目的觀察內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激（Endoplasmic ReticulumStress,ERS）對自身免疫性腦炎（Autoimmune Encephalitis,AE）病人T淋巴細(xì)胞存活和凋亡的影響以及未折疊蛋白反應(yīng)（Unfolded Protein Response,UPR）信號通路在AE淋巴細(xì)胞存活和死亡中的作用。方法本研究在2017年2月至2019年2月選取石家莊市第一醫(yī)院兒科AE病人和健康供者外周血樣本進(jìn)行研究,并用不同濃度的毒胡蘿卜素（Thapsigargin,TG）（濃度為0、0.5、1、5、10 nM）分別處理AE病人和健康供者的T淋巴細(xì)胞48 h,然后利用八肽膽囊收縮素（cholecystokinin octapeptide,CCK-8）實驗方法檢測細(xì)胞存活能力;用TG（濃度為5 nM）分別處理AE病人和健康供者的T淋巴細(xì)胞48 h,流式細(xì)胞儀檢測TG未處理以及TG處理的T淋巴細(xì)胞的細(xì)胞凋亡情況;TG（濃度為5 n M）刺激AE病人和健康供者的T淋巴細(xì)胞48 h,蛋白質(zhì)印跡法（Western blot）檢測UPR標(biāo)志分子免疫球蛋白結(jié)合蛋白（BIP）和同源蛋白（CHOP）的蛋白表達(dá)水... 

【文章來源】：安徽醫(yī)藥. 2020,24(10)

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【部分圖文】：

TG誘導(dǎo)可促進(jìn)自身免疫性腦炎（AE）病人的T淋巴細(xì)胞凋亡

將AE病人外周血淋巴細(xì)胞（PBMCs）和健康供體中分離的T淋巴細(xì)胞，分別用TG(5 n M）處理這兩種細(xì)胞，48h后收集細(xì)胞并提取蛋白。蛋白質(zhì)印跡法檢測UPR標(biāo)志分子BIP(UPR的中心調(diào)節(jié)因子）和CHOP（抑制Bcl-2基因啟動子）的蛋白表達(dá)水平，實驗結(jié)果（圖2）顯示：與健康供體UPR標(biāo)志分子BIP和CHOP的蛋白表達(dá)水平（0.50±0.05、0.53±0.06）%相比，AE病人外周血T淋巴細(xì)胞BIP(0.23±0.04）%的表達(dá)降低，而CHOP(0.81±0.07）%的表達(dá)顯著升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=10.329、7.439,P<0.01）。以上結(jié)果提示，BIP和CHOP可能介導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)的外周血T淋巴細(xì)胞凋亡。2.4 TG誘導(dǎo)后T淋巴細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡受抗凋亡和促凋亡信號調(diào)控，包括Bcl-2、Bcl-XL、Bax。分別用TG(5n M）處理從AE病人外周血淋巴細(xì)胞（PBMCs）和健康供體中分離T淋巴細(xì)胞，48 h后收集細(xì)胞并提取蛋白。蛋白質(zhì)印跡法檢測凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、Bcl-XL和Bax的表達(dá)水平，實驗結(jié)果（圖3）顯示：與健康供體凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、Bcl-XL和Bax的表達(dá)水平[（1.41±0.04）%、（1.23±0.06）%、（0.51±0.01）%]相比，AE病人的T細(xì)胞中抗凋亡蛋白Bcl-2(0.73±0.07）%和Bcl-XL(0.51±0.05）%表達(dá)水平降低，而促凋亡蛋白Bax(1.25±0.05）%表達(dá)增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=35.548、20.660、22.581,P<0.01）。以上結(jié)果表明BIP和CHOP可能通過抗凋亡信號和促凋亡信號介導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)的外周血T淋巴細(xì)胞凋亡。3 討論


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