背景泛素-蛋白酶體系統(tǒng)（ubiquitin-proteasome system,UPS）是細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)降解的主要途徑,負(fù)責(zé)降解80%以上的細(xì)胞內(nèi)錯(cuò)誤折疊蛋白或其他突變蛋白。泛素（Ubiquitin,Ub）與底物的結(jié)合稱作泛素化（ubiquitination）,是由泛素激活酶（E1）、泛素結(jié)合酶（E2）和泛素連接酶（E3）的連續(xù)作用催化泛素自身的不同位置lysine（K）和底物結(jié)合完成的。Ub-K48連接的泛素化通常將底物導(dǎo)向蛋白酶體依賴降解,而Ub-K63連接的泛素化則主要具有調(diào)節(jié)信號(hào)通路、內(nèi)吞作用和蛋白質(zhì)相互作用的功能。蛋白質(zhì)泛素化在多種神經(jīng)退行性疾病中具有重要意義。而衰老和帕金森氏病均引起泛素蛋白酶體系統(tǒng)功能異常,研究表明多巴胺能神經(jīng)元隨著衰老和帕金森氏病均出現(xiàn)丟失現(xiàn)象,其機(jī)制與泛素蛋白酶體系統(tǒng)密切相關(guān),但是Ub-K 48和Ub-K 63結(jié)合物在多巴胺能神經(jīng)元內(nèi)的表達(dá)及其與衰老的關(guān)系尚不清楚。目的本課題研究在小鼠黑質(zhì)多巴胺神經(jīng)元內(nèi)Ub-K48和Ub-K63結(jié)合物的表達(dá)情況及其與衰老的關(guān)系,旨在為防治帕金森疾病尋找新的靶點(diǎn)和思路。方法將12只5周齡C57BL6雄性小鼠和6只13月齡C... 

【文章來源】：安徽醫(yī)科大學(xué)安徽省

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

Ub-K48和Ub-K63的連接物在正常小鼠黑質(zhì)致密部分的多巴胺神經(jīng)元胞質(zhì)中密集表

安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文273.25周齡C57BL6小鼠中腦黑質(zhì)部位Ub-K48的陽性表達(dá)低于Ub-K63蛋白的陽性表達(dá)。為了解Ub-K63與Ub-K48在黑質(zhì)區(qū)域的具體分布位置，采用黑質(zhì)部位連續(xù)石蠟切片進(jìn)行免疫組化實(shí)驗(yàn)，免疫組化結(jié)果顯示，5周齡C57BL6小鼠中腦部位Ub-K63陽性率高于Ub-K48。對(duì)比TH陽性細(xì)胞的分布情況，可以推論Ub-K48和Ub-K63更集中分布在黑質(zhì)的致密部部位和腹側(cè)被蓋區(qū)。圖25周齡小鼠中腦黑質(zhì)免疫組化，Ub-K48和Ub-K63多位于SNC(黑質(zhì)致密部)和VTA(腹側(cè)被蓋區(qū))。在黑質(zhì)部位，Ub-K48陽性細(xì)胞率低于Ub-K63(H).bar=200μm(A-C),50μm(D)。每個(gè)實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，n=3。*P<0.05,**P<0.01。Fig3.TheImmunohistochemistryofthesubstantianigraofthe5weekmousebrain.Ub-K48andUb-K63aremostlylocatedinSNC(substantianigraparscompacta)andVTA(ventraltegmentalarea).ThepositiverateofUb-K48insubstantianigrawaslowerthanUb-K63(H).Bar=200μm(A-C),50μm(D-G).Eachoftheexperimentswasrepeated3times,n=3.*P<0.05，**P<0.01.

安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文283.313月齡C57BL6小鼠中腦黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元胞質(zhì)部位Ub-K48蛋白與TH有共聚集現(xiàn)象按照類似5周齡小鼠的處理方式處理13月齡的C57BL6雄性鼠，免疫熒光雙標(biāo)結(jié)果顯示出顯著區(qū)別于5周齡的現(xiàn)象。13月齡小鼠中腦的多巴胺能神經(jīng)元胞質(zhì)內(nèi)可見Ub-K48泛素聚集，與TH蛋白有共聚集現(xiàn)象。圖3與正常5周齡小鼠相比，在13月齡老年鼠黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元的細(xì)胞質(zhì)中發(fā)現(xiàn)了Ub-K48的聚集物，并與TH出現(xiàn)共聚集現(xiàn)象。5周齡小鼠黑質(zhì)（A）和13月齡小鼠黑質(zhì)的免疫熒光（E）結(jié)果圖。圖（B）是（A）中方框部分的放大。（C，D）是在合并圖（B）的不同信號(hào)通道。圖（F）是（E）中方框部分的放大。（G，H）是在合并圖（F）的不同信號(hào)通道。箭頭所指的13月齡小鼠大腦多巴胺神經(jīng)元胞質(zhì)內(nèi)可見Ub-K48泛素聚集(F,G,H)。圖（I）是含Ub-K48聚集顆粒的細(xì)胞陽性率的統(tǒng)計(jì)結(jié)果。Bar=50μm(A,E)。每個(gè)實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，n=3。*P<0.05。Fig3.Comparedwithnormalmice,Ub-K48aggregationoccurredinthecytoplasmofdopamineneuronsinthesubstantianigraofelderlymice,andco-locatedwithTH.Theimmunofluorescenceofthesubstantianigraofthe5weekmousebrain(A)andthe13mouthmousebrain(E).Panel(B)isthehighermagnificationoftheinletin(A).(C,D)aretheindicateddifferentsignalchannelsthatmergedin(B).Panel(F)isthehighermagnificationoftheinletin(E).(G,H)aretheindicateddifferentsignalchannelsthatmergedin(F).Ub-K48ubiquitinaggregationwasobservedinthecytoplasmofthe13mouthmousebriandopamineneuronsindicatedbythearrows(F,G,H).(I)isthestatisticalresultofthepositiverateofcellscontainingUb-K48aggregates.Bar=50μm(A,E).Eachofthe


本文編號(hào)：3578962