目的:觀察雙孔鉀通道TREK-1過表達(dá)及脈絡(luò)寧注射液對氧糖剝奪星型膠質(zhì)細(xì)胞（astrocyte,Ast）存活率和谷氨酸（Glu）攝取能力的影響,探討TREK-1在Glu興奮性毒性中的調(diào)節(jié)作用。方法:原代培養(yǎng)大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞,運(yùn)用DNA質(zhì)粒轉(zhuǎn)染法構(gòu)建星形膠質(zhì)細(xì)胞TREK-1過表達(dá)模型,采用細(xì)胞氧糖剝奪（Oxygen Glucose Deprivation,OGD）模型,模擬體內(nèi)腦缺血環(huán)境,實(shí)驗(yàn)分為對照組、TREK-1過表達(dá)組、脈絡(luò)寧注射液組,分別于氧糖剝奪2h、4h、6h、8h后,MTT法檢測細(xì)胞增殖率;FITC/Propidium Iodide雙染色法和Hoechast 33258染色法檢測細(xì)胞凋亡;Glu檢測試劑盒法檢測細(xì)胞攝取率;RT-PCR法檢測Glu特異性轉(zhuǎn)運(yùn)體GLT-1、嘌呤能受體P2X7、谷氨酰胺合酶（GS）、凋亡信號因子Caspase-3和TREK-1通道的表達(dá)變化。結(jié)果:1.運(yùn)用大鼠TREK-1 DNA重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染星形膠質(zhì)細(xì)胞,TREK-1過表達(dá)模型構(gòu)建成功;2.在生理?xiàng)l件下,TREK-1過表達(dá)及脈絡(luò)寧液對星形膠質(zhì)細(xì)胞活性無明顯影響,而在氧糖剝奪后,TREK-1過表達(dá)及... 

【文章來源】：蘭州大學(xué)甘肅省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：52 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
前言
第一章 實(shí)驗(yàn)部分
    1 材料
        1.1 動(dòng)物
        1.2 主要儀器
        1.3 主要試劑
        1.4 主要試劑配制
    2 方法
        2.1 星形膠質(zhì)細(xì)胞的提取
        2.2 星形膠質(zhì)細(xì)胞傳代
        2.3 TREK-1 過表達(dá)模型建立
        2.4 GFAP/TREK-1+DAPI免疫熒光雙標(biāo)記染色
        2.5 OGD模型的建立
        2.6 分組
        2.7 不同OGD時(shí)間星形膠質(zhì)細(xì)胞抑制率的檢測
        2.8 FITC/Propidium Iodide雙染色法檢測細(xì)胞凋亡率
        2.9 Hoechst33258檢測細(xì)胞凋亡形態(tài)
        2.10 谷氨酸攝取能力檢測
        2.11 Real-time PCR 檢測 TREK-1、GS、GLT-1、P2X7、Caspase-3 表達(dá)量
        2.12 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
    3 結(jié)果
        3.1 星形膠質(zhì)細(xì)胞原代培養(yǎng)
        3.2 GFAP/TREK-1+DAPI免疫熒光雙標(biāo)記染色
        3.3 星形膠質(zhì)細(xì)胞抑制率檢測
        3.4 FITC/Propidium Iodide雙染色法檢測細(xì)胞凋亡率
        3.5 Hoechst33258染色法檢測凋亡細(xì)胞形態(tài)
        3.6 谷氨酸攝取率
        3.7 Real-time PCR 法檢測星形膠質(zhì)細(xì)胞 GS，GLT-1 mRNA 相對表達(dá)量
        3.8 Real-time PCR 法檢測星形膠質(zhì)細(xì)胞 P2X7、Caspase-3 mRNA 相對表達(dá)量
        3.9 Real-time PCR 法檢測星形膠質(zhì)細(xì)胞 TREK-1 mRNA 相對表達(dá)量
    4 討論
        4.1 TREK-1 過表達(dá)模型的可靠性分析
        4.2 TREK-1 對星形膠質(zhì)細(xì)胞存活率的影響
        4.3 TREK-1 對星形膠質(zhì)細(xì)胞谷氨酸攝取能力的影響
        4.4 脈絡(luò)寧注射液治療缺血缺氧性腦病中的作用及其作用機(jī)制
        4.5 TREK-1 的在腦缺血中的可能作用機(jī)制，及脈絡(luò)寧注射液治療腦缺血的作用機(jī)制與TREK-1 的關(guān)系
第二章 結(jié)論
    1 結(jié)論
    2 不足和展望
文獻(xiàn)綜述：雙孔鉀通道TREK-1 相關(guān)疾病的研究進(jìn)展
    1 TREK-1 的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)
    2 TREK-1 的分布
    3 TREK-1 的調(diào)控
    4 TREK-1 與神經(jīng)系統(tǒng)相關(guān)疾病及機(jī)制
        4.1 TREK-1 與缺血性腦病
        4.2 TREK-1 與癲癇
        4.3 TREK-1 與抑郁癥
        4.4 TREK-1 與麻醉、疼痛
    5 TREK-1 與心血管系統(tǒng)疾病
    6 TREK-1 與肺部疾病
    7 TREK-1 與婦科疾病
    8 TREK-1 與腫瘤
    9 TREK-1 與其他相關(guān)疾病
    10 結(jié)語與展望
參考文獻(xiàn)
在學(xué)期間的研究成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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[2]雙孔鉀通道TREK-1的表達(dá)與調(diào)控對腦缺血損傷時(shí)星形膠質(zhì)細(xì)胞功能和神經(jīng)元損傷的影響及機(jī)制研究[D]. 吳瀟.華中科技大學(xué) 2012



本文編號：3560842