目的:研究脊髓M1/M2小膠質(zhì)細(xì)胞極化是否參與大鼠SNI外周神經(jīng)損傷所致神經(jīng)病理性疼痛以及相關(guān)調(diào)控機(jī)制,從而進(jìn)一步探討神經(jīng)炎癥對神經(jīng)病理性疼痛的作用及其作用機(jī)制,為治療神經(jīng)病理性疼痛提供理論依據(jù)。方法:將大鼠隨機(jī)分為空白組（Blank組）、假手術(shù)組（Sham組）、SNI模型組（SNI組）。構(gòu)建大鼠SNI坐骨神經(jīng)分支選擇性損傷神經(jīng)病理性疼痛模型,在造模成功后1d、3d、7d、14d、21d,運(yùn)用Von Frey纖維絲測試儀檢測大鼠機(jī)械痛域的改變;運(yùn)用免疫熒光及Western blot觀察SNI模型神經(jīng)病理性疼痛大鼠脊髓背角小膠質(zhì)細(xì)胞活化聚集情況;運(yùn)用免疫熒光觀察SNI模型神經(jīng)病理性疼痛大鼠脊髓背角M1、M2型小膠質(zhì)細(xì)胞兩種極化狀態(tài)表達(dá)情況;運(yùn)用Western blot檢測神經(jīng)病理性疼痛大鼠脊髓中促炎因子（TNF-α、IL-1β）以及抗炎因子（IL-10）表達(dá)水平。結(jié)果:大鼠SNI神經(jīng)病理性疼痛模型建造成功。大鼠機(jī)械痛域檢測結(jié)果顯示:與sham組相比,SNI組大鼠術(shù)后1d、3d、7d、14d、21d機(jī)械痛閾降低（P<0.05）。其中,大鼠SNI術(shù)后14d痛域降至最低;大鼠SNI神經(jīng)損... 

【文章來源】：濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院山東省

【文章頁數(shù)】：56 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

大鼠SNI神經(jīng)病理性疼痛模型建造

圖 2：大鼠機(jī)械痛域測定印跡 （Western Blotting）檢測各時相點(diǎn)測定 MWT 后處死大鼠，快速分離 織勻漿后，采用 BCA 法進(jìn)行蛋白定量, 測定經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳，轉(zhuǎn)至聚偏二氟乙烯清白蛋白室溫封閉 2h，加入一抗（Arg-1: 1:50Abcam、CD206: 1:500，Abcam、IBA-1: 1:80Abcam、TNF-a: 1:300，Abcam、IL-4: 1:300bcam），4℃孵育過夜，1×TBST 洗滌三次，每酶標(biāo)二抗（1：1000）室溫孵育 1 h, TBST

圖 3：大鼠多聚甲醛灌注取材 (immunofluorescence, IF) 染色ham 組和 SNI14d 組大鼠脊髓冰凍切片中隨機(jī)染色。冰凍切片置于室溫干燥, PBS (0.01M, 10 min，冷卻至室溫,依次加入含有 0.3％T清室溫封閉 1h；加入一抗（CD86, 1:500,AbcIba-1, 1:100,Abcam）,4℃孵育過夜；PBS 洗(Alexa Fluor 488，1：1000，Abcam )室溫孵，每次 10 min；含有 DAPI 的抗熒光衰減劑(Zeiss,德國)觀察。每張脊髓切片任選5個不重

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]傳統(tǒng)觀念的轉(zhuǎn)變:極化的小膠質(zhì)細(xì)胞/巨噬細(xì)胞在中樞神經(jīng)系統(tǒng)修復(fù)中的雙重作用[J]. 楊儉,冉媛媛,張妍,杜會山,劉宗建,吉訓(xùn)明,胡曉明.  生命科學(xué)儀器. 2015(06)
[2]替米沙坦改善小膠質(zhì)細(xì)胞炎癥與其促進(jìn)激活表型轉(zhuǎn)化有關(guān)[J]. 劉越,王立寬,孫德佳,王勃,李錦.  國際藥學(xué)研究雜志. 2014(03)
[3]神經(jīng)病理性疼痛診療專家共識[J]. 神經(jīng)病理性疼痛診療專家組.  中國疼痛醫(yī)學(xué)雜志. 2013(12)
[4]Role of inflammatory cytokines in peripheral nerve injury[J]. Federica Fregnan,Luisa Muratori,Anabel Rodriguez Simǒes,Maria Giuseppina Giacobini-Robecchi,Stefania Raimondo.  Neural Regeneration Research. 2012(29)
[5]小膠質(zhì)細(xì)胞活化與神經(jīng)病理性疼痛[J]. 楊美蓉,杜冬萍.  中國疼痛醫(yī)學(xué)雜志. 2009(02)

博士論文
[1]ATP調(diào)控小膠質(zhì)細(xì)胞極化狀態(tài)進(jìn)而參與神經(jīng)病理性疼痛的研究[D]. 張昕.上海交通大學(xué) 2015



本文編號：3568735