缺血性卒中是全球致死率和致殘率最高的三大疾病之一。炎癥反應貫穿于缺血性卒中的整個病理過程，是影響卒中預后的主要因素之一。小膠質細胞是中樞神經系統(tǒng)中固有免疫細胞，缺血性卒中發(fā)生后，小膠質細胞隨即被激活。過度活化小膠質細胞具有神經毒性，在缺血性卒中后炎癥反應中發(fā)揮重要作用。調控小膠質細胞激活后產生的炎癥反應是目前具有前景的卒中治療新靶標。羥基紅花黃色素A（hydroxysafflor yellow A, HSYA）是紅花黃色素的主要成分，前期研究發(fā)現(xiàn)它可以通過抑制炎癥反應進而減少缺血性卒中實驗模型的腦損傷，然而，HSYA對卒中后小膠質細胞的直接作用尚不明確。目的：本研究意旨在氧糖剝奪（oxygen-glucose deprivation, OGD）模型中證實HSYA是否具有細胞保護與炎癥抑制作用，并探討其可能機制，為缺血性卒中的治療策略提供新思路。方法：制備OGD模型；MTT法、LDH法及流式細胞術評估細胞活力或細胞凋亡率；RT-PCR檢測炎癥因子（IL-1β、TNF-α、iNOS、COX-2和MCP-1）mRNA表達水平；western blot檢測NF-κB和MAPK通路的活性。結果：... 

【文章來源】：南京醫(yī)科大學江蘇省

【文章頁數】：70 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

實驗設計圖

HSYA 減輕 OGD 所致的 BV2 細胞損傷.1 HSYA 對 BV2 細胞安全性檢測為明確 HSYA 對細胞活力的影響，同時檢測藥物的安全性，我們利用 BV2 細胞處理前后的細胞活力進行評估。測得 CON 組細胞活0±4.8%。之后，分別以 HSYA20μM、40μM、80μM、160μM、320μM、6280μM處理BV2細胞，12h后，測得細胞活力分別為104.4±4.5%、100.0±±4.9%、100.1±3.8%、99.6±10.8%、105.4±6.0%、91.0±4.8%。所有數據ON 組比較后的標準化百分數。如圖 2 所示，各組數據統(tǒng)計后無顯著0.05。本組數據表明，經不同濃度 HSYA 處理后，BV2 細胞在實驗所均具有安全性，可根據后續(xù)實驗需要，選擇適當濃度。

測得其細胞活力為 37.0±1.6%，即 OGD 處理后 BV2 細胞 組相比下降（*p < 0.05）。SYA 能夠提高 OGD 后 BV2 細胞的細胞活性。我們利用 MTT 法 作用于 BV2 細胞是否具有劑量依賴性，進一步選擇最佳反應濃度OGD處理后立即加入不同劑量的HSYA（即20μM、40μM、80μM、1M、640μM 和 1280μM），孵育 12h 后，利用 MTT 試驗檢測 BV2 細，具體如下，40μM：49.7±1.3%，80μM：54.1±3.9%，160μM：62.0±3M：57.5±4.4%，640μM：59.6±2.7%，1280μM：49.0±3.8%，相較 O加（#p < 0.05，圖 3）；需要注意的是，HSYA 用量為 20μM 時， 43.3±2.6%，與 OGD 組相比較未表現(xiàn)明顯差異(#p>0.05)。本組研HSYA 的細胞保護作用具有嚴格的劑量依賴性。研究發(fā)現(xiàn)，加入 后細胞活力處于高峰值，我們選擇該劑量應用于后續(xù)研究中。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]羥基紅花黃色素A對腦缺血-再灌注大鼠腦組織細胞間黏附分子1表達的影響[J]. 李芳君.  中藥材. 2012(07)
[2]紅花及其主要成分的藥理作用研究進展[J]. 陳夢,趙丕文,孫艷玲,孫麗萍.  環(huán)球中醫(yī)藥. 2012(07)
[3]脂多糖對BV-2細胞的形態(tài)及腫瘤壞死因子-α表達的影響[J]. 黃紅偉,沈偉.  臨床神經病學雜志. 2011(05)
[4]紅花黃素對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷的保護作用[J]. 張慶,鄭冬雁,徐紅巖,潘燕,魏蜀一.  山東大學學報(醫(yī)學版). 2011(06)
[5]脂多糖誘導肝細胞HMGB1釋放及其信號通路研究[J]. 陳國千,邵耀明,王春新,吳國榮,徐明.  中國實驗診斷學. 2009(11)
[6]天麻素對高糖誘導的神經小膠質細胞IL-1β,IL-6表達的影響[J]. 杜曉紅,毛瑞陽,劉毅,李穎,單亦升.  中國中藥雜志. 2009(12)
[7]羥基紅花黃色素A對腦缺血大鼠皮層炎癥信號轉導途徑相關因子的抑制作用[J]. 陳亭亭,杜玉娟,劉曉雷,朱海波.  藥學學報. 2008(06)
[8]絲裂原激活的蛋白激酶（MAPK）信號轉導通路與卵巢上皮癌[J]. 吳冬,歐俊,惠寧.  腫瘤. 2007(08)
[9]羥基紅花黃色素A對局灶性腦缺血后大鼠腦組織誘導型一氧化氮合酶的影響[J]. 盛雨辰,夏玉葉,閔旸.  中國藥理學通報. 2006(09)
[10]羥基紅花黃色素A對大鼠局灶性腦缺血再灌注NMDAR1蛋白表達的影響[J]. 梁輝,范金英,李愛華,周盛年,李強,朱海波.  中華老年心腦血管病雜志. 2004(03)



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