μm(A,E)。每個實驗重復3次，n=3。*P<0.05。Fig3.Comparedwithnormalmice,Ub-K48aggregationoccurredinthecytoplasmofdopamineneuronsinthesubstantianigraofelderlymice,andco-locatedwithTH.Theimmunofluorescenceofthesubstantianigraofthe5weekmousebrain(A)andthe13mouthmousebrain(E).Panel(B)isthehighermagnificationoftheinletin(A).(C,D)aretheindicateddifferentsignalchannelsthatmergedin(B).Panel(F)isthehighermagnificationoftheinletin(E).(G,H)aretheindicateddifferentsignalchannelsthatmergedin(F).Ub-K48ubiquitinaggregationwasobservedinthecytoplasmofthe13mouthmousebriandopamineneuronsindicatedbythearrows(F,G,H).(I)isthestatisticalresultofthepositiverateofcellscontainingUb-K48aggregates.Bar=50μm(A,E).Eachofthe


本文編號：3578962