研究表明,雌激素參與缺血性腦卒中的神經(jīng)保護(hù)作用。雌激素主要與雌激素受體結(jié)合,通過(guò)基因組模式或非基因組模式發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)。新近發(fā)現(xiàn)的ER-a36是ER-a一個(gè)亞型,它廣泛表達(dá)在乳腺、卵巢、肝、骨等細(xì)胞和組織中,并可介導(dǎo)膜起始的雌激素信號(hào)通路。本室前期研究發(fā)現(xiàn),ER-a36也廣泛表達(dá)在腦內(nèi)多個(gè)區(qū)域,但作用尚不明確。 本實(shí)驗(yàn)利用RNA干擾技術(shù)建立的ER-a36基因敲低細(xì)胞系,通過(guò)免疫細(xì)胞化學(xué)、免疫細(xì)胞熒光、MTT、Hoechst染色、熒光素酶分析、Western blot等方法,探討了ER-α36在PC12細(xì)胞血清營(yíng)養(yǎng)剝奪耐受性中的作用,為臨床預(yù)防和治療缺血性腦卒中提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 結(jié)果： 1.原代培養(yǎng)不同時(shí)間的皮層和海馬神經(jīng)元中均有ER-α36表達(dá),且主要分布在胞漿和胞膜上,并與Caveolin-1共定位。原代培養(yǎng)的皮層神經(jīng)元和海馬神經(jīng)元純度較高,NSE免疫陽(yáng)性率均達(dá)到97%。 2.PC12細(xì)胞對(duì)血清營(yíng)養(yǎng)剝奪的耐受具有明顯的時(shí)間和血清濃度依賴性。細(xì)胞在含2.5%血清的無(wú)酚紅培養(yǎng)基中生長(zhǎng)速度減慢,其存活率與正常培養(yǎng)PC12細(xì)胞相比顯著降低,以此可建立血清營(yíng)養(yǎng)剝奪細(xì)胞模型；此外,細(xì)胞在血清剝奪(...

【文章來(lái)源】： 遼寧師范大學(xué)遼寧省

【文章頁(yè)數(shù)】：61 頁(yè)

【文章目錄】：
摘要
Abstract
目錄
引言
1 文獻(xiàn)綜述
    1.1 雌激素在腦內(nèi)的合成分泌
    1.2 雌激素受體依賴與非依賴的作用方式
        1.2.1 雌激素受體依賴的作用方式
        1.2.2 雌激素受體非依賴的作用方式
    1.3 雌激素在不同中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病中的作用
        1.3.1 雌激素與阿爾茨海默氏病
        1.3.2 雌激素與帕金森氏病
        1.3.3 雌激素與缺血性腦卒中
    1.4 展望
2 ER-α36在原代培養(yǎng)的大鼠皮層、海馬神經(jīng)元不同發(fā)育時(shí)期的表達(dá)及胞內(nèi)分布
    2.1 前言
    2.2 材料與方法
        2.2.1 材料、試劑與儀器
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)方法
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 原代培養(yǎng)的大鼠皮層神經(jīng)元和海馬神經(jīng)元的鑒定
        2.3.2 ER-α36在原代培養(yǎng)的大鼠皮層神經(jīng)元不同發(fā)育時(shí)期的表達(dá)及胞內(nèi)分布
        2.3.3 ER-α36在原代培養(yǎng)的大鼠海馬神經(jīng)元不同發(fā)育時(shí)期的表達(dá)及胞內(nèi)分布
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
3 血清營(yíng)養(yǎng)剝奪（低血清）細(xì)胞模型的建立及其對(duì)低血清的耐受特征
    3.1 前言
    3.2 材料與方法
        3.2.1 材料、試劑與儀器
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)方法
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 血清營(yíng)養(yǎng)剝奪PC12細(xì)胞模型的建立
        3.3.2 血清營(yíng)養(yǎng)剝奪PC12細(xì)胞對(duì)低血清的耐受特征
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
4 ER-α36敲低對(duì)細(xì)胞的低濃度E₂敏感性和血清剝奪耐受性的影響
    4.1 前言
    4.2 材料與方法
        4.2.1 材料、試劑與儀器
        4.2.2 實(shí)驗(yàn)方法
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.3.1 PC12細(xì)胞生長(zhǎng)的E₂依賴與非依賴性特征
        4.3.2 ER-α36對(duì)低濃度E₂敏感性的影響
        4.3.3 ER-α36對(duì)血清營(yíng)養(yǎng)剝奪耐受性的影響
    4.4 討論
    4.5 小結(jié)
5 ER-α36敲低對(duì)PC12細(xì)胞增殖信號(hào)通路的影響
    5.1 前言
    5.2 材料與方法
        5.2.1 材料、試劑與儀器
        5.2.2 實(shí)驗(yàn)方法
    5.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        5.3.1 ER-α36介導(dǎo)的不同濃度的E₂的轉(zhuǎn)錄激活
        5.3.2 ER-α36參與血清營(yíng)養(yǎng)剝奪細(xì)胞增殖和存活信號(hào)通路的激活
        5.3.3 ER-α36介導(dǎo)E₂激活的MAPK/ERK、PI3K/Akt信號(hào)通路的交叉對(duì)話
        5.3.4 ER-α36對(duì)不同濃度E₂激活的MAPK信號(hào)通路的影響
    5.4 討論
    5.5 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄A 縮略詞
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文情況
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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