干細胞（stem cells）是一類具有自我更新和多分化潛能的細胞。根據(jù)其來源可分為胚胎干細胞（embryonic stem cells, ES cells）和成體干細胞（adult stem cells）。胚胎干細胞是由早期囊胚的內(nèi)細胞團或原始生殖細胞中分離獲得的具有多潛能性特征的細胞。胚胎干細胞在適合的條件下能夠分化為機體的內(nèi)、中、外三個胚層來源的所有組織細胞,其研究不僅在認識細胞分化、胚胎發(fā)育機理具有重要作用,而且對基因功能研究、轉(zhuǎn)基因動物制備、克隆動物、建立動物和人類疾病模型、藥物的開發(fā)與篩選、腫瘤發(fā)生發(fā)展機制和治療方法探討、細胞組織和器官的修復(fù)和移植治療等方面研究有著極其重要的價值。人胚胎干細胞系（human embryonic stem cell lines, hES cells）最早于1998年由Thomoson JA等人成功建立,該成果被評為“1999年世界十大科技進展之首”,此后十余年來,干細胞領(lǐng)域出現(xiàn)了很多令人振奮的研究成果,由此掀起了世界范圍的干細胞研究熱潮。至今,胚胎干細胞及各種成體干細胞的研究是目前生物學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的熱點和前沿。人類胚胎干細胞具備有自我更新及多... 

【文章來源】：中南大學(xué)湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：151 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮寫詞簡表
前言
技術(shù)路線圖
    人類胚胎干細胞培養(yǎng)及HESRG在hES細胞中表達
    利用Si-RNA干擾技術(shù)研究HESRG在hES細胞中的功能
    WNT信號通路與HESRG
    HESRG在顱內(nèi)生殖細胞類腫瘤中的表達
第一章 人胚胎干細胞培養(yǎng)鑒定以及HESRG的表達
    第一節(jié) 材料與方法
        1. 實驗材料與試劑
        2. 方法
    第二節(jié) 結(jié)果
        1. 人類胚胎干細胞培養(yǎng)
        2. 人胚胎干細胞未分化標志物染色
        3. RT-PCR、Real-time PCR檢測HESRG在人胚胎干細胞中的表達
        4. 間接免疫熒光檢測HESRG在人胚胎干細胞及小鼠胚胎干細胞中的表達
        5. RT-PCR、Real-time PCR檢測HESRG在自發(fā)分化的人胚胎干細胞中的表達
        6. 間接免疫熒光檢測HESRG在自發(fā)分化的人胚胎干細胞中的表達
    第三節(jié) 討論
        實驗研究的胚胎干細胞細胞模型的特征
        人胚胎干細胞H1及H9系
        人胚胎干細胞培養(yǎng)過程中的提醒
        hES細胞細胞狀態(tài)惡化的評價
        MEF飼養(yǎng)層細胞制備過程的注意事項
        hES細胞傳代時機的選擇
        人胚胎干細胞自我復(fù)制及亞全能性維持的分子機制
        人胚胎干細胞相關(guān)基因HESRG
        HESRG在人胚胎干細胞中的表達
    第四節(jié) 結(jié)論
    參考文獻
第二章 利用化學(xué)合成的siRNA干擾技術(shù)研究HESRG在人胚胎干細胞中的功能
    第一節(jié) 材料和方法
        1. 實驗材料與試劑
        2. 方法
    第二節(jié) 結(jié)果
        1. Si-HESRG特異性干擾HESRG的干擾效率
        2. HESRG表達下調(diào)后hES細胞的形態(tài)學(xué)改變
        3. Real-time PCR檢測HESRG下調(diào)后48小時神經(jīng)分化標志物的表達
        4. 免疫熒光檢測HESRG下調(diào)后48小時神經(jīng)分化標志物的表達
        5. 免疫熒光檢測HESRG下調(diào)后12天神經(jīng)分化標志物的表達
    第三節(jié) 討論與分析
        HERSG參與hES細胞的自我更新和亞全能性維持
        HESRG抑制hES細胞神經(jīng)分化
        HESRG通過抑制hES細胞的神經(jīng)譜系分化維持hES細胞的自我更新及多潛能性
        HESRG參與ES細胞自我更新及亞全能性維持的分子機制模型
        BMP途徑可能通過HESRG對hES細胞的神經(jīng)分化產(chǎn)生影響
    第四節(jié) 結(jié)論
    參考文獻
第三章 WNT信號通路對HESRG的調(diào)控研究
    第一節(jié) 材料與方法
        1. 實驗材料與試劑
        2. 方法
    第二節(jié) 結(jié)果
        1. HESRG轉(zhuǎn)錄起始位點上游2000bp序列WNT信號通路轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點的生物信息學(xué)預(yù)測
        2. GSK-3特異性競爭性抑制劑BIO維持hES細胞未分化狀態(tài)及HESRG的高表達
        3. 熒光素酶報告質(zhì)粒pGL3-basic-HESRG upstream 2061bp的載體構(gòu)建過程
        4. 轉(zhuǎn)染pGL3-basic-HESRG upstream 2061bp于hES細胞測定HESRG啟動子區(qū)域活性
        5. BIO激活WNT信號通路維持HESRG啟動子區(qū)域活性
        6. TCF家族在hES細胞中的表達豐度
        7. si-RNA干擾TCF-3的特異性靶位選擇
        8. 特異性干擾TCF-3維持HESRG的高表達水平
        9. 共轉(zhuǎn)染熒光素酶報告質(zhì)粒pGL3-basic-HESRG upstream 2061bp及Si-TCF-3-1050
        10. 核染色質(zhì)免疫共沉淀(CHIP)確定TCF-3與HESRG基因啟動子區(qū)域的結(jié)合
    第三節(jié) 討論
        TESS預(yù)測WNT信號通路對HESRG的調(diào)節(jié)作用
        經(jīng)典WNT信號通路
        GSK-3特異性抑制劑BIO激活WNT信號通路并維持HESRG在hES細胞中的表達
        WNT信號通路通過作用于HESRG啟動子區(qū)域發(fā)揮維持HESRG的作用
        利用焚光素酶報告載體質(zhì)粒檢測WNT信號通路對HESRG啟動子區(qū)域的調(diào)控
        WNT信號通路對HESRG的調(diào)控通過作用于HESRG啟動子區(qū)域的TCF蛋白產(chǎn)生
        核染色質(zhì)免疫共沉淀法提供WNT信號通路對HESRG直接調(diào)控的證據(jù)
        HESRG參與的信號通路
    第四節(jié) 結(jié)論
    參考文獻
第四章 HESRG在顱內(nèi)腫瘤中的表達研究
    第一節(jié) 材料與方法
        1. 組織標本
        2. 組織切片
        3. hES細胞培養(yǎng)
        4. RT-PCR and Real-time PCR
        5. 免疫組織化學(xué)及免疫細胞化學(xué)
    第二節(jié) 結(jié)果
        1. RT-PCR檢測HESRG在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的表達分布情況
        2. Real-time PCR檢測HESRG在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的表達分布情況
        3. HESRG蛋白在中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤中的表達
    第三節(jié) 討論
    第四節(jié) 結(jié)論
    參考文獻
綜述
    參考文獻
致謝



本文編號：3553340