目的:1.應(yīng)用6-姜酚能上調(diào)活性氧簇的特點(diǎn),研究6-姜酚對T細(xì)胞增殖與分化的影響。2.進(jìn)一步將6-姜酚應(yīng)用于T細(xì)胞介導(dǎo)的多發(fā)性硬化癥理想模型——實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎小鼠模型的防治影響實(shí)驗(yàn),驗(yàn)證其療效。方法:1.處死C57BL/6小鼠后分離其脾臟與淋巴結(jié),用毛玻璃片研磨制成組織勻漿。使用離心機(jī)分離去除結(jié)締組織后,再使用紅細(xì)胞裂解液裂解并再次分離去除紅細(xì)胞,得到脾細(xì)胞懸液。使用T細(xì)胞分選試劑盒分選后可得到T細(xì)胞懸液在細(xì)胞培養(yǎng)板進(jìn)行培養(yǎng)與實(shí)驗(yàn),而使用CD4+T細(xì)胞分選后可得CD4+T細(xì)胞。T細(xì)胞懸液用于初步測試6-姜酚對于T細(xì)胞的增殖影響,使用流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞增殖的峰值狀態(tài)。CD4+T細(xì)胞添加不同細(xì)胞因子處理并優(yōu)化出最佳添加方案,于48孔細(xì)胞培養(yǎng)板培養(yǎng)可分別獲得調(diào)節(jié)性T細(xì)胞等。將6-姜酚應(yīng)用于上述細(xì)胞因子處理培養(yǎng)過程,使用流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞增殖峰值與細(xì)胞分化數(shù)量,了解并分析其對T細(xì)胞的增殖與分化過程的影響。2.髓鞘少突膠質(zhì)細(xì)胞糖蛋白MOG35-55多肽、百日咳毒素與結(jié)核分枝桿菌聯(lián)合使用構(gòu)建小鼠實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎模型,將C57BL/6小鼠麻醉后進(jìn)行注射。百日咳毒素于構(gòu)建時(shí)與構(gòu)建48... 

【文章來源】：南華大學(xué)湖南省

【文章頁數(shù)】：95 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

不同濃度CFSE染色效果（A為0.2uM,B為0.5uM），X軸為CFSE熒光強(qiáng)度，Y軸為細(xì)胞數(shù)量Figure2.1CFSEstainingeffectofdifferentdoses(A:0.2uM,B:0.5uM)

9圖2.2不同濃度CFSE染色效果（A為0.1uM,B為1.0uM），X軸為CFSE熒光強(qiáng)度，Y軸為細(xì)胞數(shù)量Figure2.2CFSEstainingeffectofdifferentdoses(A:0.1uM,B:1.0uM)經(jīng)過重復(fù)數(shù)次實(shí)驗(yàn)后最終選定0.5μM濃度CFSE染色時(shí)效果最佳，因此摒棄0.2μMCFSE染色濃度，將0.5μM染色濃度確立為最佳染色濃度應(yīng)用于后繼實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞增殖狀態(tài)時(shí)使用。2.3.2T細(xì)胞與CD4+T細(xì)胞CFSE增殖染色結(jié)果將脾細(xì)胞CFSE染色實(shí)驗(yàn)優(yōu)化出的染色濃度0.5μM應(yīng)用于T細(xì)胞增殖染色實(shí)驗(yàn)后,得到增殖結(jié)果如下。左側(cè)為增值情況的流式散點(diǎn)圖結(jié)果，右側(cè)則為流式柱狀圖結(jié)果。圖2.30.5uMCFSE對脾細(xì)胞染色效果，X軸為CFSE熒光強(qiáng)度Y軸為細(xì)胞數(shù)量Figure2.3CFSEstainingeffectof0.5uMonspleencellsAB

9圖2.2不同濃度CFSE染色效果（A為0.1uM,B為1.0uM），X軸為CFSE熒光強(qiáng)度，Y軸為細(xì)胞數(shù)量Figure2.2CFSEstainingeffectofdifferentdoses(A:0.1uM,B:1.0uM)經(jīng)過重復(fù)數(shù)次實(shí)驗(yàn)后最終選定0.5μM濃度CFSE染色時(shí)效果最佳，因此摒棄0.2μMCFSE染色濃度，將0.5μM染色濃度確立為最佳染色濃度應(yīng)用于后繼實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞增殖狀態(tài)時(shí)使用。2.3.2T細(xì)胞與CD4+T細(xì)胞CFSE增殖染色結(jié)果將脾細(xì)胞CFSE染色實(shí)驗(yàn)優(yōu)化出的染色濃度0.5μM應(yīng)用于T細(xì)胞增殖染色實(shí)驗(yàn)后,得到增殖結(jié)果如下。左側(cè)為增值情況的流式散點(diǎn)圖結(jié)果，右側(cè)則為流式柱狀圖結(jié)果。圖2.30.5uMCFSE對脾細(xì)胞染色效果，X軸為CFSE熒光強(qiáng)度Y軸為細(xì)胞數(shù)量Figure2.3CFSEstainingeffectof0.5uMonspleencellsAB


本文編號：3573809