干細胞（stem cells）是一類具有自我更新和多分化潛能的細胞。根據其來源可分為胚胎干細胞（embryonic stem cells, ES cells）和成體干細胞（adult stem cells）。胚胎干細胞是由早期囊胚的內細胞團或原始生殖細胞中分離獲得的具有多潛能性特征的細胞。胚胎干細胞在適合的條件下能夠分化為機體的內、中、外三個胚層來源的所有組織細胞,其研究不僅在認識細胞分化、胚胎發(fā)育機理具有重要作用,而且對基因功能研究、轉基因動物制備、克隆動物、建立動物和人類疾病模型、藥物的開發(fā)與篩選、腫瘤發(fā)生發(fā)展機制和治療方法探討、細胞組織和器官的修復和移植治療等方面研究有著極其重要的價值。人胚胎干細胞系（human embryonic stem cell lines, hES cells）最早于1998年由Thomoson JA等人成功建立,該成果被評為“1999年世界十大科技進展之首”,此后十余年來,干細胞領域出現了很多令人振奮的研究成果,由此掀起了世界范圍的干細胞研究熱潮。至今,胚胎干細胞及各種成體干細胞的研究是目前生物學和醫(yī)學領域的熱點和前沿。人類胚胎干細胞具備有自我更新及多... 

【文章來源】：中南大學湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數】：151 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮寫詞簡表
前言
技術路線圖
    人類胚胎干細胞培養(yǎng)及HESRG在hES細胞中表達
    利用Si-RNA干擾技術研究HESRG在hES細胞中的功能
    WNT信號通路與HESRG
    HESRG在顱內生殖細胞類腫瘤中的表達
第一章 人胚胎干細胞培養(yǎng)鑒定以及HESRG的表達
    第一節(jié) 材料與方法
        1. 實驗材料與試劑
        2. 方法
    第二節(jié) 結果
        1. 人類胚胎干細胞培養(yǎng)
        2. 人胚胎干細胞未分化標志物染色
        3. RT-PCR、Real-time PCR檢測HESRG在人胚胎干細胞中的表達
        4. 間接免疫熒光檢測HESRG在人胚胎干細胞及小鼠胚胎干細胞中的表達
        5. RT-PCR、Real-time PCR檢測HESRG在自發(fā)分化的人胚胎干細胞中的表達
        6. 間接免疫熒光檢測HESRG在自發(fā)分化的人胚胎干細胞中的表達
    第三節(jié) 討論
        實驗研究的胚胎干細胞細胞模型的特征
        人胚胎干細胞H1及H9系
        人胚胎干細胞培養(yǎng)過程中的提醒
        hES細胞細胞狀態(tài)惡化的評價
        MEF飼養(yǎng)層細胞制備過程的注意事項
        hES細胞傳代時機的選擇
        人胚胎干細胞自我復制及亞全能性維持的分子機制
        人胚胎干細胞相關基因HESRG
        HESRG在人胚胎干細胞中的表達
    第四節(jié) 結論
    參考文獻
第二章 利用化學合成的siRNA干擾技術研究HESRG在人胚胎干細胞中的功能
    第一節(jié) 材料和方法
        1. 實驗材料與試劑
        2. 方法
    第二節(jié) 結果
        1. Si-HESRG特異性干擾HESRG的干擾效率
        2. HESRG表達下調后hES細胞的形態(tài)學改變
        3. Real-time PCR檢測HESRG下調后48小時神經分化標志物的表達
        4. 免疫熒光檢測HESRG下調后48小時神經分化標志物的表達
        5. 免疫熒光檢測HESRG下調后12天神經分化標志物的表達
    第三節(jié) 討論與分析
        HERSG參與hES細胞的自我更新和亞全能性維持
        HESRG抑制hES細胞神經分化
        HESRG通過抑制hES細胞的神經譜系分化維持hES細胞的自我更新及多潛能性
        HESRG參與ES細胞自我更新及亞全能性維持的分子機制模型
        BMP途徑可能通過HESRG對hES細胞的神經分化產生影響
    第四節(jié) 結論
    參考文獻
第三章 WNT信號通路對HESRG的調控研究
    第一節(jié) 材料與方法
        1. 實驗材料與試劑
        2. 方法
    第二節(jié) 結果
        1. HESRG轉錄起始位點上游2000bp序列WNT信號通路轉錄因子結合位點的生物信息學預測
        2. GSK-3特異性競爭性抑制劑BIO維持hES細胞未分化狀態(tài)及HESRG的高表達
        3. 熒光素酶報告質粒pGL3-basic-HESRG upstream 2061bp的載體構建過程
        4. 轉染pGL3-basic-HESRG upstream 2061bp于hES細胞測定HESRG啟動子區(qū)域活性
        5. BIO激活WNT信號通路維持HESRG啟動子區(qū)域活性
        6. TCF家族在hES細胞中的表達豐度
        7. si-RNA干擾TCF-3的特異性靶位選擇
        8. 特異性干擾TCF-3維持HESRG的高表達水平
        9. 共轉染熒光素酶報告質粒pGL3-basic-HESRG upstream 2061bp及Si-TCF-3-1050
        10. 核染色質免疫共沉淀(CHIP)確定TCF-3與HESRG基因啟動子區(qū)域的結合
    第三節(jié) 討論
        TESS預測WNT信號通路對HESRG的調節(jié)作用
        經典WNT信號通路
        GSK-3特異性抑制劑BIO激活WNT信號通路并維持HESRG在hES細胞中的表達
        WNT信號通路通過作用于HESRG啟動子區(qū)域發(fā)揮維持HESRG的作用
        利用焚光素酶報告載體質粒檢測WNT信號通路對HESRG啟動子區(qū)域的調控
        WNT信號通路對HESRG的調控通過作用于HESRG啟動子區(qū)域的TCF蛋白產生
        核染色質免疫共沉淀法提供WNT信號通路對HESRG直接調控的證據
        HESRG參與的信號通路
    第四節(jié) 結論
    參考文獻
第四章 HESRG在顱內腫瘤中的表達研究
    第一節(jié) 材料與方法
        1. 組織標本
        2. 組織切片
        3. hES細胞培養(yǎng)
        4. RT-PCR and Real-time PCR
        5. 免疫組織化學及免疫細胞化學
    第二節(jié) 結果
        1. RT-PCR檢測HESRG在中樞神經系統(tǒng)中的表達分布情況
        2. Real-time PCR檢測HESRG在中樞神經系統(tǒng)中的表達分布情況
        3. HESRG蛋白在中樞神經系統(tǒng)腫瘤中的表達
    第三節(jié) 討論
    第四節(jié) 結論
    參考文獻
綜述
    參考文獻
致謝



本文編號：3553340